1、Dezember 2006DEUTSCHE NORM Normenausschuss Wasserwesen (NAW) im DINPreisgruppe 15DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 13.060.70!,jUP“9715045www.din.deDDIN EN 15204
2、Wasserbeschaffenheit Anleitung fr die Zhlung von Phytoplankton mittels derUmkehrmikroskopie (Utermhl-Technik);Deutsche Fassung EN 15204:2006Water quality Guidance standard on the enumeration of phytoplankton using inverted microscopy(Utermhl technique);German version EN 15204:2006Qualit de leau Norm
3、e guide pour lanalyse de routine de labondance et de la composition duphytoplancton par microscopie inverse (mthode dUtermhl);Version allemande EN 15204:2006Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin www.beuth.deGesamtumfang 60 Seiten2Diese Norm ist Bestandteil der ReiheDeutsche
4、Einheitsverfahren zur Wasser-, Abwasser- undSchlammuntersuchung Biologisch-kologische Gewsseruntersuchung (Gruppe M)und beschreibt das VerfahrenAnleitung fr die Zhlung von Phytoplankton mittels der Umkehrmikrosko-pie (Utermhl-Technik) (M 41).Nationales VorwortDieses Dokument (EN 15204:2006) wurde vo
5、m Technischen Komitee CEN/TC 230 Wasseranalytik“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN (Deutschland)gehalten wird.Das zustndige deutsche Gremium ist der NA 119-01-03-05-06 AK Biolo-gisch-kologische Gewsseruntersuchung“ des NA 119-01-03 AA Wasserun-tersuchung“ im Normenausschuss Wasserwesen (NAW).Di
6、ese Norm wurde fr die Umsetzung der Richtlinie 2000/60/EG des europi-schen Parlaments und des Rates vom 23. Oktober 2000 zur Schaffung einesOrdnungsrahmens fr Manahmen der Gemeinschaft im Bereich derWasserpolitik1)entwickelt.Es ist erforderlich, bei den Untersuchungen nach dieser Norm Fachleute oder
7、Facheinrichtungen einzuschalten und bestehende Sicherheitsvorschriften zubeachten.Bei Anwendung der Norm ist im Einzelfall je nach Aufgabenstellung zu prfen,ob und inwieweit die Festlegung von zustzlichen Randbedingungen erforder-lich ist.Die als DIN-Normen verffentlichten Einheitsverfahren sind bei
8、 der BeuthVerlag GmbH einzeln oder zusammengefasst erhltlich. Auerdem werden diegenormten Einheitsverfahren in der Loseblatt-Sammlung Deutsche Einheits-verfahren zur Wasser-, Abwasser- und Schlammuntersuchung“ gemeinsamvom Beuth Verlag GmbH und von dem Wiley-VCH Verlag publiziert.Alle fr die Abwasse
9、rverordnung (AbwV) enthalten in der neuen Verordnungzu 7a des Gesetzes zur Ordnung des Wasserhaushaltes (WHG) ber Anfor-derungen an das Einleiten von Abwasser in Gewsser und zur Anpassung desAbwasserabgabengesetzes“ relevanten Einheitsverfahren sind zusammenmit der AbwV und dem WHG und allen noch fo
10、rtgeltenden Abwasserverwal-tungsvorschriften als Loseblattsammlung Analysenverfahren in der Abwasser-verordnung Rechtsvorschriften und Normen“ mit dem Ergnzungsband 1(DIN-Normen), Ergnzungsband 2 (DIN-EN- und DIN-EN-ISO-Normen) unddem Ergnzungsband 3 (DIN-, DIN-EN- und DIN-EN-ISO-Normen) herausge-ge
11、ben worden.1) Nachgewiesen in der DITR-Datenbank, zu beziehen bei: Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin.DIN EN 15204:2006-123Normen oder Norm-Entwrfe mit dem Gruppentitel Deutsche Einheitsverfah-ren zur Wasser-, Abwasser- und Schlammuntersuchung“ sind in folgendeGebiete (Haupttitel) aufgeteilt:Allgemeine
12、 Angaben (Gruppe A) (DIN 38402)Sensorische Verfahren (Gruppe B) (DIN 38403)Physikalische und physikalisch-chemische Kenngren (Gruppe C) (DIN 38404)Anionen (Gruppe D) (DIN 38405)Kationen (Gruppe E) (DIN 38406)Gemeinsam erfassbare Stoffgruppen (Gruppe F) (DIN 38407)Gasfrmige Bestandteile (Gruppe G) (D
