1、August 2010DEUTSCHE NORM Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 6DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 67.180.10!$b#I
2、“1630038www.din.deDDIN 10751-1Untersuchung von Honig Bestimmung des Gehaltes an Hydroxymethylfurfural Teil 1: Photometrisches Verfahren nach WinklerAnalysis of honey Determination of hydroxymethylfurfural Part 1: Winkler photometric methodAnalyse du miel Dtermination de la teneur en hydroxymthylfurf
3、ural Partie 1: Mthode photomtrique selon WinklerAlleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz frDIN 10751-1:1992-05www.beuth.deGesamtumfang 8 SeitenDIN 10751-1:2010-08 Inhalt Seite Vorwort 3 1 Anwendungsbereich .4 2 Begriffe .4 3 Kurzbeschreibung .4 4 Chemikalien4 5 Gerte und
4、Hilfsmittel .5 6 Probenahme .5 7 Durchfhrung.5 8 Auswertung 6 9 Untersuchungsbericht 7 Literaturhinweise 8 2 DIN 10751-1:2010-08 Vorwort Dieser Teil der Norm wurde vom Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL), Arbeitsausschuss NA 057-05-08 AA Honiguntersuchung“, erarbeitet
5、. DIN 10751 Untersuchung von Honig Bestimmung des Gehaltes an Hydroxymethylfurfural besteht aus: Teil 1: Photometrisches Verfahren nach Winkler Teil 3: Hochleistungs-Flssigchromatographisches Verfahren nderungen Gegenber DIN 10751-1:1992-05 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) zur Haltbarkeit d
6、er Lsungen in 4.1, 4.2, 4.3 und 4.4 konkretisierte Festlegungen getroffen; b) Procedere der Herstellung der Probenlsung (7.2) gendert; c) Norm redaktionell berarbeitet. Frhere Ausgaben DIN 10751-1: 1992-05 3 DIN 10751-1:2010-08 1 Anwendungsbereich Dieser Teil der Norm legt ein Verfahren zur Bestimmu
7、ng des Gehaltes an Hydroxymethylfurfural (HMF) in Honig fest. 2 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gilt der folgende Begriff. 2.1 Gehalt an Hydroxymethylfurfural HMF der nach dieser Norm bestimmte Gehalt an mit Barbitursure und p-Toluidin kupplungsfhigen Inhaltsstoffen des Honigs ANMERKUNG D
8、er Gehalt an Hydroxymethylfurfural wird als Massenanteil an HMF in mg/kg angegeben. 3 Kurzbeschreibung Aliquote Teile einer Honiglsung werden mit Lsungen von p-Toluidin und Barbitursure versetzt und die optische Dichte der in Gegenwart kupplungsfhiger Substanzen auftretenden Frbung gegen einen Blind
9、wert in 1-cm-Kvetten bei 550 nm gemessen. 4 Chemikalien Soweit nicht anders angegeben, sind analysenreine Chemikalien zu verwenden. Das Wasser muss entweder destilliert oder von entsprechender Reinheit sein. Unter Lsung ist eine wssrige Lsung zu verstehen. 4.1 p-Toluidin-Lsung Es werden 10,0 g p-Tol
10、uidin unter leichtem Erwrmen (Wasserbad) in etwa 50 ml 2-Propanol gelst, unter Nachwaschen mit etwas 2-Propanol in einen 100-ml-Messkolben bergefhrt und mit 10,0 ml Essigsure (100 % CH3COOH, Eisessig) versetzt. Nach dem Abkhlen auf Raumtemperatur wird mit 2-Propanol bis zur Marke aufgefllt. Die p-To
11、luidin-Lsung ist dunkel aufzubewahren und frhestens 24 h nach Herstellung zu verwenden. Die Lsung ist im Khlschrank bei 6 C bis 8 C drei Tage haltbar. WARNUNG Bei p-Toluidin handelt es sich um einen gefhrlichen Arbeitsstoff. Es sind die Hinweise zur Sicherheit in Merkbltter Gefhrliche Arbeitsstoffe“
