1、1 印月958月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 67.060 N638315021經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 958月24日 月日 (共3頁)食品檢驗法大豆異黃酮之測定 Method of test for foodstuffs Determination of soybean isoflavones 1. 適用範圍：本標準規定於含有大豆異黃酮之脫脂食品（粉末狀或固狀）中異黃酮含量之檢驗方法。 2. 方法 2.1 裝置 2.1.1 高效液相層析儀(high performance liquid chromatography ,HPLC)
2、2.1.1.1 偵檢器：紫外線/可見光偵檢器。 2.1.1.2 層析管柱：YMC-Pack ODS-AM S-5 m, 4.6250 mm前端加保護管或同等級品。 2.1.1.3 HPLC積分記錄器或數據處理系統。 2.1.2 水浴振盪器。 2.1.3 高速離心機。 2.1.4 減壓濃縮設備。 2.1.5 電子天平(可精確至0.0001 g) 。 2.2 試藥：醋酸、濃鹽酸溶液(12 N)採試藥級，乙腈、二甲基甲醯胺(dimethyl sulfoxide，DMSO)、甲醇採HPLC級，95%酒精或藥用酒精，去離子水，Daidzin、Glycitin、Genistin、Daidzein、Glyc
3、itein、Genistein、Malonyldaidzin、Malonylglycitin、Malonylgenistin、Acetyldaidzin、Acetylglycitin、 Acetylgenistin等12種標準品。 2.3 器具及材料 2.3.1 離心管：約30 mL，PP製，附瓶蓋。 2.3.2 濾膜：孔徑0.45 m，直徑13 mm，Nylon材質。 2.4 溶液之製備 2.4.1 0.1N鹽酸溶液：量取濃鹽酸溶液8.3 mL於定量瓶中，以去離子水定容至1000 mL。 2.4.2 80%甲醇溶液：取去離子水20 mL於定量瓶中，以甲醇定容至100 mL。 2.4.3 樣品
4、萃取液：取乙腈溶液500 mL及0.1 N鹽酸100 mL充分混勻。 2.4.4 移動相溶液：分A、B兩種。 2.4.4.1 A液：乙腈溶液，使用前先除氣。 2.4.4.2 B液(0.1 %醋酸溶液)：取醋酸1 mL於定量瓶中，以去離子水定容至1000 mL，經濾膜過濾，使用前先除氣。 2.5 標準溶液之配製 2.5.1 標準原液：分別精稱12種標準品10 mg置於燒杯，先以適量二甲基甲醯胺2 CNS 15021, N 6383 (DMSO)溶解，待溶解後移至10 mL定量瓶中再以80%甲醇定容至標線，則為所需濃度1000 mg/kg，可分裝標準原液至樣品瓶，避光凍藏，有效期限為1年。 2.5
5、.2 標準操作液：以標準原液稀釋5種濃度混合濃度，例100、50、25及10 mg/kg作為標準曲線，臨用時配製。 2.6 檢液之調製：樣品均質化後取約0.050.5 g，精確稱定，置入離心管，加入樣品萃取液10 mL，於25 振盪2小時，將萃取液於20 以4300 g (g force).離心20分鐘後取上澄液5 mL置於濃縮瓶中，於2 5減壓濃縮至微乾。以80 %甲醇溶液潤洗濃縮瓶數次，合併潤洗液，並以80 %甲醇溶液定量至10 mL，以濾膜過濾至HPLC樣品瓶，備用。 2.7 高效液相層析儀(HPLC)分析測定參考條件 注入量：20 L 移動相流速：1.4 mL/min 移動相比例 初始
6、 A液 15% B液 85% 第20分鐘 A液 20% B液 80% 第30分鐘 A液 24% B液 76% 第34分鐘 A液 24% B液 76% 第44分鐘 A液 35% B液 65% 第60分鐘 A液 40% B液 60% 第65分鐘 A液 15% B液 85% 續接下一樣品 管柱恆溫器溫度：40。 紫外線/可見光偵檢器：波長254 nm 2.8 計算 2.8.1 標準曲線之製作：由分析所得5種濃度之混合標準溶液圖譜，以波峰面積對應於濃度作圖，經線性迴歸求得直線迴歸方程式yaxb，y為波峰面積，x為濃度，a為斜率，b為截距。 2.8.2 比對樣品HPLC圖譜中各異黃酮成分，藉由標準曲線之
7、直線方程式計算出檢液中各異黃酮含量，代入以下公式，求出樣品中各異黃酮含量，單位以mg/g表示。 ()1000210g/mg=樣品重檢液中各黃酮含樣品中各黃酮含 2.9 注意事項 2.9.1 若樣品中異黃酮成分濃度過高(超過標準曲線最高濃度)，須減量重新萃取樣品分析。 2.9.2 若圖譜有與標準液相近滯留時間之波峰無法判讀，可等量添加標準品(標準液：樣品液1：1)於樣品中，以利判讀。 3 CNS 15021, N 6383 相對應國際標準：AACC Method 20-20(2001) Determination of isoflavones in soy and selected foods containing soy by extraction, saponification, and liquid chromatography
