1、Juli 2006DEUTSCHE NORM Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 13DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 65.120!,eUl“966
2、5073www.din.deDDIN EN ISO 16472Futtermittel Bestimmung des amylase-behandelten neutral gereinigten Fasergehalts(ISO 16472:2006);Deutsche Fassung EN ISO 16472:2006Animal feeding stuffs Determination of amylase-treated neutral detergent fibre content (aNDF)(ISO 16472:2006);German version EN ISO 16472:
3、2006Aliments des animaux Dtermination du contenu en fibre dtergente neutre traite lamylase(ISO 16472:2006);Version allemande EN ISO 16472:2006Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin www.beuth.deGesamtumfang 22 SeitenDIN EN ISO 16472:2006-07 2 Nationales Vorwort Diese Europisch
4、e Norm enthlt unverndert die Internationale Norm ISO 16472:2006, die vom Unterkomitee SC 10 Futtermittel“ (Sekretariat: NEN, Niederlande) des Technischen Komitees ISO/TC 34 Lebensmittel-produkte“ (Sekretariat: MSZT, Ungarn) erarbeitet wurde. Auf Grund des Beschlusses des CEN/TC 327 wurde die Bearbei
5、tung im parallelen Abstimmungsverfahren unter Federfhrung des ISO/SC 10 durchgefhrt. Die Mitarbeit des DIN beim Europischen Komitee fr Normung (CEN) wird fr den Bereich des CEN/TC 327 Futtermittel Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ (Sekretariat: NEN, Niederlande) ber das nationale Spiegelgremiu
6、m, den Arbeitsausschuss Futtermittel“ des Normenausschusses Lebensmittel und landwirt-schaftliche Produkte (NAL) wahrgenommen. EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN ISO 16472 April 2006 ICS 65.120 Deutsche Fassung Futtermittel Bestimmung des amylase-behandelten neutral gereinigten Fas
7、ergehalts (ISO 16472:2006) Animal feeding stuffs Determination of amylase-treated neutral detergent fibre content (aNDF) (ISO 16472:2006) Aliments des animaux Dtermination du contenu en fibre dtergente neutre traite lamylase (ISO 16472:2006) Diese Europische Norm wurde vom CEN am 23. Mrz 2006 angeno
8、mmen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu erfllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listen dieser nationalen Normen mit ihren
9、 bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache, die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch ber
10、setzung in seine Landessprache gemacht und dem Management-Zentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien
11、, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern.EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZAT
12、ION COMIT EUROPEN DE NORMALISATIONManagement-Zentrum: rue de Stassart, 36 B- 1050 Brssel 2006 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. EN ISO 16472:2006 DEN ISO 16472:2006 (D) 2 Inhalt Seite
13、 Vorwort 3 1 Anwendungsbereich .4 2 Normative Verweisungen4 3 Begriffe .4 4 Kurzbeschreibung .4 5 Reagenzien.4 6 Prfeinrichtung 5 7 Probenahme .6 8 Vorbereitung der Untersuchungsprobe 6 9 Durchfhrung.7 10 Berechnung und Angabe der Ergebnisse 12 11 Przision 13 12 Untersuchungsbericht . 14 Anhang A (i