12、 unter p-Toluidin“ zu beachten. 4.2 Barbitursure-Lsung Es werden 500 mg Barbitursure mglichst rasch mit etwa 70 ml Wasser in einen 100-ml-Messkolben ber-gefhrt, und die Barbitursure wird unter leichtem Erwrmen (Wasserbad) des verschlossenen Messkolbens gelst. Nach dem Abkhlen auf Raumtemperatur wird
13、 mit Wasser bis zur Marke aufgefllt. Die Lsung ist im Khlschrank bei 6 C bis 8 C eine Woche haltbar. 4 DIN 10751-1:2010-08 4.3 Klrreagenz Carrez I In einem 100-ml-Messkolben werden 15,0 g Kaliumhexacyanoferrat(II), K4Fe(CN)6 3 H2O, in Wasser gelst und mit Wasser auf 100 ml aufgefllt. Die Lsung ist b
14、ei Raumtemperatur drei Monate haltbar. ANMERKUNG Neben der Klrung der Proben verhindert die Carrez-Lsung den Abbau von HMF in den vorbereiteten Proben. 4.4 Klrreagenz Carrez II In einem 100-ml-Messkolben werden 30,0 g Zinkacetat, Zn(CH3OOO)2 2 H2O, in Wasser gelst und mit Wasser auf 100 ml aufgefllt
15、. Die Lsung ist bei Raumtemperatur drei Monate haltbar. ANMERKUNG Neben der Klrung der Proben verhindert die Carrez-Lsung den Abbau von HMF in den vorbereiteten Proben. 5 Gerte und Hilfsmittel 5.1 Sieb aus nicht rostendem Stahl, Maschenweite 0,5 mm. 5.2 Spektralphotometer oder Filterphotometer mit F
16、ilter zur Messung bei 550 nm. 5.3 Kvetten, Schichtdicke 10 mm. 5.4 Messkolben, Nennvolumen 50 ml und 100 ml, z. B. Messkolben nach DIN EN ISO 1042. 5.5 Reagenzglser. 5.6 Becherglas, z. B. Becher aus Glas nach DIN 12331. 5.7 Papierfilter, fr analytische Zwecke geeignet. 6 Probenahme Bis zum Erscheine
17、n einer in Vorbereitung befindlichen DIN-Norm ist die Probenahme zu vereinbaren. Fr die Untersuchung ist eine Laboratoriumsprobe von mindestens 200 g zu verwenden. 7 Durchfhrung 7.1 Probenvorbereitung 7.1.1 Flssiger oder kandierter Honig ohne Verunreinigungen Die Laboratoriumsprobe ist durch intensi
18、ves Rhren (mindestens 3 min) ausreichend zu homogenisieren. Dabei ist darauf zu achten, dass mglichst wenig Luft mit untergerhrt wird. 5 DIN 10751-1:2010-08 7.1.2 Flssiger oder kandierter Honig mit Verunreinigungen Nach Entfernung grober Verunreinigungen wird der Honig bei Raumtemperatur glatt gerhr
19、t und durch ein Sieb nach 5.1 gegeben. Kandierter Honig wird mit einem Spatel durch das Sieb nach 5.1 gerhrt. 7.1.3 Wabenhonig Falls die Waben noch geschlossen sind, werden sie zunchst entdeckelt. Mithilfe eines Siebs nach 5.1 wird der Honig ohne Erwrmung vollstndig von den Waben getrennt. 7.2 Herst
20、ellung der Probenlsung Etwa 10 g Honig werden auf 1 mg in einem kleinen Becherglas gewogen, ohne Erwrmen in 20 ml Wasser gelst und quantitativ in einen 50-ml-Messkolben bergefhrt. Zu der Lsung wird 1 ml Klrreagenz Carrez I gegeben, und es wird gut durchgeschttelt. Anschlieend wird 1 ml Klrreagenz Ca
21、rrez II hinzugegeben. Es wird wieder geschttelt, und anschlieend wird mit Wasser bis zur Marke aufgefllt. Danach wird durch ein Papierfilter nach 5.7 abfiltriert. Die ersten 10 ml des Filtrates werden verworfen. Die so erhaltene Probenlsung ist nach der Herstellung innerhalb von 24 h zu untersuchen.
