1、Best i m m un g des O be rf I c h en kei mg eh al tes auf E in rich t u n g s- und Bedarfsgegenstnden im Lebensmittelbereich Teil 3: Semiquantitatives Verfahren mit nhrbodenbeschichteten Entnahmevorrichtunaen IAbklatschverfahren ICs 07.100.30: 67.020 DIN - 10113-3 Deskriptoren : Oberflchenkeimzahl,
2、Bedarfsgegenstand, Lebensmittel, Einrichtungsgegenstand, Gehaltsbestimmung Determination of surface colony count on fitment and utensils in foodareas - Part 3: Semiquantitative method with culture media laminated taking up equipment (squeeze method) . Dtermination du comptage des colonies de la surf
3、ace sur objets dequipement et de consommation dans les domai- nes alimentaires - Partie 3: Methode smiquantitative avec des plats recouverts du milieu de culture (mthode de lpreuve) Vorwort Diese Norm wurde vom Normenausschu Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte, Arbeitsausschu “Veterinr- me
4、dizinische Fleischuntersuchung”, erarbeitet und mit dem Arbeitsausschu “Mikrobiologische Milchuntersuchung” abgestimmt. Anhang A ist informativ. DIN 10113 bereich” besteht aus: “Bestimmung des Oberflchenkeimgehaltes auf Einrichtungs- und Bedarfsgegenstnden im Lebensmittel- Teil 1 : Quantitatives Tup
5、ferverfahren Teil 2: Semiquantitatives Tupferverfahren Teil 3: Semiquantitatives Verfahren mit nhrbodenbeschichteten Entnahmevorrichtungen (Ab klatschverfahren) 1 Anwendungsbereich Diese Norm legt ein Verfahren zur semiquantitativen Bestimmung des Oberflchenkeimgehaltes auf Einrich- tungs- und Bedar
6、fsgegenstnden im Lebensmittelbereich fest. Als vereinfachtes Verfahren ist es zur orientierenden Keimzahlbestimmung anwendbar. Neben Plate-Count- Agar (siehe Anhang B von DIN 10113 -1 : 1997-07) drfen auch selektive Nhrmedien verwendet werden. ANMERKUNG: Dieses Verfahren eignet sich fr eine mikrobio
7、logische Kontrolle der Wirksamkeit von Reinigungs- und Desinfektionsmitteln. 2 Normative Verweisungen Diese Norm enthlt durch datierte oder undatierte Verwei- sungen Festlegungen aus anderen Publikationen. Diese normativen Verweisungen sind an den jeweiligen Stellen im Text zitiert, und die Publikat
8、ionen sind nachstehend aufgefhrt. Bei datierten Verweisungen gehren sptere Anderungen oder Uberarbeitungen dieser Publikationen nur zu dieser Norm, falls sie durch nderung oder berar- beitung eingearbeitet sind. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe der in Bezug genommenen Publi- kati
9、on. DIN 10113-1 : 1997-07 Bestimmung des Oberflchenkeimgehaltes auf Ein- richtungs- und Bedarfsgegenstnden im Lebensmit- telbereich - Teil 1 : Quantitatives Tupferverfahren 3 Definitionen Fr die Anwendung dieser Norm gelten die Definitionen nach DIN 10113-1 sowie die folgende: 3.1 Nhrbodenbeschichte
10、te Entnahmevorrichtung Glas- oder Kunststofftrger, der manuell oder industriell mit einem Nhrboden beschichtet worden ist. 4 Prinzip Nach Entnahme der gegen Austrocknung geschtzten nhrbodenbeschichteten Entnahmevorrichtung aus einem gut verschliebaren Transportbehlter wird die beschichtete Seite mit
