CNS 15091-30-2008 Method of test for deep sea water - Determination of chlorophyll A《深层海水检验法-叶绿素a之测定》.pdf
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1、1 印月973月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 71.040.40 N7001-30 15091-30 經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 973月28日 月日 (共3頁)深層海水檢驗法葉綠素 a 之測定 Method of test for deep sea water Determination of chlorophyll a 1. 適用範圍:本標準規定深層海水及天然海水葉綠素 a 濃度之檢驗。 2. 分析原理簡介:葉綠素 a 樣本的分析方法是依 Welschmeyer (1994)建議改良之不加酸螢光法進行,將適量之海水樣本過濾於玻璃纖維
2、濾紙後,以 100%丙酮進行萃取,萃取液再以具有藍光光源之螢光光度計進行測量。 3. 器材及儀器 3.1 過濾器材:真空過濾系統、過濾杯組、濾紙(玻璃纖維材質,平均孔徑約 0.7 m;Whatman GF/F 或同等級產品 )、量筒、鎳子、包埋盒、錫箔紙。 3.2 定容瓶: 25 mL, 6 支; 50 mL, 2 支。 3.3 玻璃吸管: 0.5、 1、 2、 3、 4 mL 各 1 支。 3.4 離心試管: 15 mL 錐形底,具螺紋蓋。 3.5 高速離心機。 3.6 恆溫振盪培養箱:具有可維持 4的恆溫功能。 3.7 分光光度計:可解析至 0.001 A 之分光光度計 1 台。 3.8
3、吸光槽:光徑長 5 cm 或以上(石英或玻璃材質均可)。 3.9 螢光光度計:激發光波長 436 nm,放射光波長 680 nm,光源為藍光( Turner Design 10-AU Fluorometer 或同等級品)。 3.10 玻璃吸光試管:經特別篩選之玻璃試管 (直徑 13 mm、體 積 10 mL; Turner Design Company 或同等級品)。 4. 試劑及標準品 4.1 丙酮 (Acetone): 100%,層析級。 4.2 葉綠素 a 標準品:不含葉綠素 b (Sigma Chemical Inc.,#C6144 或同等級品 )。 5. 樣品過濾及保存 5.1 將適
4、量體積之樣水( 1000 mL 以上)過濾至濾紙上,真空壓力需小於 100mmHg,過濾後之濾紙樣本如未隨即進行萃取 ,則需將濾紙以錫箔紙包覆於包埋盒後,存放在溫度 -20以下的冰箱或是液態氮桶中。 5.2 濾紙樣本的保存不得超過 1 個月。 6. 標準儲備溶液的配製 6.1 葉綠素 a 標準儲備溶液 (S):將葉綠素 a 標準品(約 1 mg),以 100%丙酮溶解並定容至 50 mL,濃度 (S)約為 20000 mg m-3(g/L)。此儲備溶液可保存於溫度-20以下之冰箱約 6 個月。 6.2 葉綠素 a 工作溶液 (W):取葉綠素 a 標準儲備溶液 (S)10 mL,以 100%丙酮
5、溶解並2 CNS 15091-30, N 7001-30 定容至 50 mL,濃度約為 4000 mg m-3(g/L)。此工作溶液於製作檢量線時配製。 7. 檢量線溶液的配製:以玻璃吸管吸取工作溶液 (W)各 0.5、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0 mL,並以 100%丙酮分別定容至 25 mL,濃度分別約為 80、 160、 320、 480、 640 mg m-3(g/L)(WS15)。此檢量線溶液之真實濃度應依第 8 節標定結果修正。檢量線溶液也需於使用前才配製,濃度範圍可視樣本葉綠素 a 濃度及螢光光度計靈敏度的範圍調整。 8. 檢量線濃度之標定及計算 8.1 基線校正:將
6、100%丙酮倒入乾淨石英槽中,在分光光度計中進行 Baseline 歸零校正。 8.2 分別第 7 節所配製之檢量線溶液倒入吸光槽中,測量其在 662.7 nm 及 750 nm波長下之吸光值 (A662.7 nm、 A750 nm),使用以下列公式即可計算出檢量線標準溶液葉綠素 a 之真實濃度 (WSi)。 WSi (i=15)(mg m-3) (g/L) = 6nm750nm7.66210b)AA(: specific extinction coefficient, 88.15 L g-1cm-1(Jeffrrey-Humphrey, 1975)。 b:石英吸光槽長度 (cm)。 9. 標
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