1、1 印月973月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 71.040.40 N7001-30 15091-30 經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 973月28日 月日 (共3頁)深層海水檢驗法葉綠素 a 之測定 Method of test for deep sea water Determination of chlorophyll a 1. 適用範圍：本標準規定深層海水及天然海水葉綠素 a 濃度之檢驗。 2. 分析原理簡介：葉綠素 a 樣本的分析方法是依 Welschmeyer (1994)建議改良之不加酸螢光法進行，將適量之海水樣本過濾於玻璃纖維
2、濾紙後，以 100%丙酮進行萃取，萃取液再以具有藍光光源之螢光光度計進行測量。 3. 器材及儀器 3.1 過濾器材：真空過濾系統、過濾杯組、濾紙（玻璃纖維材質，平均孔徑約 0.7 m；Whatman GF/F 或同等級產品 )、量筒、鎳子、包埋盒、錫箔紙。 3.2 定容瓶： 25 mL， 6 支； 50 mL， 2 支。 3.3 玻璃吸管： 0.5、 1、 2、 3、 4 mL 各 1 支。 3.4 離心試管： 15 mL 錐形底，具螺紋蓋。 3.5 高速離心機。 3.6 恆溫振盪培養箱：具有可維持 4的恆溫功能。 3.7 分光光度計：可解析至 0.001 A 之分光光度計 1 台。 3.8
3、吸光槽：光徑長 5 cm 或以上（石英或玻璃材質均可）。 3.9 螢光光度計：激發光波長 436 nm，放射光波長 680 nm，光源為藍光（ Turner Design 10-AU Fluorometer 或同等級品）。 3.10 玻璃吸光試管：經特別篩選之玻璃試管 （直徑 13 mm、體 積 10 mL； Turner Design Company 或同等級品）。 4. 試劑及標準品 4.1 丙酮 (Acetone)： 100%，層析級。 4.2 葉綠素 a 標準品：不含葉綠素 b (Sigma Chemical Inc.,#C6144 或同等級品 )。 5. 樣品過濾及保存 5.1 將適
4、量體積之樣水（ 1000 mL 以上）過濾至濾紙上，真空壓力需小於 100mmHg，過濾後之濾紙樣本如未隨即進行萃取 ，則需將濾紙以錫箔紙包覆於包埋盒後，存放在溫度 -20以下的冰箱或是液態氮桶中。 5.2 濾紙樣本的保存不得超過 1 個月。 6. 標準儲備溶液的配製 6.1 葉綠素 a 標準儲備溶液 (S)：將葉綠素 a 標準品（約 1 mg），以 100%丙酮溶解並定容至 50 mL，濃度 (S)約為 20000 mg m-3(g/L)。此儲備溶液可保存於溫度-20以下之冰箱約 6 個月。 6.2 葉綠素 a 工作溶液 (W)：取葉綠素 a 標準儲備溶液 (S)10 mL，以 100%丙酮
5、溶解並2 CNS 15091-30, N 7001-30 定容至 50 mL，濃度約為 4000 mg m-3(g/L)。此工作溶液於製作檢量線時配製。 7. 檢量線溶液的配製：以玻璃吸管吸取工作溶液 (W)各 0.5、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0 mL，並以 100%丙酮分別定容至 25 mL，濃度分別約為 80、 160、 320、 480、 640 mg m-3(g/L)(WS15)。此檢量線溶液之真實濃度應依第 8 節標定結果修正。檢量線溶液也需於使用前才配製，濃度範圍可視樣本葉綠素 a 濃度及螢光光度計靈敏度的範圍調整。 8. 檢量線濃度之標定及計算 8.1 基線校正：將
6、100%丙酮倒入乾淨石英槽中，在分光光度計中進行 Baseline 歸零校正。 8.2 分別第 7 節所配製之檢量線溶液倒入吸光槽中，測量其在 662.7 nm 及 750 nm波長下之吸光值 (A662.7 nm、 A750 nm)，使用以下列公式即可計算出檢量線標準溶液葉綠素 a 之真實濃度 (WSi)。 WSi (i=15)(mg m-3) (g/L) = 6nm750nm7.66210b)AA(： specific extinction coefficient， 88.15 L g-1cm-1(Jeffrrey-Humphrey， 1975)。 b：石英吸光槽長度 (cm)。 9. 標