13、IN 38408)Summarische Wirkungs- und Stoffkenngren (Gruppe H) (DIN 38409)Biologisch-kologische Gewsseruntersuchung (Gruppe M) (DIN 38410)Mikrobiologische Verfahren (Gruppe K) (DIN 38411)Testverfahren mit Wasserorganismen (Gruppe L) (DIN 38412)Einzelkomponenten (Gruppe P) (DIN 38413)Schlamm und Sedimen
14、te (Gruppe S) (DIN 38414)Suborganismische Testverfahren (Gruppe T) (DIN 38415).Auer den in der Reihe DIN 38402 bis DIN 38415 genormten Untersuchungs-verfahren liegen eine Reihe Internationaler und Europischer Normen als DIN-EN-, DIN-EN-ISO- und DIN-ISO-Normen vor, die ebenfalls Bestandteil derDeutsc
15、hen Einheitsverfahren“ sind.ber die bisher erschienenen Teile dieser Normen gibt die Geschftsstelle desNormenausschusses Wasserwesen (NAW) im DIN Deutsches Institut frNormung e.V., Telefon 030 26012448, oder die Beuth Verlag GmbH, 10772Berlin (Hausanschrift: Burggrafenstr. 6, 10787 Berlin), Auskunft
16、.DIN EN 15204:2006-124LeerseiteDIN EN 15204:2006-12EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN 15204 August 2006 ICS 13.060.70 Deutsche Fassung Wasserbeschaffenheit Anleitung fr die Zhlung von Phytoplankton mittels der Umkehrmikroskopie (Utermhl-Technik) Water quality Guidance standard on t
17、he enumeration of phytoplankton using inverted microscopy (Utermhl technique) Qualit de leau Norme guide pour lanalyse de routine de labondance et de la composition du phytoplancton par microscopie inverse (mthode dUtermhl) Diese Europische Norm wurde vom CEN am 14. Juli 2006 angenommen. Die CEN-Mit
18、glieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu erfllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denendieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listendieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen
19、Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache,die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch bersetzung in seine Lan
20、dessprache gemacht und dem Management-Zentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland,Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen,
21、Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern.EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE
22、NORMALISATIONManagement-Zentrum: rue de Stassart, 36 B-1050 Brssel 2006 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. EN 15204:2006 DEN 15204:2006 (D)2InhaltSeiteVorwort . 3Einleitung 41 Anwendun
23、gsbereich . 52 Normative Verweisungen 53Begrife 54 Grundlage des Verfahrens 75 Gerte und Konservierungsmittel 76 Bearbeitung der Proben . 107 Zhlverfahren 168 Quantitative Validierung 239 Messunsicherheit . 26Anhang A (informativ) Optische Merkmale von Umkehrmikroskopen 28Anhang B (informativ) Probe
24、nbehandlung . 31Anhang C (informativ) Untersuchungsstrategien fr Phytoplankton . 36Anhang D (informativ) Bestimmung . 40Anhang E (informativ) Verwendung konventioneller zusammengesetzterMikroskope 42Anhang F (informativ) Statistisches Vorgehen . 47Literaturhinweise 54BilderBild 1 Zufallsverteilung v
25、on Phytoplanktonorganismen(auf die offenen Zwischenrume achten) 15Bild 2 Beispiel einer Regel fr das Auszhlen von Zellen auf denZhlfeldrndern. Algen, die den oberen und linken Rand desZhlrasters berhren, werden nicht gezhlt, die, die denunteren und rechten Rand berhren, werden gezhlt . 18Bild F.1 Da
26、rstellung der Erfassung von Algendaten fr einensequentiellen Test . 49TabellenTabelle 1 Sedimentationszeit fr mit Lugolscher Lsungkonservierte Seewasserproben 12 14Tabelle F.1 Hchstzulssige Streuung fr eine Poisson-Verteilung(m =Mittelwert,s2= Streuung) . 48Tabelle F.2 Multinomialer Homogenittstest
