1、ICS 65.020.20 B 05 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 22832015 大花萱草工厂化育苗生产技术规程 2015 - 12 - 25发布 2016 - 02 - 01实施河北省质量技术监督局 发 布DB13/T 22832015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北省林业厅提出。 本标准起草单位：河北省林业科学研究院。 本标准主要起草人：赵玉芬、储博彦、尹新彦、李金霞、刘满光、郝建清、张永信、徐晓娜、张军霞、李国松、王乃泽。 DB13/T 22832015 1 大花萱草工厂化育苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了
2、大花萱草工厂化育苗生产的组培工厂的设计要求、所需的仪器设备及化学试剂、生产工艺流程、生根与移栽管理、质量分级及包装、标志、运输等内容。 本标准适用于大花萱草工厂化育苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 2063-2012 萱草种苗生产技术规程 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 组培工厂的设计要求、所需的设备、器材及试剂 按照 NY/T 2306-2013中4.14.2执行。 4 瓶苗生产工艺流程 4.1 品种选
3、择 选择市场流行的品种，见附录A。 4.2 母株资源保存 将大花萱草母株种植在特定区域，加强肥水管理，确保植株健壮，防治病虫害，减少植株表面附带的微生物和害虫。 4.3 培养基选择与母液配制 4.3.1 培养基选择 根据大花萱草不同品种和外植体部位选择合适的培养基种类和激素配比。以MS和1/2 MS(大量元素减半)为基本培养基。参见附录B。 4.3.2 基本培养基母液配制和保存 按照 NY/T 2306-2013附录G执行。 4.3.3 植物生长调节剂的母液配制和保存 按照 NY/T 2306-2013附录H执行。 DB13/T 22832015 2 4.4 培养容器和接种器械的清洗 按照 N
4、Y/T 2306-2013中6.1和6.2 执行。 4.5 培养基制作 4.5.1 配制 根据培养基成分准备好蒸馏水、琼脂、蔗糖和各类母液等。制作1L培养基加蒸馏水700mL（按所需容量的70%左右），再加入琼脂4gL-16 gL-1，加热搅拌使琼脂融化。加砂糖30gL-1， 糖溶解后，根据预配母液取量，再根据要求加入激素若干，并充分搅拌均匀后，加蒸馏水定容至1L。用pH计或pH试纸测pH值，用0.1molL-1的HCl或0.1 molL-1的NaOH调节pH至为5.86.0。生产中根据所需容量按比例配置。 4.5.2 分装 根据不同需要定量分装，如150mL的培养瓶，每瓶分装约30mL40m
5、L。分装培养基时勿将培养基沾在培养瓶瓶口。 4.5.3 高压灭菌 培养基分装后应在10h内进行湿热灭菌；灭菌条件一般在1.1kgcm-21.2kgcm-2、121下，灭菌18min20min。 4.5.4 贮存 灭菌后的培养基应注明培养基编号及配制日期，储存于培养基储藏室内，存储时间不应超过10d。 4.6 接种操作 按照NY/T 2306-2013中10.110.11执行。 4.7 培养室操作 按照NY/T 2306-2013中11.111.5执行。 4.8 外植体选择、灭菌及接种 4.8.1 外植体的选择 从健康植株上选取1.5cm2.5cm花蕾做外植体最好。也可采用大花萱草的茎芽、幼嫩花
6、序轴上带节点区段为外植体。 4.8.2 外植体消毒 将整理好的外植体，用餐具洗涤剂溶液浸泡并振荡5min10min，然后自来水冲洗30min。在超净台上将预处理后的外植体放在有盖容器中，倒入75%酒精溶液中浸泡10s30s，用无菌水冲洗外植体3次。再用0.1%的HgCl2溶液浸泡8min10min，或者5%次氯酸钠溶液浸泡20min30min，用无菌水冲洗35次后备用。升汞安全管理方法按照危险化学品安全管理条例执行。 4.8.3 外植体接种 DB13/T 22832015 3 在超净工作台上用手术刀和镊子将外植体切割成所需大小，一般切去花蕾顶部，留花托近1.0cm左右，纵切为2块；茎芽1.0c
