1、August 2006DEUTSCHE NORM Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 11DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 67.050!,f+=“9
2、670826www.din.deDDIN EN 14185-2Fettarme Lebensmittel Bestimmung von N-Methylcarbamatrckstnden Teil 2: HPLC-Verfahren mit Reinigung auf einer Kieselgur-Sule;Deutsche Fassung EN 14185-2:2006Non fatty foods Determination of N-methylcarbamate residues Part 2: HPLC method with clean-up on a diatomaceous
3、earth column;German version EN 14185-2:2006Aliments non gras Dosage des N-mthylcarbamates Partie 2: Mthode CLHP avec purification sur colonne de terre de diatomes;Version allemande EN 14185-2:2006Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin www.beuth.deGesamtumfang 16 SeitenDIN EN
4、14185-2:2006-08 2 Nationales Vorwort Diese Europische Norm ist vom Technischen Komitee TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren, dessen Sekretariat vom DIN (Deutschland) gehalten wird, des Europischen Komitees fr Normung (CEN) nach eingehenden Vorarbeiten der Arbeitsgruppe 4 Pestizide in fe
5、ttarmen Lebens-mitteln erarbeitet worden. Das zustndige deutsche Arbeitsgremium ist der Arbeitsausschuss Pestizide des Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Gemeinschaftsweit gltige Hchstmengen fr Pflanzenschutzmittel in fett
6、armen Lebensmitteln (einschlielich N-Methylcarbamate) sind in der europischen Verordnung 396/2005 festgelegt. Daher muss auch der Gehalt an N-Methylcarbamaten gemeinschaftsweit harmonisiert nachgewiesen und bestimmt werden knnen. Fr die in diesem Dokument zitierten Internationalen Normen wird im Fol
7、genden auf die entsprechenden Deutschen Normen hingewiesen: ISO 5725-1 siehe DIN ISO 5725-1 ISO 5725-2 siehe DIN ISO 5725-2 ISO 5725-3 siehe DIN ISO 5725-3 ISO 5725-4 siehe DIN ISO 5725-4 ISO 5725-5 siehe DIN ISO 5725-5 ISO 5725-6 siehe DIN ISO 5725-6 Nationaler Anhang NA (informativ) Literaturhinwe
8、ise DIN ISO 5725-1, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnissen Teil 1: Allgemeine Grundlagen und Begriffe DIN ISO 5725-2, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnissen Teil 2: Grundlegende Methode fr die Ermittlung der Wiederhol- und V
9、ergleichprzision eines vereinheitlichten Messverfahrens DIN ISO 5725-3, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnissen Teil 3: Przisionsmae eines vereinheitlichten Messverfahrens unter Zwischenbedingungen DIN ISO 5725-4, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messve
10、rfahren und Messergebnissen Teil 4: Grundlegende Methoden fr die Ermittlung der Richtigkeit eines vereinheitlichten Messverfahrens DIN ISO 5725-5, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnissen Teil 5: Alternative Methoden fr die Ermittlung der Przision eines vereinheit
11、lichten Messverfahrens DIN ISO 5725-6, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnissen Teil 6: Anwendung von Genauigkeitswerten in der Praxis EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN 14185-2 Mai 2006 ICS 65.060 Deutsche Fassung Fettarme Lebensmittel Bestimmun
12、g von N-Methylcarbamatrckstnden Teil 2: HPLC-Verfahren mit Reinigung auf einer Kieselgur-SuleNon fatty foods Determination of N-methylcarbamate residues Part 2: HPLC method with clean-up on a diatomaceous earth column Aliments non gras Dosage des N-mthylcarbamates Partie 2: Mthode CLHP avec purifica