14、nformativ) Ergebnisse des Ringversuchs . 15 Anhang B (informativ) Einstellung der hitzestabilen -Amylasearbeitslsung. 18 Literaturhinweise . 20 EN ISO 16472:2006 (D) 3 Vorwort Dieses Dokument (EN ISO 16472:2006) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Lebensmittel-erzeugnisse“ in Zusammenarbeit mit
15、dem Technischen Komitee CEN/TC 327 Futtermittel Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom NEN gehalten wird. Diese Europische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis Oktob
16、er 2006, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis Oktober 2006 zurckgezogen werden. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Fr
17、ankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnotiz Der Text von ISO 16472
18、:2006 wurde vom CEN als EN ISO 16472:2006 ohne irgendeine Abnderung genehmigt. EN ISO 16472:2006 (D) 4 WARNUNG Bei der Anwendung dieser Internationalen Norm ist es mglich, dass gefhrliche Substanzen, Arbeitsgnge und Gerte angewendet werden. Diese Internationale Norm erhebt nicht den Anspruch, dass a
19、lle mit ihrer Anwendung verbundenen Sicherheitsprobleme angesprochen werden. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders dieser Norm, geeignete Vorkehrungen fr den Arbeits- und Gesundheitsschutz zu treffen und vor der Anwendung festzulegen, welche einschrnkenden Vorschriften gelten. 1 Anwendungsbere
20、ich Diese Internationale Norm legt Verfahren zur Bestimmung des amylase-behandelten Faserrckstands, der in neutralem Waschmittel unlslich ist, in allen Arten von Futtermitteln fest. Sie beinhaltet ein gravimetrisches Routineverfahren und ein Referenzverfahren. 2 Normative Verweisungen Die folgenden
21、zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). ISO 6498:1998, Animal feeding stuffs Pr
22、eparation of test samples 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gilt der folgenden Begriff. 3.1 amylase-behandelter Fasergehalt, unlslich in neutralem Waschmittel (en: amylase-treated neutral detergent fibre (aNDF) content) Massenanteil der unlslichen Faserrckstnde, der nach dem in dieser Int
23、ernationalen Norm beschriebenen Verfahren bestimmt wird ANMERKUNG Der aNDF-Gehalt wird als Massenanteil in Prozent angegeben. 4 Kurzbeschreibung Eine Lsung eines neutralen Waschmittels (en: neutral detergent, ND) und hitzestabile -Amylase werden verwendet, um die in Futtermitteln vorkommenden leicht
24、 aufschliebaren Proteine, Lipide, Zucker, Strke und Pektine zu lsen. Dabei wird ein unlslicher Faserrckstand hinterlassen, der in Pflanzenmaterialien im Wesentlichen aus Bestandteilen der Zellwnde (Zellulose, Hemizellulose und Lignin) und in Tierprodukten im Wesentlichen aus unlslichen stickstoffhal
25、tigen Materialien besteht. 5 Reagenzien Es werden ausschlielich Chemikalien von anerkannter Analysenreinheit und destilliertes oder vollentsalztes oder Wasser von mindestens entsprechender Reinheit verwendet. 5.1 Natriumsulfit, (Na2SO3), wasserfrei. 5.2 Getrocknetes Maismehl (Maisgrtze, roh), gemahl
26、en, bis es durch ein 1-mm-Sieb in einer Messermhle durchgeht. EN ISO 16472:2006 (D) 5 5.3 Iod-Kaliumiodidlsung, die 2 g Kalium-Iodid und 1 g Iod in 100 ml Wasser beinhaltet. Die Lsung ist in einer braunen oder lichtundurchlssigen Flasche zu lagern. 5.4 Hitzestabile -Amylase, als eine Lsung oder ein
