1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 67.160.20 N622512636經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 78 年 11 月 22 日 93 年 8 月 16 日 (共 2 頁 )水果及蔬菜汁飲料檢驗法 檸檬酸之測定（酵素法） Method of test for fruit and vegetable juices and drinks Determination of citric acid by enzymatic analysis 1. 適用範圍：本標準規定水果及蔬菜汁飲料中檸檬酸之檢驗方法。 2
2、. 檢驗方法：酵素法 (Enzymatic analysis)。 2.1 裝置、器具及材料。 2.1.1 吸管；具刻度或微量吸管， 0.1 mL, 0.2 mL, 1 mL 及 2 mL。 2.1.2 比色管 1 cm 光徑，玻璃或塑膠。 2.1.3 分光光度計 (於 340 nm 下測定 )或光電比色計 (附汞燈者，於 365 或 33 4nm下測定 )。 2.2 試劑：所有試劑均以二次蒸餾水調配。 2.2.1 Glycyl-glycine 緩衝溶液： pH=7.8，溶解 Glycyl-glycine 7.13 g 於水 70 mL中，以約氫氧化鈉 13 mL (濃度為 5 mol/L)調整
3、 pH 至 7.8，再加氯化鋅溶液10 mL ( ZnCl2, 80 mg/100mL)並加水至 100 mL。此緩衝溶液儲放於 4至少可保存 4 星期。 2.2.2 NADH (-Nicotinamide-adenine-dinucleotide,reduced)溶液：稱取 NADH-Na2 30 mg 及碳酸氫鈉（ NaHCO3） 60 mg 溶於水 6 mL 中，此溶液儲放於 4至少可保存 4 星期。 2.2.3 酵素懸浮液 (MDH/LDH)：混合 0. 1mL Malate dehydrogenase (濃度為 5 mg/mL，約 6000 U/mL)、 0.4 mL Ammoniu
4、m sulphate solution (濃度為 3.2 mol/L)及 0. 5 mL Lactate dehydrogenase (濃度為 5 mg/mL，約 2750 U/mL)，此懸浮液儲放於 4至少可保存 4 星期。 2.2.4 酵素溶液 (CL)：稱取 Citrate-lyase 168 mg 溶於冰水 1 mL 中。此溶液儲放於4至少可保存 1 星期，若冷凍則可達 4 星期以上。 2.2.5 標準溶液 (0.400 g Citric acid/L)：精確稱取純檸檬酸 (Citric acid monohydrate) 43.4 mg 於水 100 mL 中，使用前新鮮製備。 2.
5、3 步驟 2.3.1 樣品製備：澄清果汁樣品直接稀釋至檸檬酸的濃度為 0.02 0.4 g/L，混濁果汁 (cloudy juice)及色澤極深之果汁亦可直接 稀釋使用，若有果肉則經過濾再使用之。 2.3.2 測定步驟。 2 CNS 12636, N 6225 光電比色槽 空白組 樣品組 緩衝溶液 (第 2.2.1 節 ) 1.0 mL 1.00 mL NADH 溶液 (第 2.2.2 節 ) 0.10 mL 0.10 mL 樣品溶液 0.20 mL H2O 2.00 mL 1.80 mL 酵素懸浮液 (第 2.2.3 節 ) 0.02 mL 0.02 mL 混合均勻，經 5 分鐘後，測樣品組
6、及空白組之吸光值 (E1) 酵素溶液 (第 2.2.4 節 ) 0.02 mL 0.02 mL 混合上述溶液，經 5-10 分鐘後，測樣品組及空白組之吸光值 (E2)，於2 分鐘後重測吸光值以確保反應完全。 2.4 計算：至小數點第二位 E1000VFVM)L(g/21=檸檬酸 E樣品 (E2 E1)空白 (E2 E1) M：檸檬酸的分子量 (192.1 g/mol) V1：在槽中的總液體量 (3.14mL) V2：在槽中的樣品量 (0.2mL) F：稀釋倍數 ：液槽之光徑距離 (1 cm) ： NADH 的吸光係數 (extinction efficient) 340nm 6.3/mmol cm Hg 365nm 6.4/mmol cm Hg 334nm 6.18/mmol cm 若所有的體積及量不變，則EEF3.016(g/L)=檸檬酸 2.5 注意事項 2.5.1 若吸光值 E11.000，則可降低 NADH 溶液的濃度。 2.5.2 若樣品中檸檬酸濃度少於 0.02g/L，則槽中之樣品量可提高至 2.0mL，水量可相對的減少，以確保在槽中的空白組及樣品組有相同的體積。 相對應國際標準： IFU Method No.22, 1985, Determination of citric acid (enzymatic) 修訂日期：第一次修訂： 80 年 6 月 25 日