13、tion sur colonne de terre de diatomes Diese Europische Norm wurde vom CEN am 20. April 2006 angenommen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu erfllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denendieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer national
14、en Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listendieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine
15、 Fassung in einer anderen Sprache,die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch bersetzung in seine Landessprache gemacht und dem Management-Zentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belg
16、ien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland,Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, Ungarn, dem Verei
17、nigten Knigreich und Zypern.EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATIONManagement-Zentrum: rue de Stassart, 36 B-1050 Brssel 2006 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mit
18、gliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. EN 14185-2:2006 DEN 14185-2:2006 (D) 2 Inhalt Seite Vorwort 2 1 Anwendungsbereich .3 2 Kurzbeschreibung .3 3 Chemikalien3 4 Gerte5 5 Probenahme .6 6 Probenvorbereitung.6 7 Durchfhrung.7 8 Auswertung 8 9 Absicherungsverfahren 8 10 Przision, Wiederholgrenze und Ve
19、rgleichgrenze .9 11 Untersuchungsbericht . 10 Anhang A (informativ) Przisionsdaten . 11 Literaturhinweise . 14 Vorwort Dieses Dokument (EN 14185-2:2006) wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Diese Eu
20、ropische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis November 2006, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis November 2006 zurckgezogen werden. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind
21、 die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Sc
22、hweden, Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. EN 14185-2:2006 (D) 3 1 Anwendungsbereich Diese Europische Norm legt ein hochleistungs-flssigchromatographisches (HPLC) Verfahren zur Bestimmung der Rckstnde von N-Methylcarbamat-Pestizide
23、n in Obst und Gemse fest und geht auf die Arbeitsweise von Krause 1 zurck. Das Verfahren ist durch einen Ringversuch fr die Wirkstoffe Aldicarb, Carbofuran, Furathiocarb, Methomyl, Oxamyl, Propoxur und Thiodicarb und fr die Metaboliten Aldicarb-sulfoxid, Aldicarb-sulfon (Aldoxycarb) und 3-Hydroxy-ca
24、rbofuran in Tomaten und Orangen bei Gehalten zwischen 0,04 mg/kg und 0,25 mg/kg validiert worden. Fr die Leistungsfhigkeit des Verfahrens zur Bestimmung weiterer bedeutsamer Stoffe sind keine Daten aus Ringversuchen verfgbar, doch ist bekannt, dass das Verfahren nicht fr Benfuracarb anwendbar ist. 2
25、 Kurzbeschreibung Das Untersuchungsmaterial wird mit Dichlormethan homogenisiert, das Homogenat wird filtriert und das Filtrat eingedampft. Nur bei Zitrusfrchten wird das Untersuchungsmaterial mit Acetonitril homogenisiert, das Filtrat mit n-Hexan gewaschen und eingedampft. In beiden Fllen wird der
26、Rckstand in wssriger Natriumchlorid-Lsung gelst. Die Lsung wird auf eine Sule aus Kieselgur berfhrt und die Sule mit Dichlormethan eluiert. Die Eluate werden eingedampft und der Rckstand wird in Methanol gelst. In dieser Lsung werden die N-Methylcarbamate durch Umkehrphasen-Hochleistungs-Flssigchrom