27、wssriger Extrakt von lyophilisiertem Enzympulver (etwa 1 g Pulver extrahiert in 100 ml Wasser). BEISPIEL Termamyl 120 l von Novo Enzymes oder Gleichwertiges. Die Lsung der hitzestabilen -Amylase oder der Extrakt des Enzympulvers wird so eingestellt, dass zwei Zugaben von 2 ml die Strke aus 0,5 g roh
28、er Maisstrke (5.2) auflsen. Fr die ausfhrliche Verfahrensbeschreibung zur Einstellung der hitzestabilen -Amylaselsung siehe Anhang B. 5.5 Lsung des neutralen Waschmittels (en: neutral detergent, ND) Zwischen 400 ml und 500 ml Wasser werden in einen 1-l-Kolben gegossen. 4,0 g Natriumhydroxid NaOH, 14
29、,6 g EDTA, 4,56 g Natriumhydrogenphosphat (Na2HPO4) und 6,81 g Natriumtetraborat-Decahydrat (Na2B4O7 10 H2O) werden hinzugefgt und es wird bis zur Auflsung gerhrt (falls notwendig, wird die Lsung erwrmt). NaOH und EDTA drfen durch 18,6 g Dinatrium-EDTA ersetzt werden. Unter einem Sicherheitsabzug we
30、rden 30 g Natriumlaurylsulfat und nach der Auflsung werden 10 ml Triethylenglycol (Entschumer-Hilfsmittel) hinzugefgt. Etwa 950 ml Wasser werden hinzugefgt und gerhrt. Der pH-Wert wird mit mit konzentrierter Salzsure HCl oder Natriumhydroxid NaOH zwischen 6,95 und 7,05 eingestellt und mit Wasser bis
31、 1 000 ml verdnnt. Falls der pH-Wert mehr als 0,5 Einheiten auerhalb des vorgegebenen Bereiches liegt, wird die Lsung verworfen. Die ND-Lsung wird bei Raumtemperatur gelagert. Falls es zu Ausfllungen kommt, wird die Lsung vor der Verwendung auf 25 C erwrmt und vor Gebrauch gerhrt. Das Herstelldatum
32、der ND-Lsung, die pH-Messergebnisse und die vorgenommenen Anpassungen werden im Chemikalienprotokoll erfasst. 6 Prfeinrichtung Die blichen Laborgerte und insbesondere die folgenden: 6.1 Analysenwaage, geeignet zum Wiegen auf 0,1 mg, mit einer Ablesbarkeit von 0,1 mg. 6.2 Zyklonmhle mit 2-mm-Sieb ode
33、r Messermhle mit 1-mm-Sieb, geeignet zum Mahlen von Proben, um eine geometrische Verteilung der durchschnittlichen Partikelgre von 220 m bis 260 m zu erreichen. 6.3 Rckflussapparatur mit einzelnen Heizeinheiten und Kaltwasserkhlern, die zu 600-ml-Kolben passen. Jede bliche Apparatur, die zur Bestimm
34、ung von Rohfasern geeignet ist, kann verwendet werden. Die Heizeinheiten sind so zu kalibrieren, dass 50 ml Wasser innerhalb von 4 min bis 5 min kochen, wenn Kaltwasserkhler verwendet werden. Eine Apparatur vom Typ Fibertec darf verwendet werden, diese sollte 50 ml Wasser innerhalb von 10 min zum Si
35、eden erwrmen. 6.4 Gooch-Tiegel mit Filterfrittenplatten Tiegel mit grobkrniger Porositt (Porenweite 40 m bis 60 m), hohe Form, Nennvolumen 40 ml bis 50 ml oder P2 (Porenweite 40 m bis 100 m), Nennvolumen 26 ml bis 28 ml. Neue Tiegel werden gereinigt und bei 500 C 1 h verascht. Die Tiegel werden nach
36、 jeder Verwendung durch dreistndiges Veraschen bei 500 C gereinigt, die Asche wird entfernt, die Tiegel werden in einer Waschlsung umgestrzt und 7 min bis 10 min in einem Ultraschallbad gereinigt. Die Tiegel werden mit heiem Wasser gesplt und bei Raumtemperatur mindestens 30 min mit Wasser getrnkt.
