1、DEUTSCHE NORM Dezember 2003Mikrobiologie von Lebensmitteln und FuttermittelnHorizontales Verfahren zum Nachweis von prsumtivpathogenen Yersinia enterocolitica(ISO 10273:2003) Deutsche Fassung EN ISO 10273:2003EN ISO 10273ICS 07.100.30Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal methodfo
2、r the detection of presumptive pathogenic Yersinia enterocolitica(ISO 10273:2003); German version EN ISO 10273:2003Microbiologie des aliments Mthode horizontale pour la recherchede Yersinia enterocolitica prsumes pathognes (ISO 10273:2003);Version allemande EN ISO 10273:2003Die Europische Norm EN IS
3、O 10273:2003 hat den Status einer Deutschen Norm.Nationales VorwortDie Europische Norm EN ISO 10273:2003 enthlt unverndert die Internationale Norm ISO 10273, dievom SC 9 Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln (Sekretariat: Frankreich) des TechnischenKomitees ISO/TC 34 Lebensmittelerzeugni
4、sse (Sekretariat: Ungarn) erarbeitet wurde. Aufgrund derErgebnisse der parallelen Abstimmung im Rahmen der Wiener Vereinbarung ist diese Norm ebenso alsEuropische Norm EN ISO 10273:2003 erschienen.Die Mitarbeit des DIN im SC 9 des ISO/TC 34 und in der Arbeitsgruppe 6 des CEN/TC 275 Lebensmittel-anal
5、ytik Horizontale Verfahren wird ber den Arbeitsausschuss Mikrobiologische Lebensmittelunter-suchung einschlielich Schnellverfahren des Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftlicheProdukte (NAL) wahrgenommen.Fr die im Abschnitt 2 zitierten Internationalen Normen wird im Folgenden auf die en
6、tsprechendenDeutschen Normen hingewiesen:ISO 6887 (alle Teile) siehe DIN EN ISO 6887 (alle Teile)ISO 8261 siehe DIN EN ISO 8261ISO/TS 11133-1 siehe DIN V ENV ISO 11133-1Fortsetzung Seite 2und 35 Seiten ENNormenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) imDIN Deutsches Institut fr
7、Normung e. V. DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. .Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, Ref. Nr. DIN EN ISO 10273:2003-12nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet. Preisgr. 16 Vertr.-Nr. 2316Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 107
8、72 BerlinNormCD Stand 2004-03DIN EN ISO 10273:2003-122Nationaler Anhang NA(informativ)LiteraturhinweiseDIN EN ISO 6887 (alle Teile), Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Vorbereitung von Unter-suchungsproben und Herstellung von Erstverdnnungen und von Dezimalverdnnungen fr mikrobiolo-gi
9、sche Untersuchungen.DIN EN ISO 8261, Milch und Milchprodukte Allgemeiner Leitfaden fr die Vorbereitung von Unter-suchungsproben und die Herstellung von Anschttelungen und Dezimalverdnnungen fr mikrobiologischeUntersuchungen (ISO 8261:2001); Deutsche Fassung EN ISO 8261:2001.DIN V ENV ISO 11133-1, Mi
10、krobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Anleitungen fr die Zu-bereitung und Herstellung von Nhrmedien Teil 1: Allgemeine Anleitungen fr die Qualittssicherungbei der Zubereitung von Nhrmedien im Laboratorium (ISO/TS 11133-1:2000); Deutsche FassungENV ISO 11133-1:2000.NormCD Stand 2004-03EUROP
11、ISCHE NORMEUROPEAN STANDARDNORME EUROPENNEEN ISO 10273Juni 2003ICS 07.100.30Deutsche FassungMikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln -Horizontales Verfahren zum Nachweis von prsumtivMicrobiology of food and animal feedings stuffs - Horizontalmethod for the detection of presumptive pathogeni
12、cYersinia enterocolitica (ISO 10273:2003)Microbiologie des aliments - Mthode horizontale pour larecherche de Yersinia enterocolitica prsumespathognes (ISO 10273:2003)Diese Europische Norm wurde vom CEN am 20. Mai 2003 angenommen.Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu er
