1、 B22 承 德 市 地 方 标 准DB1308DB1308/T 1052012代替DB1308/T 1052006香菇菌种生产技术规程 2012-04-01发布 2012-04-05实施承德市质量技术监督局发布DB1308/T 1052012 I 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替DB1308/T 105-2006香菇菌种生产技术规程。与DB1308/T 105-2006相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： 将4.7.1.3栽培种的容器规格1757cm的菌袋，改为17cm35cm规格的菌袋。 本标准起草单位：平泉县食用菌办公室、平泉县技术监督局。 本标
2、准主要起草人：杨涛、王会森、李静、何桂兰、王淑芬。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： DB1308/T 105-2006。 DB1308/T 1052012 1 香菇菌种生产技术规程 1 范围 本标准规定了承德市香菇各级菌种生产的技术人员、场地选择、厂房设置和布局、设备设施、使用品种、生产工艺流程和技术要求。 本标准适用于承德市香菇菌种生产。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB4789.282003 食品卫生微生物学检验 染色法、
3、培养基和试剂 GB96871998 食品包装用聚乙烯成型品卫生标准 GB96881988 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准 NY/T5282002 食用菌菌种生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 品种 strain 经各种方法分离、诱变、杂交、筛选而选育出来具特异性、均一（一致）性和稳定性的具有同一个祖先的群体。也常称作菌株或品系。 3.2 菌种 pure culture 经人工培养并可供进一步繁殖或栽培使用的食用菌菌丝纯培养物，包括母种、原种和栽培种。 3.3 母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试
4、管为培养容器和使用单位，也称一级种、试管种。 3.4 原种 pre-culture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶或 15cm28cm 聚丙烯塑料袋为容器。 3.5 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃瓶、塑料瓶或塑料袋为容器。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。 3.6 固体培养基 solid medinm 以富含木质纤维素或淀粉类天然碳源物质为主要原料，填加适量的有机氮源和无机盐类，具有一定DB1308/T 1052012 2 水分含量的培养基。常用的主要原料有木屑、棉籽壳、秸秆、麦粒、谷粒、玉米粒等
5、，常用的有机氮源有麦麸、米糠等，常用的无机盐类有硫酸钙、硫酸镁、磷酸二氢钾等。固体培养基包括以阔叶树木屑为主要原料的木屑培养基、以草本植物为主要原料的草料培养基、以禾谷类种子为主要原料的谷粒培养基、以腐熟料为原料的粪草培养基、以种木为主要原料的木塞培养基。 3.7 种性 characters of strain 食用菌的品种特性，是鉴别食用菌菌种或品种优劣的重要标准之一。一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线和氧气的要求，抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等农艺形状。 4 技术要求 4.1 技术人员 菌种厂应有与菌种生产所需的相应专业技术人员，技术人员需与所生产菌种级
6、别相适应，并经省级主管部门考核合格。生产母种主要技术人员需有五年以上原种生产或栽培种生产实践经验；生产原种主要技术人员需有三年以上的栽培种生产实践经验；生产栽培种主要技术人员需有三年以上的菌种生产实践。 4.2 场地选择 4.2.1 基本要求 地势高燥，通风良好，排水畅通，交通便利。 4.2.2环境卫生要求 至少 300m 之内无禽畜舍，无垃圾（粪便）场、无污水和其它污染源（如大量扬尘的水泥厂、砖瓦厂、石灰厂、木材加工厂等）。 4.3 厂房设置和布局 4.3.1 厂房设置和建造 有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装室（场）、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、贮存室、菌种检验室等。厂房建造从结构
7、和功能上满足食用菌菌种生产的基本需要。 4.3.1.1 摊晒场 要求平坦高燥、通风良好、光照充足、空旷宽阔、远离火源。 4.3.1.2 原材料库 防雨防潮，防虫、防鼠、防火、防杂菌污染。 4.3.1.3配料分装室（场） 要求水电方便，空间充足，水泥地面。如安排在室外，应有天棚，防雨防晒。 4.3.1.4 灭菌室 要求水电安全方便，通风良好，空间充足，散热畅通。 4.3.1.5 冷却室 洁净、防尘、易散热，可密闭，可消毒。 4.3.1.6 接种室 要设缓冲间，防尘换气性能良好。内壁和屋顶光滑，经常清洗和消毒，做到空气洁净。内设接种箱或净化工作台。 4.3.1.7 培养室和贮存室 内壁和屋顶光滑，
8、便于清洗和消毒。培养室和贮存室墙壁要加厚，利于控温。室内清洁卫生、无直射光，有通风设备，空气流通，可人工调控。 4.3.1.8 菌种检验室 水电方便，利于装备相应的检验设备和仪器。 DB1308/T 1052012 3 4.3.2 布局 应按菌种生产工艺流程合理安排布局。 4.4 设备设施 4.4.1 基本设备 磅秤、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、洁净工作台、接种箱、调温设备、除湿机、培养架、恒温箱、冰箱、显微镜等及常规用具，产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装瓶装袋机。高压灭菌锅应使用有关部门检验的安全合格产品。 4.4.2 基本设施 配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养等各环节的设施规模要配套。
9、冷却室、接种室、培养室和贮存室都要有调温设施。 4.5 使用品种 4.5.1 品种 应使用经省级以上农作物品种审定委员会登记的品种，并且清楚种性。不应使用来源和种性不清的菌种和生产性状未经系统试验验证的组织分离物作种源生产菌种。并从具相应技术资质的供种单位引种。 4.5.2 移植扩大 母种仅用于移植扩大原种，一支母种移植扩大原种不应超过 6 瓶（袋）；一瓶原种移植扩大栽培种不应超过50瓶（袋）。 4.6 生产工艺流程 培养基配制分装灭菌冷却接种培养（检查）成品 4.7 生产过程中的技术要求 4.7.1 容器 4.7.1.1 母种 使用玻璃试管和棉塞，试管18mm180mm或20mm200mm，
10、棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。 4.7.1.2 原种 使用750ml500ml，耐126高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶，上覆牛皮纸，耐高压的聚丙烯薄膜，要求薄膜平整美观。或使用17cm35cm的高压聚丙烯塑料袋作容器。聚丙烯塑料袋应符合GB9688要求。 4.7.1.3 栽培种 使用符合 4.7.1.2 规定的容器，与原种要求相同，也可采用 17cm35cm 或 15.5 cm57cm 的聚乙烯塑料菌袋。聚丙烯塑料袋应符合GB9688要求。用丝裂或线绳扎口，要求袋口干净、扎紧、扎实。 4.7.2 培养原料 4.7.2.1 化学试剂类 这类原料如硫酸镁、磷酸二氢钾等，要使用化学纯级试剂。 4.