37、Die ffnung jedes Tiegels wird mit einem Gummistopfen versehen, der mit einem Anschluss zu einem Abscheider und zu einer EN ISO 16472:2006 (D) 6 Vakuumpumpe verbunden ist. Jeder Tiegel wird mit Wasser durchsplt, indem wiederholt der Unterteil des Tiegels an Wasser angeschlossen und dann abgenommen wi
38、rd, um einen krftigen Splvorgang auszulsen. Die Filtriergeschwindigkeit wird bei Bedarf wie folgt geprft. Jeder Tiegel wird mit 50 ml destilliertem Wasser gefllt (25 ml bei Fibertec P2-Tiegeln) und es wird die Zeit erfasst, die zur vollstndigen Ableitung ohne Vakuum bentigt wird (sollte 180 s 60 s b
39、ei Gooch-Tiegeln oder 75 s 30 s bei Fibertec P2 betragen). Falls die Entleerungszeit weniger als 100 s betrgt (oder weniger als 30 s bei Fibertec P2), ist der Tiegel zu verwerfen. Falls die Entleerungszeit weniger als 120 s betrgt (oder weniger als 45 s bei Fibertec P2), ist der Tiegel auf Risse zu
40、berprfen. Falls die Entleerungszeit mehr als 240 s betrgt (oder mehr als 105 s bei Fibertec P2), ist der Tiegel mit saurer oder alkalischer Reinigungslsung zu reinigen (siehe Literatur-hinweis 1). Falls die Reinigung die Filtrationsgeschwindigkeit nicht verbessert, ist der Tiegel zu verwerfen. Anste
41、lle von P2-Tiegeln drfen Tiegel aus nichtrostendem Stahl mit einem Sieb aus nichtrostendem Stahl (Maschenweite 90 m) verwendet werden. 6.5 Vakuumfilter-Verteiler (Z. B. Typ Fibertec), der eine angemessene Durchtrnkung der Faserrckstnde ermglicht. Die Verteiler sollten gasdicht mit dem Tiegel verbund
42、en sein, um die Schaumbildung in den Vakuumleitungen zu vermindern. Es werden dickwandige Vakuumrohre verwendet, um den Verteiler mit einem Abscheider (4 l bis 18 l) und der Vakuumpumpe zu verbinden. Ein Vakuumsammelgef (18 l) zwischen dem Abscheider und der Vakuumquelle wird empfohlen, um eine zur
43、Schaumentfernung angemessene Vakuumleistung sicherzustellen. 6.6 Zufuhr von kochendem Wasser Es wird ein Generator zur ununterbrochenen Erzeugung von kochendem Wasser, wie in Literaturhinweis 1 beschrieben, oder eine geeignete Alternative verwendet. Die Apparatur muss zur Bereitstellung von kochende
44、m Wasser (Temperatur 95 C) in einer Grenordnung geeignet sein, dass alle Proben zur gleichen Zeit mit einem feinen Strahl aus einer Dse (Fliegeschwindigkeit 35 ml bis 40 ml je s; die Spitze einer 2,5-ml-Kunststoffeinwegpipette stellt eine akzeptable Dse dar) gewaschen werden knnen. Eine feine Dse ve
45、rringert die Wassermenge, um die Partikel auf den Tiegel zu berfhren, und liefert den notwendigen Wasserdruck, um die an den Wnden des Kolben haftenden Rckstnde zu lsen. Es ist entscheidend, dass das Wasser bei Zugabe zu den Tiegeln kocht, besonders bei Proben, die Strken, Pektinsubstanzen, Schleims
46、toffe oder Glykoproteine enthalten. Bei Apparaturen vom Typ Fibertec werden eine Spritze mit Kegelsprhdse zum Splen des Khlers und eine 60-ml-Einwegspritze mit Kaliber 12 (Lnge 10 cm) zur Entfernung aller am Khler haftenden Rckstnde verwendet. 7 Probenahme Die Probenahme ist nicht Bestandteil des in
47、 dieser Internationalen Norm festgelegten Verfahrens. Ein empfohlenes Probenahmeverfahren ist in ISO 6497 gegeben. Es ist wichtig, dass das Laboratorium eine Probe erhlt, die tatschlich reprsentativ und whrend des Transports und der Lagerung nicht beschdigt oder verndert worden ist. 8 Vorbereitung d
48、er Untersuchungsprobe Die Untersuchungsproben sind gem ISO 6498 vorzubereiten. Zur Probenlagerung und zur Erleichterung der Probenvermahlung sollte die Probe lufttrocken sein (etwa 90 % Massenanteil Trockensubstanz). EN ISO 16472:2006 (D) 7 Feuchte Proben werden bei 5 % vorextrahiert werden, bei Pro
49、ben mit einem Fettgehalt 10 % muss dies geschehen. Zur Vorextraktion mit Aceton wird eine Untersuchungsprobe in einen Tiegel berfhrt und ausgewogen. Diese wird auf der Filtrationsvorrichtung platziert und mit 40 ml bis 50 ml Aceton viermal extrahiert (das Material wird mindestens 5 min durchtrnkt und dreimal whrend jeder Durchtrnkung gerhrt).