27、50EN 15204:2006 (D)3VorwortDieses Dokument (EN 15204:2006) wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 230 Wasseranalytik“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird.Diese Europische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, ent-weder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder
28、 durch Anerken-nung bis Februar 2007, und etwaige entgegenstehende nationale Normenmssen bis Februar 2007 zurckgezogen werden.Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalenNormungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zubernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschla
29、nd, Estland, Finnland, Frankreich,Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta,Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden,Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn,Vereinigtes Knigreich und Zypern.EN 15204:2006 (D)2Ei
30、nleitungMit der Herausgabe der Europischen Richtlinie zur Schaffung eines Ord-nungsrahmens im Bereich der Wasserpolitik (EG-Wasserrahmenrichtlinie,2000/60/EG) besteht die Notwendigkeit eines einheitlichen Verfahrens zurBewertung des kologischen Zustands der Oberflchengewsser hinsichtlichHufigkeit un
31、d Zusammensetzung des Phytoplanktons. Diesen Anforderungensoll diese Europische Norm nachkommen und den Labors helfen, die Qualittihrer analytischen Ergebnisse zu verbessern.Es kann kein einzelnes Normverfahren fr die Bewertung der Phytoplanktonzu-sammensetzung und -hufigkeit angegeben werden, da di
32、e durch die berwa-chungsprogramme erfassten Fragen in ihrem Charakter unterschiedlich sindund deshalb spezifische Arbeitsvorschriften erfordern. Diese EuropischeNorm hat deshalb das Ziel, eine Anleitung zu grundstzlichen Gesichtspunktender mikroskopischen Algenanalyse sowie zu statistischen Verfahre
33、n zur Gestal-tung, Optimierung und Validierung der Verfahren und Arbeitsvorschriften zugeben. Obgleich in Anhang C erwhnt, enthlt diese Anleitung kein Verfahrenzur Abschtzung des Biovolumens.WARNUNG Anwender dieser Europischen Norm sollten mit der bli-chen Laborpraxis vertraut sein. Eine lang dauern
34、de mikroskopischeUntersuchung von Phytoplankton kann zu krperlicher Ermdung fhrenund das Sehvermgen beeintrchtigen. Die ergonomischen Eigenschaf-ten des Mikroskops sollten beachtet und der Rat eines Arbeitsmedizinershinsichtlich Gesundheit und Sicherheit eingeholt werden, um sicherzu-stellen, dass R
35、isiken auf ein Mindestma herabgesetzt werden.Diese Europische Norm gibt nicht vor, alle unter Umstnden mit derAnwendung des Verfahrens verbundenen Sicherheitsaspekte anzuspre-chen. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, angemessene Sicher-heits- und Schutzmanahmen zu treffen und sicherzustelle
36、n, dass diesemit nationalen Festlegungen bereinstimmen.EN 15204:2006 (D)51 AnwendungsbereichDiese Europische Norm legt ein Verfahren fr das Standard-Sedimentations-verfahren fest, das auf dem von Utermhl 1958 beschriebenen Test 31 beruht.Es beschreibt ein allgemeines Verfahren fr die Abschtzung der
37、Abundanz(Hufigkeit) und taxonomischen Zusammensetzung des marinen und limni-schen Phytoplanktons unter Verwendung der Durchlichtumkehrmikroskopie undvon Sedimentationskammern, einschlielich der vorausgehenden Schritte derKonservierung und Lagerung der Proben. Der Schwerpunkt liegt auf der Opti-mieru