27、atographie (HPLC) mit Nach-sulen-Hydrolyse bestimmt. Das gebildete Methylamin wird mit o-Phthaldialdehyd und 2-Mercaptoethanol umgesetzt, und die Derivate werden mit einem Fluoreszenzdetektor nachgewiesen 2. 3 Chemikalien 3.1 Allgemeines Soweit nicht anders angegeben, werden analysenreine Chemikalie
28、n, vorzugsweise zur HPLC und zur Pestizid-Rckstandsanalyse, und nur destilliertes Wasser oder Wasser gleichwertiger Reinheit verwendet. Alle Gefe fr Standardsubstanzen mssen mit dem Namen und der Reinheit der Pestizide beschriftet sein. Die ausfhrlichen chemischen Bezeichnungen und Formeln finden si
29、ch in ISO 1750. 3.2 Sicherheitshinweise WARNUNG Bei der Anwendung dieser Norm ist es mglich, dass gefhrliche Substanzen, Arbeits-gnge und Gerte angewendet werden. Diese Norm erhebt nicht den Anspruch, dass alle mit ihrer Anwendung verbundenen Sicherheitsprobleme angesprochen werden. Es liegt in der
30、Verantwortung des Anwenders dieser Norm, geeignete Vorkehrungen fr den Arbeits- und Gesundheitsschutz zu treffen und vor der Anwendung festzulegen, welche einschrnkenden Vorschriften gelten. 3.3 Acetonitril 3.4 n-Hexan 3.5 Acetonitril, gesttigt mit n-Hexan 400 ml Acetonitril (3.3) werden in einem Sc
31、heidetrichter 3 min mit 40 ml n-Hexan (3.4) geschttelt; die untere Phase wird verwendet. EN 14185-2:2006 (D) 4 3.6 Dichlormethan1)3.7 Methanol 3.8 Natriumchlorid-Lsung, gesttigt 3.9 Natriumhydroxid-Lsung, c = 0,05 mol/l ANMERKUNG Es wurde beobachtet, dass Natriumhydroxid eine mgliche Quelle von Veru
32、nreinigungen sein kann. Geeignete Produkte sind z. B. Hydrolysis Reagent for Carbamate Pesticide Analysis CB 1302)oder Natriumhydroxid-Lsung (1 mol/l) zur HPCE, Merck Nr. 1022513). 3.10 Filterhilfe, z. B. Celite 5454)3.11 Festes Trgermaterial, Extrelut NT3), Nachfllpackungen 3.12 o-Phthaldialdehyd 3
33、.13 Tetraborat-Pufferlsung, 38,1 g/l Natriumtetraborat-Decahydrat in Wasser 3.14 2-Mercaptoethanol 3.15 Mobile Phase A Wasser, gereinigt mit einem System zum Reinigen von Wasser fr die Flssigchromatographie. Vor Gebrauch wird es mit schwachem Unterdruck durch ein Membranfilter (4.13) gesaugt. 3.16 M
34、obile Phase B Acetonitril (3.3). Vor Gebrauch wird es mit schwachem Unterdruck durch ein Membranfilter (4.13) gesaugt. 3.17 OPA-Reagenz 1 g o-Phthaldialdehyd (3.12) wird in 10 ml Methanol (3.7) gelst und die Lsung mit 0,4 ml 2-Mercaptoethanol (3.14) versetzt. In einem 1 000-ml-Messkolben wird die Mi
35、schung mit Tetraborat-Pufferlsung (3.13) verdnnt und zur Marke aufgefllt. Der pH-Wert der Lsung wird auf pH 10 eingestellt. Die Lsung wird unter Stickstoff aufbewahrt. ANMERKUNG Alternativ kann das Derivatization Reagent 2“2)verwendet werden. 1) Aus Umweltgrnden kann auch Ethylacetat verwendet werde
36、n, wobei aber darauf hingewiesen wird, dass nur die Verwendung von Dichlormethan im Ringversuch getestet wurde. Daher muss die Eignung von Ethylacetat in geeigneter Weise bewiesen werden. 2) Hydrolysis Reagent for Carbamate Pesticide Analysis CB 130 und Derivatization Reagent 2 sind Produkte von Pic
37、kering Laboratories, Mountain View, California, USA. Diese Angabe dient nur zur Unterrichtung der Anwender dieser Europischen Norm und bedeutet keine Anerkennung der genannten Produkte durch CEN. Gleichwertige Produkte drfen verwendet werden, wenn sie nachweislich zu den gleichen Ergebnissen fhren.