13、fllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denendieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listendieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitg
14、lied auf Anfrageerhltlich.Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache,die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch bersetzung in seine Landessprache gemacht und dem Management-Zentrummitgeteilt worden
15、 ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen.CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Dnemark, Deutschland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland,Island, Italien, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Portugal, Schweden, Schweiz, der Slowake
16、i, Spanien, derTschechischen Republik, Ungarn und dem Vereinigten Knigreich.EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNGEUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATIONCOMIT EUROPEN DE NORMALISATIONManagement-Zentrum: rue de Stassart, 36 B-1050 Brssel 2003 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welch
17、emVerfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. EN ISO 10273:2003 Dpathogenen Yersinia enterocolitica (ISO 10273:2003)NormCD Stand 2004-03EN ISO 10273:2003 (D)2InhaltSeiteVorwort.3Einleitung.31 Anwendungsbereich42 Normative Verweisungen43 Begriffe .44 Kurzbeschreib
18、ung .45 Chemikalien und Nhrmedien 56 Gerte und Hilfsmittel77 Probenahme .88 Vorbereitung der Untersuchungsprobe 89 Durchfhrung .810 Untersuchungsbericht.14Anhang A (normativ) Verfahrensdiagramm15Anhang B (normativ) Zusammensetzung und Herstellung von Nhrmedien und Reagenzien 16Anhang C (informativ)
19、Biochemische Differenzierung von Yersinia pseudotuberculosis, Yersiniaenterocolitica und biochemisch verwandter Spezies bei 30 C32Anhang D (informativ) (Biotypisierung) von Yersinia enterocolitica .33Literaturhinweise .34Anhang ZA (normativ) Normative Verweisungen auf internationale Publikationen mi
20、t ihrenentsprechenden europischen Publikationen35NormCD Stand 2004-03EN ISO 10273:2003 (D)3VorwortDieses Dokument EN ISO 10273:2003 wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products in Zusam-menarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 275 Food analysis Horizontal methods erarbeitet, dessenSekre
21、tariat vom DIN gehalten wird.Diese Europische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung einesidentischen Textes oder durch Anerkennung bis Dezember 2003, und etwaige entgegenstehende nationaleNormen mssen bis Dezember 2003 zurckgezogen werden.Entsprechend de
22、r CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lndergehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschland, Finnland, Frankreich,Griechenland, Irland, Island, Italien, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Portugal, Schweden,Schwe
23、iz, Slowakei, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn und Vereinigtes Knigreich.AnerkennungsnotizDer Text von ISO 10273:2003 wurde vom CEN als EN ISO 10273:2003 ohne irgendeine Abnderung genehmigt.ANMERKUNG Die normativen Verweisungen auf Internationale Normen sind im Anhang ZA (normativ) aufgefhrt.E
24、inleitungWegen der groen Vielfalt von Lebensmitteln und Futtermitteln kann dieses horizontale Verfahren nicht bis insEinzelne fr bestimmte Produkte geeignet sein. In diesem Fall drfen unterschiedliche Verfahren, die speziell aufdiese Produkte zutreffen, angewendet werden, wenn dies aus fachlichen Gr
25、nden absolut notwendig ist. Dennochsollte stets versucht werden, den vorgegebenen Regeln so weit wie mglich zu folgen.Bei der nchsten berarbeitung dieser Internationalen Norm werden smtliche dann zur Verfgung stehendenInformationen ber die Akzeptanz dieser Norm und die Grnde fr Abweichungen bei einz