7、m1.5cm，幼嫩花序轴上带节点区段取0.5cm1.0cm。接种到初代培养基上。每瓶接种1个外植体。 将品种代号、培养基类型、接种人员以及接种日期认真标示到瓶上；放入培养室进行培养。 4.9 初代培养 培养温度为232，光照强度1000 lux1500 lux，每日光照12h14h。外植体在初代培养基 培养1周后，花托基部开始膨大。培养3周后，形成淡黄或浅绿光滑的愈伤组织。 4.10 继代培养 4.10.1 不定芽分化 将愈伤组织转接到继代培养基上，诱导不定芽分化，培养条件同4.9。 4.10.2 不定芽增殖与继代 当瓶苗增加到一定数量和规模后，降低分裂激素的浓度，进行丛生芽分化培养 ，可采用
8、丛生芽切割小芽团大芽团丛生芽循环增殖的方式。150mL的培养瓶接种数量为5块/瓶，要排放均匀、整齐。每3周继代1次，增殖系数宜控制在35。 4.11 生根培养 当芽丛生长到3cm4cm左右即可进行生根培养。 将丛生芽切割单株接种于生根培养基中，在150mL的培养瓶接种数量为10株/瓶。培养15d20d后，当幼苗基部长出35条新根，根长2cm3cm长时，就可进行炼苗移栽。 5 瓶苗质量要求 5.1 整体感 苗粗壮、叶片大小协调、有层次感、色泽正常，叶色具原品种特性，无玻璃化。 5.2 根系 有新鲜根系（一般3条以上），长势好、色白健壮，根长适中，基部无愈伤组织。 5.3 苗高 苗高适中，一般4c
9、m6cm。 5.4 叶片数 具有适宜和正常的叶片数，一般不少于3片。 5.5 整齐度 同一批次90%以上的苗高达到要求的高度。 6 炼苗 DB13/T 22832015 4 将生根瓶苗置于驯化室中进行光照适应性锻炼，温度控制在232，经过3d4d的闭口锻炼后，进入移栽阶段。 7 组培苗移栽及管理 7.1 基质选择与消毒 采用50孔或72孔穴盘育苗，基质可选用泥炭土：珍珠岩：蛭石=3:1:1，用80%多菌灵可湿性粉剂0.5g.L-1溶液或0.3%0.5%高锰酸钾溶液喷透备用。 7.2 瓶苗处理 用镊子从瓶中轻轻取出生根苗，放在盛有20左右的温水中，将附着在根上的培养基清洗掉，洗时注意不能伤根，用
10、80%多菌灵杀菌剂0.5g.L-1的溶液中浸泡10min。 7.3 穴盘苗的移栽 用竹签等工具在事先准备好的穴盘上打容纳根系的孔，将组培苗的根顺延下去，栽植深度3cm4cm。 移栽后用细喷雾器喷水，使根系和基质紧密接触。插牌注明品种和日期。 7.4 苗期管理 7.4.1 温湿度及光照的管理 移栽初期，保持空气相对湿度80%左右，温度1825。光照强度控制在90molm-2s-1180 molm-2s-1（5000lx10000lx）；当试管苗再生新根后增加光照强度，降低空气湿度至60%左右，培育40d50d后，当试管苗根系发达、植株健壮、叶片达到10cm15cm左右即可出圃。 7.4.2 施肥
11、 当试管苗正常生长后，可进行叶面喷肥，喷施1/10MS大量元素溶液加0.1%的KH2PO4溶液。 8 穴盘苗的质量标准 8.1 整体感：苗健壮、挺拔和新鲜，形态完整、叶片大小协调，叶色具原品种特性、有光泽。 8.2 根系状况：具有完整而发达的根系，根系充满盆孔，能轻易拨出而基质不散。 8.3 苗高：一般10cm15cm。 8.4 叶片数：具有较多的叶片数，一般4片以上。 8.5 整齐度： 同5.5。 8.6 病虫害损伤：无检疫性病虫害，亦无病虫害危害症状。 9 包装、标志和运输 9.1 包装 DB13/T 22832015 5 将穴盘装在小纸箱内，再将小纸箱装入大纸箱中，每箱装4张穴盘，高温季
12、节，包装箱内最好加冰袋。 9.2 标志 每箱应贴上标签，注明品种、等级、规格、数量、产地、出苗日期、注意事项等。 9.3 运输 装车时切勿倒置，用厢式货车运输以避免日晒、雨淋，运输途中温度保持1025，保持湿度30%60%，5d内到达目的地。 DB13/T 22832015 6 A A 附 录 A （资料性附录） 市场流行品种及主要特征 A.1 市场流行品种及主要特征见表A.1。 表A.1 品种 主要特征 海尔范Hemerocallis Frans Hals 根茎短，常肉质。株高约63.6cm，叶基生、宽线形，叶宽2.3cm，长达94cm，背面有龙骨突起，绿色。花上位，内花被红色，花肋黄色，外
13、花被黄色，花喉黄色；复色花。花径 12cm ，为百合状花冠，花被基部合生呈筒状；花薹从中部抽出，螺旋状聚伞花序，花葶粗壮，高 71.2cm，每葶可着花15朵，花期6月下旬至7月下旬。生命力强盛，分蘖能力强，耐瘠薄、抗病虫害能力强。 奶油卷 Hemerocallis Betty Woods 根茎短，常肉质。奶油卷叶丛高45cm50cm，叶宽2cm3cm米，属常绿型，重瓣，呈牡丹型，鹅黄色，直径可达 8cm10cm，变种呈浅酱黄色。花葶从中部抽出，花葶粗壮，高 40cm45cm，每葶可着花68朵。花期6月下旬至8月中下旬。为大花萱草珍品，分蘖能力差，喜阳光，耐半阴，抗旱、抗寒、抗病虫能力强，适应性