11、7.2.2 天然材料类 天然材料如木屑、棉籽壳、麦麸等，要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净干燥。 4.7.3 培养基配方 4.7.3.1 母种培养基 一般使用附录A 中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA），PH值6.57.5。 4.7.3.2 原种和栽培种培养基 采取以附录B.1为主的培养基，严格掌握含水量和PH值。 4.7.4 分装 母种培养基的分装量应掌握在试管长度的四分之一至五分之一，灭菌后摆放成斜面顶端距试管口不DB1308/T 1052012 4 少于50mm，原种和栽培种培养基装至距瓶口不少于60mm，灭菌后不少于45mm；
12、袋式栽培种采用装袋机装袋，应袋装紧装实，袋口干净。母种棉塞大小松紧要适度。原种和栽培种培养基的松紧度要求为上紧下松中间扎孔，便于发菌。 4.7.5 灭菌 母种的培养基配制分装后应立即灭菌；原种和栽培种培养基配制后应在 4h 内进锅灭菌。母种培养基灭菌0.11MPa0.12Mpa，30min，木屑培养基0.12Mpa，1.5h或0.14MPa0.15Mpa，1h。装容量较大时，灭菌时间要适当延长。灭菌完毕后，应自然降压，不应强制降压。常压灭菌时，在 2h 之内使灭菌室温度达到 100，保持 8h10h。母种培养基、原种培养基应高压灭菌，不应常压灭菌。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿，袋式栽培种常压灭
13、菌时，达到100保持16 h18h，做到灭菌彻底。 4.7.6 灭菌效果的检查 母种培养基置于 26恒温培养，原种和栽培种培养基经无菌操作接种于 GB4789.282003 中 4.8规定的营养肉汤培养基中，于26恒温培养，48h后检查，无微生物长出的为灭菌合格。 4.7.7 冷却 冷却室使用前要进行清洁和除尘处理。地面铺消毒过的塑料薄膜后，将灭菌后的原种瓶（袋）或栽培种瓶（袋）放置在冷却室中冷却到料温降至28以下。 4.7.8 接种 4.7.8.1 接种室（箱）的基本处理程序 清洁搬入接种物和被接种物接种室（箱）的消毒处理。 4.7.8.2 接种室（箱）的消毒方法。 用烟雾消毒剂等药物消毒并
14、用紫外灯照射。 4.7.8.3 净化工作台的消毒处理方法 先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后预净20min。 4.7.8.4 接种操作 在无菌室（箱）或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后及时贴好标签。 4.7.8.5接种室（箱）后处理 接种室每次使用后，要及时清洁，排除废气，清除废物，台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦拭消毒。 4.7.9 培养室处理 在使用培养室的前两天，采用药物消毒。 4.7.10 培养条件 适宜的培养温度2426，保持空气相对湿度在75%以下，通风，避光。 4.7.11 培养期的检查 各级菌种培养期间应定期检查，及时拣出不合格菌种。 4.7.12
15、入库 完成培养的菌种要及时登记入库。 4.7.13 记录 生产各环节应详细记录。 4.7.14 留样 留样的数量应以每个批号母种3支5支，原种和栽培种5瓶7瓶/（袋），于46下贮存，贮存至使用者在正常生产条件下该批菌种出第一潮菇。 DB1308/T 1052012 5 附录A （规范性附录） 母种常用培养基及其配方 A.1 PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 马铃薯200g（用浸出汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，PH值自然。 A.2 CPDA培养基（综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 马铃薯 200g（用浸出汁），葡萄糖 20g，磷酸二氢钾 2g，硫酸镁 0.5g，琼脂 20g，水 1000ml，PH值自然。 DB1308/T 1052012 6 附录B （规范性附录） 原种和栽培种常用培养基配方 B.1 阔叶树木屑78%，麸皮20%，糖1%，石膏1%，含水量58%2%。 B.2阔叶树木屑63%，棉籽壳15%，麸皮20%，糖1%，石膏1%，含水量58%2%。 B.3阔叶树木屑63%，玉米芯粉15%，麸皮20%，糖1%，石膏1%，含水量58%2%。