22、 7.3 Bestimmung In zwei Reagenzglser werden je 2,0 ml der Probenlsung einpipettiert, und je 5,0 ml p-Toluidin-Lsung werden zugegeben. In das eine Reagenzglas werden danach 1,0 ml Wasser (Blindwert), in das andere 1,0 ml Barbitursure-Lsung gegeben; es wird vorsichtig umgeschttelt. Die Zugabe der Reag
23、enzien sollte ohne lange Zwischenpause erfolgen und in etwa 1 min bis 2 min beendet sein. Die Extinktion der Probenlsung wird nach Erreichen des Maximalwertes (etwa 3 min bis 4 min nach Zugabe der Barbitursure-Lsung) bei 550 nm in 1-cm-Kvetten gegen den Blindwert gemessen. 8 Auswertung 8.1 Berechnun
24、g Der Massenanteil wHMFan als HMF-definierten Stoffen in Honig, in mg/kg, wird nach folgender Gleichung (1) berechnet: EHMF9201mEw= (1) Dabei ist E die gegen den Blindwert gemessene Extinktion; mEdie Honig-Einwaage, in g; 1 920 der Faktor, der das Verdnnungsverhltnis und die Molekularextinktion berc
25、ksichtigt. ANMERKUNG Der Faktor 1 920 in der Zahlenwertgleichung zur Berechnung des HMF-Gehaltes wurde aus dem Original-Verfahren nach Winkler bernommen. Die rechtlichen Grenzwerte fr den HMF-Gehalt in Honig basieren auf diesem Berechnungsverfahren. 6 DIN 10751-1:2010-08 8.2 Przision 8.2.1 Allgemein
26、es Die Przisionsdaten wurden in einem Ringversuch ermittelt. Sie gelten mit einer Wahrscheinlichkeit von 95 %. Das bedeutet, dass im Durchschnitt bei 20 Untersuchungen einmal eine berschreitung der angegebenen Werte erwartet werden kann. Die Przisionsangaben gelten fr einen Messbereich von 1,0 mg/kg
27、 bis 85 mg/kg. 8.2.2 Wiederholgrenze r Als Differenz der Ergebnisse zweier Bestimmungen, die nach demselben Verfahren mit identischem Unter-suchungsmaterial unter denselben Bedingungen (derselbe Untersucher, dasselbe Laboratorium) unmittelbar nacheinander durchgefhrt werden, ist hchstens der nach de
28、r Gleichung (2) berechnete Wert zu erwarten. r = 0,36 ln wHMF+ 0,40 (2) sr= 0,13 In wHMF+ 0,14 (3) 8.2.3 Vergleichgrenze R Als Differenz der Ergebnisse zweier voneinander unabhngiger Bestimmungen, die nach demselben Verfahren mit identischem Untersuchungsmaterial unter verschiedenen Bedingungen (ver
29、schiedene Unter-suchungen, verschiedene Gerte, verschiedene Laboratorien) zu verschiedenen Zeiten durchgefhrt werden, ist hchstens der nach Gleichung (4) berechnete Wert zu erwarten. R = 1,76 wHMF0,44(4) SR= 0,62 wHMF0,44(5) 9 Untersuchungsbericht Im Untersuchungsbericht sind mindestens anzugeben: a
30、) Hinweis auf diesen Teil der Norm; b) Art und Herkunft der Probe; c) Art der Probenahme; d) HMF-Massenanteil, angegeben in mg/kg der Probe, auf eine Stelle nach dem Komma gerundet; e) Untersuchungsdatum. 7 DIN 10751-1:2010-08 8 Literaturhinweise DIN 12331, Laborgerte aus Glas Becher DIN EN ISO 1042
31、, Laborgerte aus Glas Messkolben Codex Alimentarius Kommission/FAO; WHO: Auslndisches Lebensmittelrecht Codex Alimentarius: Empfohlener Europischer Regionalstandard fr Honig (CAC/RS 12-1969): Methode 6.8 Photometrische Bestimmung des Hydroxymethylfurfural-(HMF-)Gehaltes. Hamburg: Behrs Verlag. Loseb
32、lattausgabe, Stand 01.03.1988. Bd. 3 Khn, R.; Birett, K.: Merkbltter Gefhrliche Arbeitsstoffe. Landsberg/Lech: Ecomed Verlagsgesellschaft mbH Losebl.-Ausg., 39. Erg.-Lfg. Juli 1988. Blatt T 59 p-Toluidin ISBN 3-609-7300-5 Martin, P. G.: Manuals of Food Quality Control. 3. Commodities. FAO Food and Nutrition Paper. Rome: Food and Agriculture Organization of the United Nations, 1979, S. 158 Schormller, J.: Handbuch der Lebensmittelchemie. Bd V. T.1. Kohlenhydratreiche Lebensmittel. Berlin, Heidelberg, New York: Springer Verlag, 1967, S. 545