11、 der zu untersuchenden Flche durch Andrcken in Kontakt gebracht. Anschlieend wer- den die “beimpften” Entnahmevorrichtungen in den gut verschliebaren Transportbehlter zurckgefhrt und direkt in diesem Behlter bei 3OoC 72 h aerob bebrtet. Die Auswertung erfolgt durch Zhlen der sichtbaren bzw. typische
12、n Kolonien. 5 Chemikalien und Nhrbodenbestandteile 5.1 Allgemeines Die Chemikalien und Nhrbodenbestandteile mssen fr mikrobiologische Zwecke geeignet sein. Um vergleich- bare Ergebnisse zu erhalten, sollten eindeutig deklarierte Fortsetzung Seite 2 bis 4 Normenausschu Lebensmittel und landwirtschaft
13、liche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. DIN Deutsches Institui fr Normung e.V. . Jede Art der Vervielfaltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V, Berlin, gestattet. Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GrnbH, 10772 Berlin
14、Ref. NL DIN 10113-3 : 1997-07 Preisgr 06 Vertr-Nr. 0006 STD-DIN DIN 10113-3-GE Seite 2 DIN 10113-3 : 1997-07 Nhrbodenbestandteile und analysenreine Chemikalien und Trockennhrbden verwendet werden. Den Anwei- sungen des Herstellers ist zu folgen. Das verwendete Wasser mu entweder in Glasgerten destil
15、liert oder ent- mineralisiert und mindestens von entsprechender Rein- heit sein. Es darf keine Bestandteile enthalten, die das Wachstum von Mikroorganismen beeinflussen. 5.2 Nhrboden (Plate-Count-Agar) 5.2.1 Allgemeines Abhngig von dem jeweiligen Untersuchungszweck wird ein fr den quantitativen Nach
16、weis spezifischer Keirn- Spektren erforderliches selektives Nhrmedium, das den jeweiligen in Normen aufgefhrten Rezepturen entspricht, verwendet (siehe Anhang B von DIN 10113-1 : 1997-07). Fr die Bestimmung der aeroben Gesamtkeimzahl wird Plate-Count-Agar verwendet. 5.2.2 Zusammensetzung - 50 g Pept
17、on (Casein, tryptisch verdaut) - 23 g Hefeex t ra kt, pu Ive ri si e rt - 1,o g Glucose - 12 bis 18 g Agar, je nach Geliereigenschaft - 1 O00 ml Wasser Zur Inaktivierung etwaiger Desinfektionsmittelrckstnde mssen dem Nhrboden entsprechende Enthemmer zugesetzt werden z. B. 10,O g Polyoxyethylensorbit
18、anmo- nooleat (Tween 80 ) und 3,O g Lecithin je Liter). Dabei ist darauf zu achten, da das Lecithin nach dem Sterilisieren des Nhrbodens homogen in diesem verteilt wird. Die Zugabe von Tween 80“ fhrt teilweise zu einer vernderten Koloniemorphologie, die bei der Auswertung der Nhrbodentrger bercksich
19、tigt werden mu. ANMERKUNG: Prinzipiell kann kein bestimmter Enthemmer vorgegeben werden, da der Einsatz von der Art des verwendeten Desinfektionsmittels abhngt. Haftende Desinfektionsmittel (z. B. qua- ternre Ammoniumverbindungen, Amphotenside) knnen Rckstnde auf Flchen hinterlassen und somit einen
20、Enthemmer notwendig machen. Diese Mittel werden durch den angegebenen Enthem- mer neutralisiert. Nicht haftende und flchtige Mit- tel (z. B. alkoholische Decinfektioncmittel, Suren) sind nach ordnungsgemem Nachsplen zum Zeitpunkt der Probenahme auf der Flche nicht mehr vorhanden. 5.2.3 Herstellung D
21、ie Nhrbodenbestandteile oder der Trockennhrboden werden in Wasser gelst. Der pH-Wert ist so einzustellen, da er nach dem Sterilisieren bei pH = 70 f OJ liegt, gemessen bei einer Temperatur von etwa 45OC. Der Nhrboden wird in Kulturrhrchen oder -kolben berge- fhrt und 15 min bei 121 OC sterilisiert.
