1、November 2005DEUTSCHE NORM Normenausschuss Materialpr fung (NMP) im DINNormenausschuss Papier und Pappe (NPa) im DINPreisgruppe 8DIN Deutsches Institut f r Normung e.V. Jede Art der Vervielf ltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut f r Normung e. V., Berlin, gestatt
2、et.ICS 67.250; 85.060D;e 9625394www.din.deXDIN EN 1104Papier und Pappe vorgesehen f r den Kontakt mit Lebensmitteln Bestimmung des bergangs antimikrobieller Bestandteile;Deutsche Fassung EN 1104:2005Paper and board intended to come into contact with foodstuffs Determination of the transfer of antimi
3、crobial constituents;German version EN 1104:2005Papier et carton destins entrer en contact avec des denres alimentaires Dtermination du transfer des constituants antimicrobiens;Version allemande EN 1104:2005Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz f rDIN EN 1104:199511www
4、.beuth.deGesamtumfang 12 SeitenDIN EN 1104:2005-11 2 Nationales Vorwort Diese Europische Norm ist im CEN/TC 172 Faserstoff, Papier und Pappe ausgearbeitet worden. Die Sekretariatsfhrung liegt beim Normenausschuss Papier und Pappe (NPa) im DIN. Entscheidendes Gremium innerhalb des CEN/TC 172 ist die
5、WG 3 Analytical methods of the assessment of paper and board in contact with foodstuffs, die unter dem Vorsitz sterreichs steht. Bei der Erarbeitung dieser Europischen Norm haben Vertreter des Normenausschusses Materialprfung (NMP) mageblich mitgearbeitet. Nationales Spiegelgremium ist hier der NMP
6、421/NPa Chemisch-technologische Prfverfahren fr Papier, Pappe, Faserstoff und Chemiezellstoff. nderungen Gegenber DIN EN 1104:1995-11 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) Beschreibung zur Vorbereitung einiger Reagenzien teilweise modifiziert; b) detailliertere Beschreibung der Durchfhrung; c) r
7、edaktionelle berarbeitung. Frhere Ausgaben DIN 54380: 1978-09 DIN EN 1104: 1995-11 EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN 1104 August 2005 ICS 67.250; 85.060 Ersatz fr EN 1104:1995 Deutsche Fassung Papier und Pappe vorgesehen fr den Kontakt mit Lebensmitteln Bestimmung des bergangs ant
8、imikrobieller Bestandteile Paper and board intended to come into contact with foodstuffs Determination of the transfer of antimicrobial constituents Papier et carton destins entrer en contact avec des denres alimentaires Dtermination du transfer des constituants antimicrobiens Diese Europische Norm
9、wurde vom CEN am 27. Juni 2005 angenommen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu erfllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche List
10、en dieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache, die von einem CEN-Mitgli
11、ed in eigener Verantwortung durch bersetzung in seine Landessprache gemacht und dem Management-Zentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich,
12、Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern. EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPE
13、AN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATIONManagement-Zentrum: rue de Stassart, 36 B-1050 Brssel 2005 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. EN 1104:2005 DEN 1104:2005
14、(D) 2 Inhalt Seite Vorwort 3 1 Anwendungsbereich .4 2 Normative Verweisungen4 3 Begriffe .4 4 Kurzbeschreibung .4 5 Prfgerte.4 5.1 Stanzeisen 4 5.2 Anpress-Vorrichtung.4 5.3 Zonenablesegert 4 5.4 bliche Laborausrstung fr mikrobiologische Arbeiten.5 6 Reagenzien.5 6.1 Frisch destilliertes Wasser .5 6
