1、DB13方标卜J.月05可B、1DB13/T 605-2005花卉组培苗生产技术规程2005-04-15发布2005-04-15实施河省质量技术监督局发布DB13/T 605一F前.二-曰本标准中的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由河北省林业局提出。本标准起草单位:河北省农林科学院、河北省林业科学院、河北林业学校、河北省林业技术推广总站、河北省林业局羞金站。本标准主要起草人:及华、林艳、张海新、李银华、郑丽锦、田勤科。DB13/T 605烈泊5花卉组培苗生产技术规程1范圈本技术规程规定了河北省主要花卉组培苗生产环境的消毒灭菌、培养条件调控以及组培苗接种、继代、生根、移栽等的技术操作程序，并
2、对其生产、试验设备、设施提出了具体要求。本技术规程适用于河北省盆花和切花组培苗生产。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1花卉凡是具有一定观花、观叶、观芽、观茎、观果和观根等观赏价值，并经过技术和艺术进行栽培和养护的植物。2. 2植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官(如根、茎、叶、花、果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(体细胞和生殖细胞)以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使它们得以继续生长、分化、形成完整植株的过程。2. 3花卉组培苗以植物组织培养方法进行萦殖的花卉苗木称花卉组培苗。2. 4植物生长物质指一些调节植物生长
3、发育的物质。包括植物徽素和植物生长调节剂。2.5外植体用于组织培养的组织、器官、细胞及原生质体称为外植体。2. 6培养材料生长在培养容器内培养基上的植物材料统称培养材料。2.，培养基在植物组织培养过程中，由人工配制的提供培养材料生长所必孺的营养元素和某些生理活性物质的基质。2. 8接种将外植体经消毒灭菌后，在无菌条件下放人培养容器内培养基上的过程。2. 9增殖指外植体或继代组培苗产生出新的具有特定结构和功能的组织或器官的现象。2. 10继代是指培养过程中将培养材料周期性地分株、分割、剪截等转接于新鲜培养基上进行增殖的过程。3生产设备(施)及化学试荆3. 13.1.1生产设备(施)建筑设施1DB
4、13/T 605 -2005设计组培实验室或小型组培工厂必须选择环境优静、无污染的地方并保证其生产过程中不对周围环境造成污染。实验室或小型组培工厂各部分的配置要合理，做到工作方便、使用安全、节省能源。房屋设计包括准备室、接种室、培养室、洗涤室、实验室、贮存室、温室，另外还可配里办公室、更衣室等。3. 1. 2生产设备3. 1. 2. 1洗涤设备工厂化生产可选用自动或半自动洗瓶机，实验室或小型车间选用普通洗涤用具，如洗涤室水槽、塑料盆、塑料桶、塑料箱等，人工洗涤。另外配t干操箱、晾瓶架等。3. 1.2.2灭菌设备高压燕汽灭菌锅(大型卧式、中型立式、小型手提式)、器械消毒器、萦外灯、供干箱、徽滤孔
5、器等。3.1. 2. 3接种设备及工具超净工作台、摄子、剪刀、解剖刀、接种针、钢丝架、酒精灯等。3. 1.2.4培养设备培养容器(三角瓶、峨头瓶、专制塑料瓶、试管等)、培养架、振荡和旋转培养机、空调、光照培养箱等。3. 1. 2. S实验设备冰箱、燕馏水器、电子天平、架盘天平、pHS. 0 7. 0精密试纸、酸度计、温湿度表、照度计、盛装器皿(烧杯、试剂瓶等)、计公器皿(量筒、容址瓶、移液管等)以及其他实验室常用器具等。3. 1.2.6细胞学观察设备体视显徽镜、解剖镜、高倍显徽镜，有条件的还可钩!显徽照相设备、侧微尺等。3. 2常用化学试剂3. 2. 1洗涤剂选用无污染洗衣粉、洗洁精、去污粉等
6、。3.2.2灭菌剂选用酒精、氛化汞、次抓酸钠、高锰酸钾、甲醛、过氧乙酸、新洁尔灭、来苏水、抗菌素等。3.2.3无机盐类和有机物类常用培养基如MS, B5, N6等大盆元素和徽量元素所规定的无机盐类和有机物类;或者根据试管苗生产所用培养基种类购里所需化学试剂。常见培养基成分见附录Ao3. 2. 4植物生长物质细胞分裂素:6一节基氮基嚷吟(6一BA)、激动素( KT)、玉米素(ZT) , 2一异戊烯腺嗓吟( Zip)等。细胞生长素:叫噪丁酸(IBA) ,蔡乙酸(NAA),叫噪乙酸(IA.A) , 2, 4一二抓苯载乙酸(2, 4-D)等。赤霉素:GA3等。乙烯:C2H4o3.2.5碳水化合物蔗糖或
