1、B43in lop秦皇岛市地方标准DB1303/T 188-2005牛冷冻胚胎移植技术规程2005-10-31发布2005-10-31实施秦皇岛市质量技术监督局发布DB 1303汀188- 2005月I j吕木标准由秦皇岛市畜牧局提出；本标准在秦皇岛市畜牧局归口；本标准起草单位：秦皇岛市畜牧丨：作站。本标准起草人：郑庆丰、郭瑞芬、鲍淑琴、孙红梅。DB 1303门188-2005牛冷冻胚胎移植技术规程范围本规程规定了牛冷冻胚胎移植的受体牛的选择及饲养管理、受体牛的同期化发情处理、受休牛的发情鉴定、受体牛的胚胎移植、妊娠受体牛的饲养管理。本规程适丿I一于秦皇岛市规模养牛场户的高产优质冷冻胚胎的移植
2、。2受体牛的选择及饲养管理2. 1受体牛的选择2.1.1选择时间选择时间宜确定在实施胚胎移植以前2个月左右（即2个发情周期），以便于观察受体牛的发情周期。2.1.2品种受体牛的品种应以体型人小与供体牛相符的黄牛及其改良品种为宜。2.1.3年龄一般要求受体牛年龄在3岁一6岁之间。2. 1. 4体躯结构体型外貌良好、丰满；长、宽、深发育充分；身体前、中、后躯，胸深、四)l比例协调；具有良好的乳房；被毛要有光泽。2. 1.5体况选择发育中等以上水平的个体，有较明显的品种特征，肢势端i上，年龄与体重相吻合，膘情在7成以上，体格健壮、健康无病，具有很好的耐病力。2.1.6繁殖性能应充分了解该牛的繁殖性能
3、及是否患有繁殖机能疾病。选择经产牛时，应选择分娩在90大以上，产犊性能和哺乳能力良好，无流产史的牛，同时应了解其发情周期是否正常、已产胎次、上一胎产犊时间及数量、Ll前是否受孕等情况，对：1飞繁殖性能差、有繁殖机能疾病、二次人匕受精不受胎或已受孕的牛坚决不能选）月。2. 2受体牛的饲养管理2.2. 1受体牛的饲养受体牛在移植前6周一8周开始补饲，根据首体牛的膘情日喂精料1.5kg左右，保持日增重(0. 3-0.4)kg日。在日粮组成中若不添加苜蓿，则豆饼等蛋白饲料应r片20-25%,添加首ru至粗饲料喂量的40%时，豆饼给量可降到18-20%。玉米占45左右，麸皮20%左右为宜。钙磷比例要合适
4、，如添加磷酸氢钙可片精料I-1. 5%。食盐添加量0. 5-1%，同时保证微量元素及维生素足量供给。2.2.2受体牛的管理受体牛单独911群饲养，保持环境相对稳定，避免应激反应。3受体牛的同期化发情处理3. 1同期化处理之前的准备对受体牛进行直肠触摸，检查卵巢是否处于活动状态。处于活动状态的牛方可进行同期化发情处理。3. 2同期化发情处理用药品及剂量DB 1303/T 188-2003药fill:氯前列烯醇(IG, 0. 2mg/2耐支）；刘量；经产2卜(0.3-0. 4) mg次，育成牛(0.2-0.3)Big次。缺乏VA. H. H. I：的季节，在注射PG时同时注射VA. II. U.
5、1针剂10m.1/头，但两种药u：不能在同一位置注射。3. 3同期化发情处理的方法采川三次注射法肌注）：第一次注射，在任意一大：第一次注射，在第一次注射后11大。第二次注射后24小时一小时观察发情。第一次注射观察发情24小1丨J）沂，对发情受体牛注射促排3号12.5ug/头移植效果更佳。受体牛发情之日计为0大，6大一8天内进行）J-1)抬移植。4受体牛的发情鉴定应对受体牛跟群观察，以受体牛稳定站立接受其他丿柳爬跨为发情标准。丿卜准确记录开始站立接受爬跨的时间（以小时为单位记录）5受体牛的胚胎移植5. 1牛胚胎移植的适宜季节舍饲型牛避开最冷最热的季节，可在其他任何季节进行移植。一般以每年4月一月
6、和9月一10月比较理想。52受体移植所需器械、药品移植枪、塑料硬外套、近无菌软外套、碘酊棉球、剪毛剪, 2%利多卜因, 70%酒精棉球、5m1一次性注射器、卫生纸5. 3受体牛移植操作步骤5.3.1受体牛在发情后6大一8大之间均可进行移植（发情之时定为0小时）。移植前对受体牛进行直肠触摸，检查黄体是否合格。合格者）丨11：移植。5.3. 2受体牛实行1-2尾椎间硬膜外麻醉，擦拭州j I5.3. 3对照冷冻胚胎细管外记录和合格受体的发情记录，合理的搭配受体牛和胚胎。5. 3. 4角军冻胚胎5. 3.4. 1胚胎解冻所需的仪器、器材。立体显微镜, / i度计、解冻）月水杯, 0. 25ml塑料细管
7、、吸卵管、细管打11本卜、装管器、0 100mm塑料培养皿、0. 22 um钅头式细菌滤器。5. 3. 4. 25. 3. 4. 3胚胎解冻所需溶液。保存液：含0. IM牛血清自蛋白的PBS液；解冻液：1.M蔗糖保存液。胚胎解冻方法。10%一甘油保存液冷冻胚胎的解冻：胚胎空气浴（18一25C) 10秒32水浴10秒，揩二二细管一剪去细管塞一推出胚胎一解冻液4分钟一保存液，冲洗5次一6次一镜检一装管一细管装入移植枪移植（胚胎解冻后30分一45分钟内移入受体）。1. 5M乙醇保存液（含0. 1Mb糖）冷冻胚胎的解冻（直接解冻移植法）：胚胎-32水浴10秒一揩干细管用70酒精棉球擦拭细管，晾十剪去细