26、elnen Produktenbercksichtigt werden.Die Harmonisierung von Untersuchungsverfahren kann nicht sofort erfolgen. Fr bestimmte Produktgruppenknnen bereits Internationale Normen und/oder nationale Normen vorliegen, die diesem horizontalen Verfahrennicht entsprechen. Es ist jedoch anzustreben, sie bei ein
27、er berarbeitung an diese Internationalen Normanzupassen, so dass es sich bei den noch verbleibenden Abweichungen nur um solche handelt, die fachlichbegrndet sind.WARNUNG Bei der Anwendung dieser Norm ist es mglich, dass gefhrliche Substanzen, Arbeitsgngeund Gerte angewendet werden. Es liegt in der V
28、erantwortung des Anwenders dieser Norm, geeigneteVorkehrungen fr den Arbeits- und Gesundheitsschutz zu treffen und vor der Anwendung festzulegen,welche einschrnkenden Vorschriften gelten.NormCD Stand 2004-03EN ISO 10273:2003 (D)41 AnwendungsbereichDiese Internationale Norm legt ein horizontales Verf
29、ahren zum Nachweis von prsumtiv pathogenen Yersiniaenterocolitica fest. Diese Internationale Norm gilt frg190 Erzeugnisse, die fr den menschlichen Verzehr oder als Futtermittel bestimmt sind,g190 Umgebungsproben im Bereich der Herstellung und der Behandlung von Lebensmitteln.2 Normative Verweisungen
30、Die folgenden zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datiertenVerweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabedes in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich nderungen).ISO 6887 (alle Teile), Microbiolog
31、y of food and animal feeding stuffs Preparation of test samples, initialsuspensions and decimal dilutions for microbiological examination.ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs General rules for microbiological examinations andAmd. 1:2001.ISO 8261, Milk and milk products General gu
32、idance for the preparation of test samples, initial suspensions anddecimal dilutions for microbiological examination.ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs Guidelines on preparation and production ofculture media Part 1: General guidelines on quality assurance for the prepara
33、tion of culture media in thelaboratory.3 BegriffeFr die Anwendung dieses Dokuments gelten die folgenden Begriffe.3.1prsumtiv pathogene Yersinia enterocoliticapsychrotrophe Bakterien, die auf festen selektiven Medien charakteristische Kolonien bilden und derenbiochemische Merkmale mit den beschrieben
34、en Pathogenittskriterien bereinstimmen, wenn nach dieserInternationalen Norm untersucht wird3.2Nachweis von prsumtiv pathogenen Yersinia enterocoliticaBestimmung des Vorhandenseins oder Nichtvorhandenseins dieser Bakterien in einer definierten Produktmengebei Prfung nach dieser Internationalen Norm4
35、 Kurzbeschreibung4.1 AllgemeinesDer Nachweis von prsumtiv pathogenen Yersinia enterocolitica erfordert die drei im Anschluss aufgefhrten auf-einander folgende Schritte.4.2 Anreicherung in selektiven flssigen MedienDie Probeneinwaage wird in zwei Anreicherungsmedien verbracht:g190 Pepton-Sorbit-Galle
36、nsalz-Bouillon (PSB-Bouillon) undg190 IrgasanTM-Ticarcillin-Kaliumchlorat-Bouillon (ITC-Bouillon).NormCD Stand 2004-03EN ISO 10273:2003 (D)5Die ITC-Bouillon wird 48 h und die PSB-Bouillon 3 bis 5 Tage bei jeweils 25 C bebrtet.ANMERKUNG Die Anreicherung in ITC-Bouillon zur Isolierung von Yersinia ent
37、erocolitica Biovar 4/Serovar O:3 wurdevorgeschlagen (siehe Literaturhinweise 1), nicht aber fr Biovar 1B/Serovar O:8, Biovar 2/Serovar O:9 (siehe Literaturhinweise2), Biovar 2/Serovar O:5,27. Die Isolierung von Yersinia enterocolitica Biovar 2/Serovar O:9 erfordert die Verwendung einesITC-Mediums oh