7、食用砂糖。3.2.6固化剂可选用以下任何一种:组培专用培养基固化剂、徽生物多糖固化剂、琼脂等。3. 2. 7培养基附加成分为促进试管苗的生长，有时培养基中还可加人以下附加成分，氮羞酸、水解乳蛋白(LH)300m岁L SOOmg/L、水解酪蛋白(CH ) 200mg/L一SOOm岁L以及腺嗦岭(ADE ) 1 mg/L一80mg/L2DB13/T 605 -2005等。4消毒灭菌操作规程4.1洗涤室的消毒灭菌每天用来苏水、过载乙酸等喷洒地面，保持室内清洁。4. 2接种室的消毒灭菌接种前用紫外灯照射20min一30min，并定期(一般7d)用高锰酸钾及甲醛混合燕燕。4. 3培养室的消毒灭菌一般7d
8、左右用高锰酸钾及甲醛混合燕燕，或用7096酒精喷雾消毒，也可选用广普性杀菌烟雾荆燕蒸。4. 4超净工作台的消毒灭菌接种前用紫外灯照射ZOmin 30min，并用7096酒精喷洒台面，或用新洁尔灭攘拭台面;定期清洗超净工作台过滤膜以保证过滤膜清洁。4. 5培养基的消毒灭菌高温高压燕汽消毒，通常在压力1. 1 kg/cm、温度121条件下保持15min一即可。4. 6接种器具的消毒灭菌使用前进行燕气消毒;接种过程中采用小型灭菌器或用酒精灯灼烧消毒。4. 7污染的瓶苗消毒灭菌用消毒锅高温高压消毒，然后再清洗培养容器。5培养室环境调控5.1温度培养室温度应控制在25C t绝;可根据培养物所播的最适温度
9、进行调节。5.2湿度培养室保持70%一80%的相对湿度。5. 3光照一般培养室光照强度控制在1 SOOIx一3 OOOIx，可根据培养物的播光特性调整光照强度;工厂化生产时，为降低成本可考虑利用自然光照。6组培苗生产操作规程6. 1培养基的配制6.1.1培养基选择根据培养材料生长发育特性选择合适的基本培养基种类和激素配比。(常见培养基见附录A)o6. 1. 2母液的配制和保存6. 1. 2. 1母液的配制根据生产情况，母液可以配制成单一化合物母液，也可以配制成几种化合物的混合母液。大量元素母液配制SO倍，徽盘元素母液配制100倍，植物生长物质配制浓度0. Smg/ml一1. Omg/ml，植物
10、生长物质的配制方法见附录B,6. 1.2.2母液的保存母液配制好后，存放4的冰箱中。6. 1. 3培养基配制程序准备好母液、蒸馏水、蔗糖、固化剂等，按以下程序制作。6. 2培养材料及消毒3DB13/T 605 -20056. 2.1培养材料的选择和确定可以选取生长健壮、无病虫害、能保证原品种优良性状的植物体的任何部位，如茎尖、茎段、叶片等，还可根据需要，采用根、花瓣、麟茎、花粉、花药等部位来培养。6. 2. 2外植体的消毒灭菌消毒液种类、浓度及消毒时间的长短需根据材料种类、部位及老、嫩程度确定，以达到最佳的消毒效果。可以根据材料部位选择以下方法:茎尖、茎段及叶片等的消毒:70%酒精浸泡数秒钟，
11、无菌水冲洗2一3次，再用0. 5%一2%的次抓酸钠浸泡lOmin15min，用无菌水冲洗3次后接种。种子的消毒:70%酒精迅速漂洗一下，果实用2%的次抓酸钠浸泡lOnun，无菌水冲洗2次一3次后接种果实内的种子或组织;种子先用0. 5%一2%的次级酸钠浸泡20min一30min或用0.1%的升汞消毒0. Smin一Smin，用无菌水冲洗3次后接种。根及地下部器官的消毒:O. loo “ 0. 2%的升汞消毒SminlOmin,或用2%的次级酸钠浸泡lOmin一15min，然后用无菌水冲洗3次一5次后接种。6. 3初代培养6. 3.1初代(诱导)培养基1/3MS +6一BAO. 2mg/L +
12、IBAO. OZmg/L为花卉组培苗常用初代培养基之一。可以根据培养的植物种类、接种部位具体调整。6.3.2外植体的接种培养材料经过消毒后，在无菌滤纸上切割成所需大小，然后进行接种。6. 4组培苗的增殖与继代培养培养材料的增殖类型最好采用侧芽和丛生芽增殖类型。在培养基中添加植物生长物质是组培苗增殖的主要手段，植物生长物质的使用浓度和作用参见附录B,组培苗的不断增殖通过周期性的继代培养来实现，继代培养周期根据培养苗种类及生长情况而定，一般30d继代1次，亦可根据需要20d一90d继代1次。6. 5组培苗生根6. 5.1瓶内生根6.5.1.1生根材料的选择在继代培养的组培苗中剪取或切取生长健壮、叶
13、色正常、叶片舒展、适于生根的无根苗，接种在生根培养基上进行生根培养。6.5.1.2诱导生根采用生长素诱导组培苗生根，一般使用种类和浓度参见附录B。极难生根的植物可采用二步生根法，第一步采用附加高浓度生长素的培养基诱导根原基的形成，第二步采用无激素的培养基诱导根的伸长。采用二步生根法时第一步通常黑暗培养，第二步豁要光照培养。6.5.2瓶外生根6. 5. 2. 1瓶内诱导瓶外生根无根苗接种到生根培养基上，当基部出现突起，即根原墓形成后，直接炼苗移栽，使根的伸长在基质中进行。6.5.2.2瓶外生根(徽扦擂)把继代培养的组培苗作为徽型插条，用一定浓度的生长素如NAA, IBA或ABT生根粉(一般100