38、3) Natriumhydroxid-Lsung zur HPCE, Extrelut NT und RP Select B sind Produkte von E. Merck, Darmstadt, Deutschland. Diese Angabe dient nur zur Unterrichtung der Anwender dieser Europischen Norm und bedeutet keine Anerkennung der genannten Produkte durch CEN. Gleichwertige Produkte drfen verwendet wer
39、den, wenn sie nachweislich zu den gleichen Ergebnissen fhren 4) Celite 545ist ein Produkt von Celite Corp (World Minerals Inc., Santa Barbara, CA, USA). Diese Angabe dient nur zur Unterrichtung der Anwender dieser Europischen Norm und bedeutet keine Anerkennung des genannten Produktes durch CEN. Gle
40、ichwertige Produkte drfen verwendet werden, wenn sie nachweislich zu den gleichen Ergebnissen fhren. EN 14185-2:2006 (D) 5 3.18 Standardsubstanzen N-Methylcarbamat-Pestizide wie Aldicarb, Bendiocarb, Bufencarb, Butocarboxim, Carbaryl, Carbofuran, Dioxacarb, Ethiofencarb, Furathiocarb, Methiocarb, Me
41、thomyl, Oxamyl, Promecarb, Propoxur, Thiodicarb, Thiofanox, Trimethacarb, die Metaboliten 3-Hydroxy-carbofuran und 3-Keto-carbofuran und die Sulfoxid- und Sulfonmetaboliten von Aldicarb, Butocarboxim und Thiofanox. 3.19 Pestizid-Stammlsungen, Massenkonzentration = 2,0 g/ml In einem 25-ml-Messkolben
42、werden 50 mg einer Standardsubstanz (3.18) in Acetonitril (3.3) gelst; die Lsung wird mit Acetonitril zur Marke aufgefllt. 3.20 Pestizid-Standardlsungen Die betreffenden Standardlsungen werden durch Verdnnen geeigneter Mengen von Pestizid-Stamm-lsungen (3.19) mit Methanol hergestellt, z. B. auf 1 g/
43、ml oder auf 0,1 g/ml, wenn erforderlich. 4 Gerte 4.1 Allgemeines Die Glasgerte mssen grndlich gereinigt sein. Zur Reinigung eignet sich heie Detergentienlsung, aber vor dem Trocknen mssen die Glasgerte sorgfltig mit destilliertem Wasser und Aceton gesplt werden. bliche Laborgerte und insbesondere di
44、e Folgenden: 4.2 Zerkleinerungsgert 4.3 Homogenisierstab oder Hochgeschwindigkeitsmischer 4.4 Glasflasche, Nennvolumen 500 ml 4.5 Rotationsverdampfer mit einem Wasserbad, regelbar auf 35 C 4.6 Bchner-Porzellanfilternutsche, 9,5 cm Durchmesser 4.7 Saugflasche, Nennvolumen 1 l 4.8 Glasfaserfilter, 9 c
45、m Durchmesser 4.9 Scheidetrichter, 1 l 4.10 Sule gefllt mit Kieselgur, anwendbar fr ein Volumen von 20 ml Lsung, z. B. vorgepackte Polypropylen-Sulen Extrelut NT 203), Chem Elut 20 ml5)oder Chromabond XTR (70 ml)6). Gebrauchte Extrelut-NT-20-Sulen knnen erneut mit Extrelut-NT-Nachfllpackungen (3.11)
46、 gefllt werden. 3) Siehe Seite 5. 5) Chem Elut 20 ml ist ein Produkt von Varian Inc., Palo Alto, CA, USA. Diese Angabe dient nur zur Unterrichtung der Anwender dieser Europischen Norm und bedeutet keine Anerkennung der genannten Produkte durch CEN. Gleichwertige Produkte drfen verwendet werden, wenn
47、 sie nachweislich zu den gleichen Ergebnissen fhren. 6) Chromabond XTR ist ein Produkt von Macherey-Nagel, Dren, Deutschland. Diese Angabe dient nur zur Unterrichtung der Anwender dieser Europischen Norm und bedeutet keine Anerkennung der genannten Produkte durch CEN. Gleichwertige Produkte drfen ve
48、rwendet werden, wenn sie nachweislich zu den gleichen Ergebnissen fhren. EN 14185-2:2006 (D) 6 4.11 Hochleistungs-Flssigchromatograph, ausgestattet mit Folgendem: 4.11.1 Binres Pumpsystem mit 6-Wege-Injektionsventil und einer 20-l-Probenschleife, ein Fluoreszenz-detektor und eine Einheit zur quantit
49、ativen Auswertung mit Integratorsystem. 4.11.2 HPLC-Analysensule, Patrone aus Edelstahl, 250 mm lang, 4,0 mm Innendurchmesser, (z. B. gepackt mit RP Select B3) (Teilchengre 5 m). 4.11.3 Nachsulensystem aus zwei Reaktionsschleifen in verschiedenen Thermostaten, zwei T-Stcke mit geringem Totvolumen und zwei pulsfreie Reagenzpumpen. ANMERKUNG