8、管塞一把细管装入移植枪移植（胚胎解冻后5分一8分钟内移入受体）。5.3.4.4胚胎发育期与受体移植I付间的对应关系胚胎发育期受体移植时间（发情之时为（）小时）紧缩桑甚胚( M) 6. 0大一6. 5大一7. 0大早期囊胚（E B）7 . 0人一7 . 2 5大囊胚( B ) 7 . 2 5犬7 . 5天扩张囊胚( EXB) 7. 5大8. 0大5.3. 5重新将胚胎装入0.25m1塑料细管（直接解冻移植法不需要重新装管）。5. 3. 6细管装入移植枪。DB1303汀188- 20055. 3. 7把装有细管的移植枪套上硬外套，用塑料环卡紧，再套上软外套。5.3.8将胚胎移植到受体有黄体一侧子宫
9、角的上1/3- 1/2处。539按附录A（规范性附录）做好受体移植记录。5.3. 10妊娠检查在移植后70大一90大对受体牛进行妊娠检查，对已妊娠的受体应单独饲养，避免应激反应。妊娠的受体牛的饲养管理6. 1加强饲养好娠受体在产IiU 3个月应补充足量的维生素、微量元素，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常发育，又要避免流产、难产。6. 2注重免疫防疫根据当地的疾病发生情况，有目的地注射一些疫苗，以防胎儿流产或传染病发生。同时，平1讨应做好疫病防制，保持环境卫生。DI31303/T 188-2003附录A（规范性附录）受体牛胚胎移植记录表备注技术员产犊日期营养补充及注射日期氯前列烯醇注射日期、
10、剂量发情1移植时间时间黄体状况左右胚胎数量及质量序号牛冷冻胚胎移植技术规程编制说明根据市技术监督局2005年农业地方标准制修订计划，由秦皇岛市畜牧工作站承担了牛冷冻胚胎移植技术规程的起草工作。通过深入细致的总结近年来我市牛冷冻胚胎移植技术的推广经验，并在国内同行专家指导的基础上，目前已完成了该标准的制定工作。现将起草过程的有关情况说明如下：一、制定本标准的目的和意义牛胚胎移植技术是当今世界应用于畜牧生产的高新生物技术，已被证明是一项引进优良品种、实现快速扩群的快捷、有效途径。近年来，我国为了满足奶业迅猛发展对优秀奶牛资源的需求，继牛人工授精技术之后，牛胚胎移植技术在生产中已经得到广泛的应用。生
11、产实践证明，推广应用牛胚胎移植技术加快了我市奶牛业实现跨越式发展的步伐，提高了全市奶牛的整体生产水平。但由于胚胎移植是一项高新生物技术，在实际生产过程中，虽然进行了精心组织，但经常在受体牛选择利用率、同期发情率、药物处理后可移植利用率、移植准胎率、流产及难产率五个方面里的某个或多个环节出现问题，最后往往出现产犊率低的局面。为了促进这一技术的推广，实现新技术向生产力的转化，特制定本规程。二、制定本标准的主要依据和原则自2000年以来，我站先后派专人到内蒙古大学、河北大学等院校学习高产奶牛的胚胎移植技术，并在北京相中公司、中国农科院畜牧研究所等专家的指导下进行具体的生产实践。目前，体外冻胚的移植已
12、达到了国内先进水平，并摸索出了一套适于在生产中大面积推广的实际操作经验。在本规程在制定过程中，我们在总结生产经验的基础上，借鉴了内蒙古自治区家畜改良站制定的技术规程。该标准遵循可靠、先进、实用的原则设定项目与指标，对于不适于或在当前生产中难以推广的指标均舍弃不列。三、与国内外标准比较现阶段我国部分省份制定了一些牛冷冻胚胎移植技术规程，但在规程中试演成分居多，不适于在生产中大规模的推广应用。尤其是近年来，随着在生产的不断深入开展，已远远满足不了当前生产的需要。本规程的制定，是经过多年的生产实践证明了的，适于在生产中大规模推广，尤其是适于在我市推广的技术操作。通过该标准的执行，可有效地规范当前胚胎
13、移植技术的推广，进一步提高牛冷冻胚胎移植的成功率，为促进全市奶牛业的更快发展起到积极的推动作用。牛冷冻胚胎移植技术规程审定会议纪要时间：2005年10月28日地点：秦皇岛市畜牧局会议室参加人员：郭永生闫胜刘天健丛思荭李鹤飞张志金郑庆丰李光宇常俊景编写人员：郑庆丰记录：常俊景结论：经过对牛冷冻胚胎移植技术规程的认真审议，一致同意该技术规程作为秦皇岛市地方标准发布实施，认为发布后能指导实践，提高畜牧生产水平。附：审定专家签字表补椒工，r索足公、资训窄叮bA尹窗训CJ314lwllr*Ak塞望4 k卜鬓丫户守瀚念r冷ee，戒砧奴，冬异一厂J口口日口J 隽r甲软，成娜姿tPAR U1d,毒日褪日WE瞩
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