15、.2 Nicht ionisiertes Netzmittel.5 6.3 Nhrboden fr Bacillus subtilis5 6.4 Nhrboden nach Sabouraud, modifiziert fr Aspergillus niger6 6.5 Nhragar fr den Hemmhoftest mit Bacillus subtilis.6 6.6 Kochsalz-Pepton-Lsung .7 6.7 Testkeime .7 6.7.1 Allgemeines7 6.7.2 Herstellung von Impfsuspension von Bacillu
16、s subtilis.7 6.7.3 Herstellung der beimpften Sporensuspension von Aspergillus niger.8 6.7.4 Sporendichte fr den Hemmhoftest.8 6.8 Positivkontrolle8 6.8.1 Penicillin G 0,03 Einheiten 8 6.8.2 Isothiazolinon-Lsung 8 7 Probenahme und Probenvorbereitung9 8 Durchfhrung.9 8.1 Sterilisation 9 8.2 Herstellun
17、g der Nhragarplatten9 8.2.1 Allgemeines9 8.2.2 Bacillus subtilis9 8.2.3 Aspergillus niger9 8.3 Bebrtung 10 9 Auswertung . 10 10 Prfbericht. 10 EN 1104:2005 (D) 3 Vorwort Diese Europische Norm (EN 1104:2005) wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 172 Faserstoff, Papier und Pappe“ erarbeitet, dessen Sek
18、retariat vom DIN gehalten wird. Diese Europische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis Februar 2006, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis Februar 2006 zurckgezogen werden. Diese Europ
19、ische Norm ersetzt EN 1104:1995. Im Hinblick auf EN 1104:1995 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) Beschreibung zur Vorbereitung einiger Reagenzien teilweise modifiziert; b) detailliertere Beschreibung der Durchfhrung; c) redaktionelle berarbeitung. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung
20、sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Schwede
21、n, Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. EN 1104:2005 (D) 4 1 Anwendungsbereich Diese Europische Norm legt ein Verfahren zur Bestimmung der bertragung antimikrobieller Bestandteile von Materialien und Artikeln, bestehend aus Papier, K
22、arton und Pappe fest, die fr den Kontakt mit Lebensmitteln vorgesehen sind. 2 Normative Verweisungen Das folgende zitierte Dokument ist fr die Anwendung dieser Europischen Norm erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die let
23、zte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). EN ISO 186, Papier und Pappe Probenahme zur Bestimmung der Durchschnittsqualitt (ISO 186:2002) 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gilt der folgende Begriff. 3.1 Hemmzone Zone, die um die Probe herum auf einem Nh
24、rboden gebildet wurde, welcher mit einem Prforganismus bebrtet wurde und anzeigt, ob wasserlsliche antimikrobielle Bestandteile abgegeben werden 4 Kurzbeschreibung Ein vorbereiteter Nhrboden wird mit der entsprechenden Impfsuspension gemischt und in Petrischalen gegossen. Die Proben werden auf den n
25、och halbfesten Nhrboden gegeben und nach Erstarren bebrtet. Nach Beendigung der Bebrtung werden die Proben auf Bildung von Hemmzonen geprft, wobei die Existenz einer Hemmzone ein Kriterium fr die Angabe von antimikrobiellen Bestandteilen ist. Die Prfung wird mit einem Bakterium, Bacillus subtilis, u
26、nd einem Pilz, Aspergillus niger, durchgefhrt. ANMERKUNG Das Ergebnis basiert auf einer visuellen berprfung. 5 Prfgerte 5.1 Stanzeisen d = 10 mm bis 15 mm, sterilisierbar. 5.2 Anpress-Vorrichtung Geeignet zum Anpressen der Proben auf die Nhrbodenflche (z. B. Drygalski-Spatel). 5.3 Zonenablesegert Zu