38、ne Chlorat, das 80 % der Originalkonzentration von Magnesiumchlorid und Malachitgrn enthlt (sieheLiteraturhinweise 3).4.3 Ausstreichen und IdentifizierenDie nach 4.2 gewonnenen Kulturen werden auf zwei feste Selektivmedien verimpft:g190 Agar mit Cefsulodin, IrgasanTMund Novobiocin (CIN-Agar) (siehe
39、Literaturhinweise 7),g190 Salmonella-Shigella-Agar mit Natriumdesoxycholat und Calciumchlorid (SSDC-Agar).Die Medien werden bei 30 C bebrtet und nach 24 h bzw. bei Bedarf nach 48 h in Abhngigkeit vom Medium aufdie Anwesenheit charakteristischer Kolonien von Yersinia enterocolitica geprft.4.4 Besttig
40、ungDie auf den Platten gewachsenen Kolonien werden visuell auf das Vorhandensein prsumtiver Yersiniaenterocolitica hin untersucht. Es folgen die biochemische Besttigung, Prfungen zur Biotypisierung, Prfung zurFeststellung der Pathogenittskriterien und mglicherweise serologische Untersuchungen.5 Chem
41、ikalien und NhrmedienZur blichen Laborpraxis siehe ISO 7218.Zu spezifischen Anforderungen an die Qualittssicherung und Leistung von Nhrmedien siehe ISO/TS 11133-1.ANMERKUNG ISO/TS 11133-2 ber praktische Anleitungen zur Leistungsprfung von Nhrmedien ist in Vorbereitung.Wegen der Vielzahl der Nhrmedie
42、n und Chemikalien werden der bersicht halber deren Zusammensetzungen inAnhang B aufgefhrt. Anhang B enthlt auch detaillierte Beschreibungen zur Zubereitung, Lagerung usw.5.1 Anreicherungsmedien5.1.1 Pepton-Sorbit-Gallensalz-Bouillon (PSB-Bouillon)Siehe B.1.5.1.2 IrgasanTM-Ticarcillin-Kaliumchlorat-B
43、ouillon (ITC-Bouillon)Siehe B.2.5.2 Feste Medien5.2.1 Cefsulodin-IrgasanTM-Novobiocin-Agar (CIN-Agar) 7Siehe B.3.5.2.2 Salmonella-Shigella-Agar mit Natriumdesoxycholat und Calciumchlorid (SSDC-Agar)Siehe B.4.NormCD Stand 2004-03EN ISO 10273:2003 (D)65.2.3 NhragarSiehe B.5.5.3 Medien und Chemikalien
44、fr die Identifizierung5.3.1 Harnstoff-Indol-MediumSiehe B.6.5.3.2 Reagenz zum IndolnachweisSiehe B.7.5.3.3 Kligler-AgarSiehe B.8.5.3.4 Reagenz zum OxidasenachweisSiehe B.9.5.3.5 Medien zur Decarboxylierung5.3.5.1 Lysindecarboxylase-MediumSiehe B.10.5.3.5.2 Ornithindecarboxylase-MediumSiehe B.11.5.3.
45、6 Medien zur Kohlenhydratvergrung (Saccharose, Rhamnose, Trehalose und Xylose)Siehe B.12.5.3.7 Simmons-Citrat-MediumSiehe B.13.5.3.8 TweenTM-Esterase-MediumSiehe B.14.5.3.9 Galle-skulin-AgarSiehe B.15.5.3.10 Casein-Soja-AgarSiehe B.16.5.3.11 Casein-Soja-Agar zum PyrazinamidasenachweisSiehe B.17.Norm
46、CD Stand 2004-03EN ISO 10273:2003 (D)75.3.12 Eisen(II)-ammoniumsulfatlsung zum PyrazinamidasenachweisSiehe B.18.5.3.13 Casein-Soja-Agar, mit Magnesium und Oxalat.Siehe B.19.5.4 KochsalzlsungSiehe B.20.5.5 Kaliumhydroxid in KochsalzlsungSiehe B.21.5.6 Fleischextraktbouillon (Kalbfleisch)Siehe B.22.5.
47、7 Steriles GlycerinSiehe B.23.6 Gerte und HilfsmittelEinmalgerte mit geeigneter Spezifikation sind eine geeignete Alternative zu wiederverwendbaren Glasgerten.Die bliche mikrobiologische Laborausrstung und im besonderen folgende Gerte:6.1 Gerte fr die Trockensterilisierung (Wrmeschrank) oder Dampfst
48、erilisierung (Autoklav), sieheISO 7218.6.2 Brutschrank, regelbar auf (22 1) C, (25 1) C, (30 1) C und (37 1) C.6.3 Trockenschrank oder Wrmeschrank, durch Umluft regelbar zwischen (37 1) C und (50 1) C.6.4 Wasserbder oder Brutschrnke, regelbar auf (22 1) C, (24 1) C und (25 1) C, vorzugsweise miteine
49、r geeigneten Umwlzvorrichtung.6.5 Wasserbad, regelbar auf 44 C bis 47 C.6.6 Kulturrhrchen, 18 mm x 180 mm, 9 mm x 180 mm und 12 mm x 50 mm.6.7 Flaschen und/oder Kolben, von geeignetem Nennvolumen.6.8 Petrischalen aus Glas oder Kunststoff, Durchmesser 90 mm bis 100 mm.6.9 Totalauslaufpipetten mit weiter ffnung, Nennvolumen 1 ml und 10 ml, 0,1-ml-Skalenteilun