14、ppm一800ppm)速能或浸泡，扦擂到消毒后的无土基质中，基质多采用挂石、草炭、珍珠岩或混合基质等。注意温度、湿度等环境条件，初期相对湿度要求高于卯%，以后逐渐降低相对湿度在60%一80%之间。6. 6组培苗炼苗移栽4DB13/T 605 -20056. 6.1组培苗炼苗组培苗在移栽前将培养瓶放!沮室自然徽射光下，温度控制在2590 t 39C ,闭口炼苗7d左右，去掉瓶盖再拣苗3d -5d，然后再移栽。.6. 2组培苗移栽用极子将生根苗从培养瓶中取出，洗去墓部培养基，在吕加倍多菌灵溶液中授泡30min后移栽到羞质中。墓质采用握石、草炭、珍珠岩或混合羞质等。控制沮度259C t 29C，相对
15、湿度前期80909b，以后逐渐降低湿度。当试管苗根系发达、形成侧须根以后，可以移栽到营养钵中，成为容器苗。6.，移栽苗管理6. 7.1肥、水管理组培苗移栽7d后开始喷施专用营养液，也可以喷施N一P一K比例为I: 1 Z的复合肥营养液，浓度一般不高于0. 5%，施肥浓度可随粉苗麟的增加适当加大;墓质不宜太湿，以裸在手中指间不滴水为原则，喷水与施肥相结合。6.7.2病虫害防治a)温室使用前彻底消毒，用硫欲、百菌清烟多荆熏燕3 4次，沮室使用后经常用福尔马林、来苏水消毒。幻加强通风，每而7d喷一次广普性杀菌荆。c)一且发现虫容、病容及时药物治疗。5DB13/T 605 -2005附录A(资料性附录)
16、常用培养若成分衰单位:mg/L)培养基成分Mursshi李和Skoog( MS)(1962)Gambc峪(助)(1968)朱至清( N6)(1975)er和B()(19砧)Ch“和Pool( C,D)(1980)赵感祥(ASH)(1986)曹孜义等 )(1986)NH.)s.N氏NODKNOTCaCh.2凡0MgSO,7氏0aNaHz PO,.Hz0Nal HPO,Ca( N03):4H2016阳1 900利037017013425加!匆250150肠32 8301661钻月加1砧019以，礴佣3701701 65019以】370170，伪吕259乃rBT,18585671 2501阳!25I
17、朽瓶EDTAFeSO,7氏0Fe - EI7T人37. 327. 837. 327. 837. 3灯.837. 327. 837. 327. 82.5df砧13. 9Mn5幻.4Hz0ZnSO,.7从0H BOAKINaz MoO,.2残OCuSU,.SIiOCa口，.6氏O22. 3S. 66. 20. 83o.乃,ate.o.位5102. 03. 00. 7so. uo. o2so.位54. 43. 81. 60. 8左.38. 66. 20. 830. 2So. oaso. ozs0.肠8. 66. 20. 2so. orso. o2s2. 231. Os0. 620. 0830. 0乃
18、o.加乃o.加u1.01.s0. 37so. oiuo. oasv$,烟成v氏肌醉甘氛酸泛酸钙o. io. so. sioo2. 0! 01. 01. 01oo10. 50.520. 41co38555.50. 5O.麟0.仍0. OS100. 2o1125蔗糖30 000为0以50仪幻30仪沁沁仪沁15仪f0巧仪幻pHS. 8S. 5S. 85. 85. 75. 85. 96DB13/T 605一2005附录B资料性附录)常用植物生长物质(单位:mg/L )类别种类配制方法常用浓度(mg/L)功能细胞分裂素6 - BA先用少盆aSN一1. ON的盐破( HCl)洽解，然后加燕摘水定容。0.1
19、.20“细胞性与扩大，诱导芽的分化，促进侧芽萌长，抑制顶端优势，常与生长索配合使用，用以侧节细胞分裂、细胞伸长、细胞分化和器官形成。0.05 -20公 f0.05-20Zr0.仍-2. 02iP生长素1人A先用少f 1. ON的KOH或NaOH溶解，然后加燕抽水定容。0.11. 0促进细饱伸长生长和细胞分裂0.5-5.0促进不定根和侧根形成】BA0. OS1. 0促进细胞仲长生长和细胞分裂0.2-5.0促进不定根和侧根形成NAA0. 0l -0. S促进细胞生长和扩大0.2-2.0促进生根2, 4-D0. 0l -0. S诱导愈伤组织和胚状体的产生赤霉众以，先用少盆酒精溶解，然后加水定容.0.0-0.2诱导细胞伸长生长乙始乌H,促进芽的诱导和生长7的00刊|的0.卜门一80