27、m Messen des Durchmessers der Hemmzone. ANMERKUNG Die Messung des Durchmessers der Hemmzone ist nicht zwingend vorgeschrieben. EN 1104:2005 (D) 5 5.4 bliche Laborausrstung fr mikrobiologische Arbeiten. 6 Reagenzien 6.1 Frisch destilliertes Wasser Oder mittels Ionenaustauscher deionisiertes Wasser un
28、d frisch abgekocht (deionisiertes Wasser). 6.2 Nicht ionisiertes Netzmittel Z. B. Polyoxyethylensorbitanmonooleat oder hnliches Netzmittel. 6.3 Nhrboden fr Bacillus subtilis Der Nhrboden fr Bacillus subtilis setzt sich folgendermaen zusammen: Rindfleischextrakt 3,0 g; Trypton (Pepton aus Casein) 5,0
29、 g; Natriumchlorid, rein 5,0 g; Agar-agar 12,0 g; Wasser 1 000,0 ml. ANMERKUNG Durch Zufgen von 10 mg/l MnSO4zum Nhrboden fr Bacillus subtilis (6.7.1) wird die Sporenbildung untersttzt. Der Nhrboden muss wie folgt hergestellt werden: Die Bestandteile oder das fertig gestellte Nhrmedium der vergleich
30、baren Zusammenstellung werden bis zum Sieden erhitzt. Der pH-Wert des gebrauchsfertigen Nhrmediums muss (7,2 0,2), bezogen auf eine Temperatur von 45 C, betragen. Der pH-Wert wird auf die geforderten (7,2 0,2) eingestellt, entweder mit NaOH, etwa 0,01 M, oder mit HCl, etwa 0,01 M. Der Nhrboden wird
31、in zwei Teile geteilt. Es wird ein vorbereiteter Teil in Mengen von 300,0 ml dem Nhrboden zugegeben oder er wird in einen 600-ml-Kolben, z. B. Kulturkolben nach Roux, eingefllt. Die Behltnisse werden mit Kappen verschlossen, z. B. Kapsenberg-Kappen. Der andere Teil des Nhrbodens wird fr die Herstell
32、ung von Kulturen in Reagenzglsern verwendet. Es werden Mengen von 10,0 ml der vorbereiteten Kulturen in 15 bis 20 Reagenzglser gefllt, welche mit Kappen verschlossen werden, z. B. Zellstoffstopfen. Die Rollrandflchen und Reagenzglser werden 15 min bei (121 1) C sterilisiert. Danach werden die Reagen
33、zglser so gelegt, dass der Nhrboden mit geeigneter Oberflche in den Reagenzglsern erstarrt. Die Reagenzglser sind bei 4 C bis 8 C nicht lnger als 14 d aufzubewahren. Zur Vorbereitung der einzustellenden Beimpfung des Bacillus subtilis ist der Nhrboden (6.7.2) in den Kolben auf etwa 45 C bis zum Verd
34、ichten abzukhlen. EN 1104:2005 (D) 6 Die Kolben sind bis zu einer stabilen Temperatur abzukhlen. 6.4 Nhrboden nach Sabouraud, modifiziert fr Aspergillus niger Der Nhrboden nach Sabouraud, modifiziert fr Aspergillus niger setzt sich folgendermaen zusammen: Trypton (Pepton aus Casein) 5,0 g; Pepton (P
35、epton aus Fleisch) 5,0 g; D (+) Glukose C6H12O6 H2O 10,0 g; Maltose C12H22O11 H2O 10,0 g; Agar-agar 10,0 g bis 15,0 g; Wasser 1 000,0 ml. Der nach Sabouraud modifizierte Nhrboden wird folgendermaen vorbereitet: Die Bestandteile oder das fertig gestellte Nhrmedium der vergleichbaren Zusammenstellung
36、werden bis zum Sieden erhitzt. Der pH-Wert des gebrauchsfertigen Nhrmediums muss (5,4 0,1), bezogen auf eine Temperatur von 45 C, betragen. Der pH-Wert wird auf die geforderten (5,4 0,1) eingestellt, entweder mit NaOH, etwa 0,01 M, oder mit HCl, etwa 0,01 M. Mit den Reagenzglsern, dem Sterilisieren
37、und der Abkhlung wird wie in 6.3 verfahren, wobei das vorbereitete Medium dem Nhrboden zugegeben oder in einen Kolben, z. B. Kulturkolben nach Roux eingefllt wird. 6.5 Nhragar fr den Hemmhoftest mit Bacillus subtilis Der Nhragar fr den Hemmhoftest mit Bacillus subtilis setzt sich folgendermaen zusam
38、men: Trypton (Pepton aus Casein) 3,45 g; Pepton aus Fleisch 3,45 g; Natriumchlorid, rein 5,1 g; Agar-agar 13,0 g; Wasser 1 000,0 ml. Der Nhragar wird folgendermaen vorbereitet: Die Bestandteile oder das fertig gestellte Nhrmedium der vergleichbaren Zusammenstellung werden bis zum Sieden erhitzt. Der