14、广。 红运Hemerocallis Baltimore Oriole 根茎短，常肉质。株高约32.4cm，叶基生、宽线形，叶宽2.6cm，长达51.8cm，背面有龙骨突起，深绿色。花上位，红色，花喉黄色。花径 8cm10cm ，为百合状花冠，花被基部合生呈筒状；花薹从中部抽出，螺旋状聚伞花序，花葶粗壮，高50cm，每葶可着花1015朵，花期6月中下旬至8月上旬。生长势强，分蘖能力中等，喜阳光，耐半阴，抗旱、抗寒、抗病虫能力强，适应性广。 东方不败Hemerocallis Peachy Pink Repeater 根茎短，常肉质。叶丛高35cm40cm，叶基生、宽线形、对排成两列，宽2cm3cm
15、，长可达50cm以上，背面有龙骨突起，嫩绿色。花上位，复色，花瓣外卷呈粉红色，有光泽，皱褶，花心带有金黄晕，色泽娇艳。花朵硕大花径10 cm 12.5cm，裂片翻卷，为百合状花冠，花被基部合生呈筒状；花薹从中部抽出，螺旋状聚伞花序，花葶粗壮，高40 cm50cm，每葶可着花613朵，花期6月中旬至8月中旬。生长势强，分蘖能力强，喜阳光，耐半阴，抗旱、抗寒、抗病虫能力强，适应性广。 红宝Hemerocallis Pardon Me 根茎短，常肉质。株丛高35cm40cm，具短根状茎，叶长30cm40cm，叶宽2cm3cm，叶片浓密。螺旋状聚伞花序，花上位，单瓣，深红色，花被基部合生呈筒状；花径约
16、 5cm6cm，花葶从中部抽出，高40cm左右，每个花序可着花10朵以上。花期6月8月。分蘖能力强，喜阳光，耐半阴，抗旱、抗寒、抗病虫能力强，适应性广。 盛夏红酒Hemerocallis Summer Wine 根茎短，常肉质。植株高48.4cm，叶基生、宽线形、对排成两列，宽22.9cm，长可达50.8cm以上，背面有龙骨突起，嫩绿色。花上位，红色，花喉黄绿色，为复色花。花径14cm，裂片翻卷，为百合状花冠，花被基部合生呈筒状；花薹从中部抽出，螺旋状聚伞花序，花葶粗壮，高49cm，每葶可着花813朵，花期6月上旬至8月中旬。生长势强，分蘖能力强，喜阳光，耐半阴，抗旱、抗寒、抗病虫能力强，适应
17、性广。 DB13/T 22832015 7 B B 附 录 B （资料性附录） 大花萱草不同品种外植体选择及培养基配方 B.1 大花萱草不同品种外植体选择及培养基配方见B.1。 表B.1 单位：mg.L-1品种 外植体 初代培养基 增殖培养基 生根培养基 海尔范Hemerocallis Frans Hals 花蕾 1/2MS+ 6-BA2.03.0 + IBA0.2 MS+6-BA1.5 + IBA0.2 MS+6-BA0.3 + IBA0.1 1/2MS+ IBA0.5 茎芽、带节点的花序轴区段 1/2MS+ 6-BA1.5 2.0+ IBA0.2 奶油卷 Hemerocallis Bett
18、y Woods 花蕾 1/2MS+ 6-BA3.0 + IBA0.2 MS+6-BA1.5 + IBA0.2 MS+6-BA0.3 + IBA0.1 1/2MS+ IBA0.5 茎芽、带节点的花序轴区段 1/2MS+ 6-BA2.0 + IBA0.2 红运Hemerocallis Baltimore Oriole 花蕾 1/2MS+ 6-BA2.03.0 + IBA0.2 MS+6-BA1.5 + IBA0.2 MS+6-BA0.3 + IBA0.1 1/2MS+ IBA0.3 茎芽、带节点的花序轴区段 1/2MS+ 6-BA1.5+ IBA0.2 东方不败Hemerocallis Peach
19、y Pink Repeater 花蕾 1/2MS+ 6-BA1.52.0 + IBA0.2 MS+6-BA1.5 + IBA0.2 MS+6-BA0.3 + IBA0.1 1/2MS+ IBA0.5 茎芽、带节点的花序轴区段 1/2MS+ 6-BA1.5 + IBA0.2 红宝Hemerocallis Pardon Me 花蕾 1/2MS+ 6-BA1.52.0 + IBA0.2 MS+6-BA1.5 + IBA0.2 MS+6-BA0.5 + IBA0.1 1/2MS+ IBA0.5 茎芽、带节点的花序轴区段 1/2MS+ 6-BA1.5 + IBA0.2 盛夏红酒Hemerocallis Summer Wine 花蕾 1/2MS+ 6-BA3.0 + IBA0.2 MS+6-BA1.5 + IBA0.2 MS+6-BA0.3 + IBA0.1 1/2MS+ IBA0.5 茎芽、带节点的花序轴区段 1/2MS+ 6-BA2.0 + IBA0.2 _