38、ng des Verfahrens fr die Vorbereitung der zu mikroskopierenden Probe.Viele der allgemeinen Prinzipien knnen auch auf andere Techniken der Algen-zhlung (oder anderer Organismen) mit einem (konventionellen) Mikroskopangewandt werden; einige sind im Anhang E beschrieben. Diese Anleitungbehandelt weder
39、die Feldprobenahme noch die Analyse des Picoplanktons,noch die quantitative Analyse frei treibender Matten von Cyanobakterien (Blau-algen) noch spezifische Prparationstechniken fr Kieselalgen.2 Normative VerweisungenNicht anwendbar.3BegrifeFr die Anwendung dieses Dokuments gelten die folgenden Begri
40、ffe.3.1GenauigkeitGrad der bereinstimmung zwischen einem Ermittlungsergebnis oder Messer-gebnis und dem wahren Wert3.2AlgenobjektZhleinheit bzw. Kolonie einer oder mehrerer bei der Analyse des Phytoplank-tons festgestellten Algenzelle(n), die nicht mit anderen (unabhngig davon sedi-mentierenden) Tei
41、lchen in der Probe verbunden ist bzw. sind3.3NachweisgrenzeMindestanzahl und/oder Gre eines einzelnen Taxon oder einer Gruppe vonOrganismen in einer Probe, die bei deren Vorhandensein mit einer vorgegebe-nen Wahrscheinlichkeit noch erfasst werden kannANMERKUNG Diese Definition ist der in der chemisc
42、hen Analyse (kleinster wahrer Wert desmit diesem Verfahren nachweisbaren Parameters) verwendeten Definition analog.3.4FehlerAbweichung zwischen einem Einzelergebnis und dem wahren WertEN 15204:2006 (D)63.5FixierungSchutz vor Zerfall der morphologischen Struktur von Organismen3.6mikroskopisches Zhlfe
43、ldfr die Zhlung verwendeter optisch abgegrenzter Bereich (z. B. ein Quadratoder Raster) innerhalb des Gesichtsfeldes des Mikroskops3.7Nanoplanktonkleine Algen mit einer Gre von 2 mm bis 20 mm3.8numerische AperturNAMa fr das Auflsungsvermgen eines Objektivs, das sich aus dem Bre-chungsindex n des Med
44、iums zwischen Frontlinse des Objektivs und demUntersuchungsobjekt, multipliziert mit dem Sinus des halben ffnungswinkels des Objektivs ergibt (NA = n sin )3.9DurchfhrungsmerkmalMerkmal einer bestimmten Arbeitsvorschrift, die qualitative und quantitativeAspekte der Przision der Daten, systematischer
45、Kalibrierung, Empfindlichkeitdes Verfahrens und Bereich der Bedingungen, unter denen ein Verfahrenzufrieden stellende Daten liefert3.10PhytoplanktonGemeinschaft frei schwebender, vorwiegend photosynthetischer Organismenaquatischer Systeme, einschlielich Cyanobakterien (Blaualgen) und Algen3.11Picopl
46、anktonsehr kleine Algen mit einer Gre von 0,2 mmbis2mm3.12PrzisionGrad der bereinstimmung zwischen voneinander unabhngigen Ermittlungs-bzw. Messergebnissen, die unter festgelegten Bedingungen ermittelt wurdenEN 15204:2006 (D)73.13KonservierungSchutz der organischen Substanz vor Zersetzung (Abbau)3.1
47、4Arbeitsvorschriftspezifischer Arbeitsablauf eines Analysenverfahrens bezglich des Volumensder Probe oder Teilprobe, der mikroskopischen Vergrerung, der Anzahl aus-zuzhlender Zellen, des taxonomischen Niveaus der Bestimmung usw.3.15WiederholprzisionPrzision unter Wiederholbedingungen3.16Wiederholbed
48、ingungenBedingungen, unter denen voneinander unabhngige Ermittlungs- bzw. Mess-ergebnissen mit demselben Verfahren an denselben Messobjekten in demsel-ben Labor durch denselben Bearbeiter mit derselben Gerteausrstung in kur-zen Zeitabstnden ermittelt werdenANMERKUNG Diese Definition sollte als der F
49、ehler interpretiert werden, der bei Wiederho-lungszhlungen derselben Probe durch denselben Untersucher in derselben Zhlkammer unterVerwendung desselben Mikroskops innerhalb eines Tages auftritt.3.17VergleichprzisionPrzision unter Vergleichsbedingungen3.18VergleichbedingungenBedingungen, unter denen voneinander unabhngige Ermittlungs- bzw. Mess-er