39、 pH-Wert des gebrauchsfertigen Nhrmediums muss (6,0 0,1), bezogen auf eine Temperatur von 45 C, betragen. Der pH-Wert wird auf die geforderten (6,0 0,1) eingestellt, entweder mit NaOH, etwa 0,01 M, oder mit HCl, etwa 0,01 M. Es wird ein vorbereiteter Teil dem Nhrmedium oder dem Reagenzglas zugegeben
40、 und in Rollrandflaschen gefllt, mit Kappen verschlossen (z. B. mit Kapsenberg-Kappen) und 15 min bei (121 1) C sterilisiert. EN 1104:2005 (D) 7 Zur Vorbereitung der einzustellenden Beimpfung des Nhrmediums (8.2.2) sind die Rollrandflaschen unterhalb von 60 C bis zum Verdichten abzukhlen. 6.6 Kochsa
41、lz-Pepton-Lsung Die Kochsalz-Pepton-Lsung setzt sich folgendermaen zusammen: Pepton (Pepton aus Fleisch) 1,0 g; Natriumchlorid, rein 8,5 g; Wasser 1 000,0 ml. Die Kochsaltz-Pepton-Lsung wird folgendermaen vorbereitet: Die Bestandteile werden in Wasser mit einem pH-Wert zwischen 6 und 7 aufgelst. Es
42、werden drei gleiche Volumenteile in drei Rollrandflaschen gefllt. Diese werden mit Kappen, z. B. Kapsenberg-Kappen, verschlossen und 15 min bei (121 1) C sterilisiert. Bei Aufbewahrung bei Raumtemperatur muss die Lsung innerhalb von 8 d verwendet werden; bei 4 C bis 8 C darf die Lsung nicht lnger al
43、s 14 d gelagert werden. 6.7 Testkeime 6.7.1 Allgemeines Es werden folgende Testkeime angewendet: Bacillus subtilis DSM 347 (ATCC 6633) und Aspergillus niger DSM 1957 (ATCC 6275) oder andere entsprechende Testkeime. Weil verschiedene Stmme unterschiedliche Sensitivitt aufweisen knnen, sollte ein Verg
44、leichstest durchgefhrt werden, wenn andere Stmme als ATTC 6633 und ATCC 6275 verwendet werden. Stammkulturen von Bacillus subtilis werden durch Beimpfung der Reagenzglser (6.3) und 7-tgiger Bebrtung bei 30 C erhalten. Nach der Bebrtung sind die Reagenzglser bei 4 C bis 8 C aufzubewahren. Stammkultur
45、en von Aspergillus niger erhlt man durch Beimpfung der Reagenzglser (6.4) und 5-tgiger Bebrtung bei 25 C. Nach der Bebrtung sind die Reagenzglser bei 4 C bis 8 C aufzubewahren. 6.7.2 Herstellung von Impfsuspension von Bacillus subtilis 15,0 ml des flssigen Nhrmediums (6.3) werden in zehn sterile Pet
46、rischalen (d = 90 mm) bergefhrt und bei etwa 45 C bis zum Verdichten abgekhlt. Das in Kulturkolben nach Roux (6.3) sterilisierte Nhrmedium ist fr die Beimpfung gebrauchsfertig. Durch Ausschwemmen der Kolonien mit 2,0 ml bis 3,0 ml aus den Petrischalen steriler Kochsalzlsung (6.6) erhlt man aus zehn
47、Reagenzglsern die Stammkultur Bacillus subtilis (6.7.1). Diese wird ber die Oberflche von zehn Petrischalen (jede Petrischale wird auf einem anderen Reagenzglas beimpft) oder der Kulturkolben nach Roux verteilt. Nach 7-tgiger Bebrtung bei 30 C werden die Kolonien mit 3,0 ml aus den Petrischalen und
48、die Kulturkolben mit 30,0 ml Pepton-Kochsalz-Lsung (6.6) ausgeschwemmt. Die Suspension wird mittels eines sterilen Trichters in eine sterile Rollrandflasche gefllt. Die Rollrandflasche wird mit einem sterilen Stopfen verschlossen. EN 1104:2005 (D) 8 Zur Abttung vegetativer Formen wird die Lsung 30 min im Wasserbad bei 85 C unter gelegentlichem Schtteln erhitzt. Nach der Erhitzung wird die Sporensuspension in ein steriles 40-ml-Zentrifugenglas bergefhrt und 10 min bei 10 000 g zentrifugiert. Die berstehende Flssigkeit wird verworfen und der Rckstand mit 30,0 ml Kochsalz-Pep
