1、ICS 65.120 B 46 DB13 河北省地方标准 DB13/T 1384.22011 饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定 Determination of strain/tetracycline/ aureomycin in feed 2011 - 05 - 10 发布 2011 - 05 - 20 实施河北省质量技术监督局 发布DB13/T 1384.22011 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北医科大学、北京出入境检验检疫技术中心、河北省饲料
2、产品质量监督检验站。 本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、沈磊、米振杰、贾茜、李志平、马春玲、张敬轩、高振同、武英利。 DB13/T 1384.22011 1 饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定 1 范围 本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素的液相色谱 -串联质谱测定方法。 本标准适用于饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定。 本标准的方法检出限：50 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析
3、实验室用水规格和试验方法（ GB/T 66821992， neq IS0 3696：1987） 3 原理 试样提取液经离心后，上清液用 Oasis HLB 固相萃取柱和阴离子交换柱净化，液相色谱 -串联质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 盐酸。 4.4 0.4 mol/L 盐酸溶液：准确量取 32.8 mL 盐酸于 1 000 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀。 4.5 草酸。 4.6 0.01 mol/L 草酸甲醇溶液：准确称取草酸 1.26 g，用甲醇溶
4、解并定容于 1 000 mL 容量瓶中。 4.7 甲酸。 4.8 甲酸溶液：准确量取 4 mL 甲酸于 1 000 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀即可。 4.9 土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度95。 4.10 土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液：0.1 mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、标准物质，分别用甲醇配成 0.1 mg/mL 的标准储备液。储备液贮存在-18冰柜中。 4.11 土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液：根据需要吸取适量土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液，基质混合标准工作溶液在 4保存，可使用三
5、天。 4.12 Oasis HLB 固相萃取柱或相当者：500 mg，6 mL。使用前分别用 5 mL 甲醇和 10 mL 水预处理，保持柱体湿润。 DB13/T 1384.22011 2 5 仪器 5.1 液相色谱-串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源。 5.2 分析天平：感量 0.l mg 和l mg 各一台。 5.3 旋涡混匀器。 5.4 固相萃取仪。 5.5 高速离心机。 5.6 具塞锥形瓶：50 mL。 5.7 离心管：50 mL，5 mL。 5.8 氮吹仪。 5.9 旋转蒸发器。 6 试样的制备 6.1 提取 准确称取3.0 g样品（准确至0.01 g） ，置于50 mL具塞锥形瓶中
6、，加入甲醇10 mL，旋涡混匀1 min，加入盐酸溶液（4.4）30 mL，旋涡混匀1 min，超声20 min，移至50 mL离心管中，5 000 r /min离心10 min，取上清液，待净化。 6.2 净化 取10 mL上清液与40 mL水稀释混匀，再移入下接Oasis HLB柱的贮液器中。溶液以小于1.0 mL /min的流速过柱，然后依次用甲醇 -水溶液（4.9）淋洗，减压抽干20 min。用草酸甲醇溶液（4.6）5 mL洗脱，收集洗脱液于40减压旋转蒸发至干 ,用1.0 mL 流动相溶解残渣，12 000 r /min离心10 min，经0.45 m有机滤膜过滤后，待测。 7 测定
7、步骤 7.1 测定 7.1.1 液相色谱条件 色谱柱： Inertsil C8，3.5 m，150 mm2.1 mm（ i.d）或相当者； 流动相：乙腈甲醇0.4甲酸溶液（18478） ； 流速：0.2 mL/mim； 柱温：25； 进样量：20 L。 7.1.2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测； 电喷雾电压、碰撞电压等条件优化至最佳值； 定性离子对、定量离子对见表 1。 DB13/T 1384.22011 3 表1 三种四环素族抗生素定性离子对、定量离子对 土霉素 四环素 金霉素 定性离子对 /（ m/z） 461/426 461/443 46
8、1/381 445/410 445/154 445/428 479/444 479/154 479/462 定量离子对 / m/z） 461/426 445/410 479/444 7.1.3 液相色谱-串联质谱测定 用土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液溶度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。土霉素、四环素、金霉素标准总离子流图见附录 A。 7.2 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.3 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。
9、 8 结果计算 结果按式（1）计算： 10001000=mVcX 式中 ： X试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（ mg/kg） ； C从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（ g/mL） ； V样品溶液最终定容体积，单位为毫升（ mL） ； M样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（ g） 。 注：计算结果应扣除空白值。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20。 . . . (1) DB13/T 1384.22011 4 A A 附 录 A （资料性附录） 三种四环素族抗生素标准物质总离子流图 1土霉素，3.31 min 2四环素，3.92 min 3金霉素，8.02 min _