22、Wenn der Nhrboden nicht unmittelbar nach der Herstel- lung verwendet wird, ist er im Dunkeln und bei einer Tem- peratur zwischen OC und 5OC so aufzubewahren, da keine Vernderungen eintreten knnen. Er darf nicht In- ger als einen Monat derart aufbewahrt werden. ) Tweene ist ein Warenzeichen der ICI-A
23、merica Inc. ber Bezugsquellen gibt Auskunft: Normenausschu Lebensmittel und landwirtschaftliche Produke (NAL) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V, Burg- grafenctrae 6,10787 Berlin, Poctanschrift 10772 Berlin RM 1997 W 27li44b b41279 132 W 5.2.4 Beschichtung der Entnahmevorrichtungen Die vorher
24、grndlich gereinigten sterilen Kunststoff- oder Glas-Nhrbodentrger werden waagerecht gelagert, mit einer ausreichenden Menge des geschmolzenen Nhrbo- dens beschichtet und zum Verfestigen stehengelassen. Die Agarplatten sind derart zu befllen, da sich der Agar ber den Rand hervorwlbt. Nach kurzer Troc
25、knung z. B. 30 min bei 50C werden die fertig beschichteten Entnah- mevorrichtungen in einen gut verschliebaren Trancport- behlter bergefhrt. Bei einer Lagerung zwischen OC und 5OC sind die nhr- bodenbeschichteten Entnahmevorrichtungen in der Regel bis 4 Wochen verwendbar. ANMERKUNG: Geeignete gebrau
26、chsfertige Sy- steme sind im Handel erhltlich. Bei der Verwen- dung dieser Produkte ist den Anweisungen des Her- stellers auch hinsichtlich der Lagerung zu folgen. 6 Gerte Nach DIN 10113-1 Zustzlich werden bentigt: Platten oder Objekttrger aus Kunststoff oder Glas, steril oder sterilisierbar 7 Durch
27、fhrung Z1 Abklatsch-Vorgang Unmittelbar nach der Entnahme aus den gut verschlie- baren Transportbehltern wird die nhrbodenbecchich- tete Entnahmevorrichtung (siehe 5.2.4) etwa 5 s mit der gesamten Kontaktflche auf die Oberflche gedrckt (siehe Bilder A.l und A.2). Der Druck und die Anpassung an die O
28、berflche darf keine Luftblasen zwischen der Nhrbodenmasse und der zu untersuchenden Flche entstehen lassen. Die beimpften Entnahmevorrichtungen werden unmittel- bar danach in den gut verschliebaren Transportbehalter verbrach t. Derart geschtzt, drfen sie unter Lichtabschlu und bei einer Temperatur z
29、wischen OC und 5OC nicht lnger als 24 h aufbewahrt werden. Der Kontakt der Nhrbden mit Kondenswasser mu unbedingt vermieden werden. 22 Bebrtung Die nhrbodenbeschichteten Entnahmevorrichtungen werden aerob (72 12) h bei 3OoC im Brutschrank bebr- tet. Abhngig von der Zielkeimgruppe darf die Bebr- tung
30、szeit auf 48 h reduziert werden. ANMERKUNG: Fr die Bestimmung bestimmter Mikroorganismen (z. B. Enterobakteriazeen, Pseu- domonaden, E. coli und Koagulase-positiver Sta- phylokokken) drfen entsprechende selektive Nhrmedien mit jeweils spezifischen Bebrtungs- bedingungen eingesetzt werden (siehe Anha
31、ng B von DIN 10113-1 : 1997-07). 8 Auswertung 8.1 Zhlung der Kolonien Nach Ablauf der Bebrtungszeit werden alle auf dem Nhrboden gewachsenen Kolonien, unabhngig von Gre, Form und Farbe, gezhlt. ANMERKUNG: Bei der Verwendung von selektiven Nhrmedien werden die jeweils charakteristischen Kolonien gezh
32、lt. Seite 3 DIN 10113-3 1997-07 Anzahl der gezhlten Kolonien kein Wachstum 8.2 Auswerteschema In Vorversuchen ist dieses Verfahren mit dem Verfahren nach DIN 10113-1 zu vergleichen. Anhand der ermittelten Ergebnisse ist das Auswerteschema (z. B. Tabelle 1) an die Leistungsfhigkeit des Abklatschsyste
33、ms anzupas- sen. Dieser Abgleich mit dem quantitativen Tupferverfahren mu auf jeden Fail auch bei anderslautenden Empfehlun- gen der Hersteller bestimmter Systeme vorgenommen werden. Schlssel - 9 Untersuchungsbericht Im Untersuchungsbericht sind unter Hinweis auf diese Norm mindestens anzugeben: a)
34、Art und Bezeichnung der Probenahmeflche; b) Art und Datum der Probenahme; c) Eingangs- und Untersuchungsdatum; d) das eingesetzte Untersuchungsverfahren; e) Ergebnis nach vom Hersteller vorgegebenen Kate- gorien ; f) gegebenenfalls Abweichungen von den Festlegun- gen dieser Norm 4 bis 10 Kolonien 11
35、 bis 30 Kolonien Tabelle 1: Beispiel fr ein Auswerteschema fr mesophile aerobe Keimzahlen (Oberflchenkeimgehalt) -+ + 31 bis 60 Kolonien ber 60 Kolonien, aber nicht konfluierend I 1 bis 3 Kolonien I (+I + + Rasenwachstum, konfluierend R Kategorie O 1 2 3 4 5 6 Seite 4 DIN 1 O1 13-3 : 1997-07 Anhang A (informativ) Beispiele fr die Handhabung nhrbodenbeschichteter Entnahmevorrichtungen Bild A.l: “Dip slides” / Bild A.2: Platten