7、準曲線的製作：將空白液（ 100%丙酮溶液） 及檢量線溶液倒入玻璃吸光試管中，並將試管置入螢光光度計中，分別量測出空白螢光值 (Fbk)及各檢量線溶液之螢光值(F)。利用下列無截距之一元二次方程式進行統計迴歸，即可獲得葉綠素 a 濃度 (Chl a)與螢光值 (F)之相關式。 Y = aX + bX2Y：經第 8 節標定後之檢量線溶液葉綠素 a 之濃度。 X ：利用螢光光度計量測到之各檢量線溶 液扣除丙酮螢光空白值後之螢光值 (F-Fbk)。 a, b：是統計迴歸得到之係數。 10. 樣本之萃取及分析 10.1 在暗室中，將濾紙樣本放入 15 mL 的離心試管中，加入 100%丙酮 5 mL，
8、以研磨棒攪碎成泥狀後，再以 5 mL 100%丙酮將殘存在研磨棒上的濾紙泥潤洗至離心試管內，旋緊螺旋蓋，再將樣本放入 4 的恆溫震盪培養箱萃取約 8 小時。（在處理下一個濾紙樣本前，研磨棒需用丙酮潤洗拭淨）。 10.2 萃取後之樣本先回溫至室溫，以高速離心機 (4000 r.p.m 或 1000g)離心約 2 分鐘後，取 5 mL 上澄液倒入玻璃吸光試管中，用螢光光度計量得樣本之螢光值。 11. 樣本濃度計算方式：經萃取後之樣本於螢光光度計下量 測到螢光值 (F)後，可依下列公式計算出原來海水樣本所含之葉綠素 a 濃度 (Chl a)。 Chl a (mg m-3) (g/L) = a(F-F
9、bk)+b(F-Fbk)2/D F-Fbk：實測萃取樣本螢光值扣除丙酮螢光空白值。 a, b ：檢量線與螢光值相關曲線之迴歸係數。 D：濃縮倍率 =過濾樣本體積 (mL)/10。 12. 本方法偵測極限： 0.01 mg m-3(g/L)。 3 CNS 15091-30, N 7001-30 備考： 深層海水泛指位於海平面 200 公尺以下之海水，圖 1 為台灣東部深水海域使用本方法實測之海水葉綠素 a 隨深度之變化情形。 圖 1 台灣東岸台東知本深層海水葉綠素 a 濃度 (Chl a)隨深度變化之檢驗實例 (現場採樣日期、位置與海底深度： 2006 年 10 月 12 日、 121.0510
10、oE； 22.6275oN、 670 m)。 素 a (mg m-3)深(公尺)0 0.2 0.4 0.6 0.8 16005004003002001000600500400300200100000.20.40.60.81中華民國國家標準 National Standards of the Republic of China, CNS 標準（ standard）係指由特定機構針對產品、過程及服務等主題，經由共識，並經公認機關（構）審定，提供一般且重複使用之規則、指導綱要或特性之文件。中華民國國家標準（ National Standards of the Republic of China，代號
11、 CNS），係基於保護國民生命財產安全，維護自然環境衛生，維持自由公平交易以促進國內產業發展等需要，由標準專責機構 (現為經濟部標準檢驗局 )經透明化程序獲致共識所公布，提供國內相關產業、機關 (構 )及一般消費大眾參考依循；主要目的在謀求改善產品、程序及服務之品質，增進生產效率，維持生產及消費之合理化，以增進公共福祉。 國家標準化網站 國家標準檢索系統（ http:/.tw） 標準化資訊推廣平台（ http:/standards.bsmi.gov.tw） 產業技術標準管理服務平台（ http:/techstandards.bsmi.gov.tw） 全國標準化獎（ http:/www.std.
12、org.tw） 更多標準網站資訊，可於前述網站中取得聯結。 正字標記 CNS MARK 正字標記驗證制度係為推行中華民國國家標準，自民國 40 年起實施的產品驗證制 度，是依據 標準法及正字標記管理規則之規定，為落實國家標準的實施而辦理的產品驗證標記。藉由正字標記之核發，可彰顯產品品質符合國家標準，且其生產製造工廠採用之品質管理系統，亦符合相關規定。生產廠商藉正字標記之信譽，可爭取顧客信賴以拓展市場，消費者亦可經由辨識正字標記圖示，簡易地購得合宜的優良產品，權益因此獲得保障。 正字標記圖示 由中華民國國家標準之英 文代號 CNS及中文符號組成。 正字標記核准要件 工廠品質管理經評鑑取得標準檢驗
13、局指定品管制度之認可登錄。 產品經檢驗符合國家標準。 正字標記網站 正字標記推廣網站（ http:/smark.org.tw） 正字標記查詢系統（ http:/cnsmark.bsmi.gov.tw） 相關資訊 Information 發編輯：經濟部標準檢驗局 Publisher ： The Bureau of Standards, Metrology and Inspection 局 址：臺市濟南 1 段 4 號 Address ： 4 Chinan Road, Section 1 Taipei, 100, Taiwan 電 話： (02) 2343-1700 Telephone： (886-2) 2343-1700 網 址： http:/www.bsmi.gov.tw Web site ： http:/www.bsmi.gov.tw
