1、April 2006DEUTSCHE NORM Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 13DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.30!,cy“
2、9648886www.din.deDDIN EN ISO 21871Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Horizontales Verfahren zur Bestimmung niedriger Zahlen vonVerfahren der wahrscheinlichsten Keimzahl (MPN) undNachweisverfahren (ISO 21871:2006);Deutsche Fassung EN ISO 21871:2006Microbiology of food and animal feedin
3、g stuffs Most probable number technique and detection method (ISO 21871:2006);German version EN ISO 21871:2006Microbiologie des aliments nombre Technique du nombre le plus probable et mthode de recherche (ISO 21871:2006);Version allemande EN ISO 21871:2006Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag
4、GmbH, 10772 Berlin www.beuth.deGesamtumfang 21 Seitenprsumtivem Bacillus cereus Horizontal method for the determination of low numbers of presumptive Bacillus cereus Mthode horizontale pour le dnombrement de Bacillus cereus prsums en petitDIN EN ISO 21871:2006-04 2 Nationales Vorwort Diese Europisch
5、e Norm enthlt unverndert die Internationale Norm ISO 21871:2006, die vom Unterkomitee SC 9 Mikrobiologie“ (Sekretariat: Frankreich) des Technischen Komitees ISO/TC 34 Lebensmittel-erzeugnisse“ (Sekretariat: Ungarn) erarbeitet wurden. Aufgrund der Ergebnisse der parallelen Abstimmung im Rahmen der Wi
6、ener Vereinbarung ist diese Norm ebenso als Europische Norm EN ISO 21871:2006 erschienen. Die Mitarbeit des DIN im SC 9 des ISO/TC 34 und in der Arbeitsgruppe WG 6 des CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren“ (Sekretariat Deutschland) wird ber den Arbeitsausschuss Mikrobiologische Lebe
7、nsmitteluntersuchung einschlielich Schnellverfahren“ des Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte wahrgenommen. Fr die im Abschnitt 2 zitierten Internationalen Normen wird im Folgenden auf die entsprechenden Deutschen Normen hingewiesen: ISO 6887 (alle Teile) siehe DIN EN ISO
8、6887 (alle Teile) ISO 8261 siehe DIN ISO 8261 ISO/TS 11133-1 siehe DIN V ENV ISO 11133-1 ISO/TS 11133-2 siehe DIN ISO/TS 11133-2 Nationaler Anhang NA (informativ) Literaturhinweise DIN EN ISO 6887 (alle Teile), Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Vorbereitung von Untersuchungsproben un
9、d Herstellung von Erstverdnnungen und von Dezimalverdnnungen fr mikrobiologische Untersuchungen DIN ISO 8261, Milch und Milchprodukte Allgemeiner Leitfaden fr die Vorbereitung von Untersuchungs-proben und die Herstellung von Anschttelungen und Dezimalverdnnungen fr mikrobiologische Untersuchungen DI
10、N V ENV ISO 11133-1, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Anleitungen fr die Zubereitung und Herstellung von Nhrmedien Teil 1: Allgemeine Anleitungen fr die Qualittssicherung bei der Zubereitung von Nhrmedien im Laboratorium DIN ISO/TS 11133-2, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futter
11、mitteln Anleitung fr die Vorbereitung und Herstellung von Nhrmedien Teil 2: Praktische Anleitung zur Leistungsprfung von Nhrmedien EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN ISO 21871 Januar 2006 ICS 07.100.30 Deutsche Fassung Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Horizontales
12、Verfahren zur Bestimmung niedriger Zahlen von prsumtivem Bacillus cereus Verfahren der wahrscheinlichsten Keimzahl (MPN) und Nachweisverfahren (ISO 21871:2006) Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the determination of low numbers of presumptive Bacillus cereus Most pr
13、obable number technique and detection method(ISO 21871:2006) Microbiologie des aliments Mthode horizontale pour le dnombrement de Bacillus cereus prsums en petit nombre Technique du nombre le plus probable et mthode de recherche (ISO 21871:2006) Diese Europische Norm wurde vom CEN am 28. November 20
14、05 angenommen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu erfllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listen dieser nationalen Normen
15、mit ihren bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache, die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung
16、durch bersetzung in seine Landessprache gemacht und dem Zentralsekretariat mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island
17、, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern.EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STA
18、NDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATIONManagement-Zentrum: rue de Stassart, 36 B-1050 Brssel 2006 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. EN ISO 21871:2006 DEN ISO 21871:2006 (D) 2 Vorw
19、ort Dieses Dokument (EN ISO 21871:2006) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products“ in Zu-sammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfah-ren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Diese Europische Norm muss den Status einer nati
20、onalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis Juli 2006, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis Juli 2006 zurckgezogen werden. Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Texte dieses Dokuments Patentrechte berhren k
21、nnen. CEN und/oder CENELEC sind nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschlan
22、d, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnoti
23、z Der Text von ISO 21871:2006 wurde vom CEN als EN ISO 21871:2006 ohne irgendeine Abnderung geneh-migt. EN ISO 21871:2006 (D) 3 Inhalt Seite Vorwort 2 Einleitung 4 1 Anwendungsbereich .5 2 Normative Verweisungen5 3 Begriffe .5 4 Kurzbeschreibung.5 5 Verdnnungsflssigkeit, Nhrmedien und Reagenzien6 6
24、Gerte und Glasgerte13 7 Probenahme.14 8 Probenvorbereitung 14 9 Durchfhrung.14 10 Berechnung und Angabe der Ergebnisse.17 11 Untersuchungsbericht 17 Anhang A (normativ) Fliediagramm des Auszhlverfahrens.18 Literaturhinweise19 EN ISO 21871:2006 (D) 4 Einleitung Wegen der groen Vielfalt von Lebensmitt
25、el- und Futtermittelprodukten ist dieses horizontale Verfahren mg-licherweise nicht bis ins Einzelne fr bestimmte Produkte geeignet. In diesem Fall drfen unterschiedliche Verfahren angewendet werden, die fr diese Produkte spezifisch sind, wenn sie aus berechtigten technischen Grnden absolut erforder
26、lich sind. Dennoch sollte stets versucht werden, dieses horizontale Verfahren so weit wie mglich anzuwenden. Bei der nchsten berarbeitung dieser Internationalen Norm werden smtliche dann zur Verfgung stehen-den Informationen hinsichtlich des Umfangs, in dem dieses horizontale Verfahren befolgt wurde
27、, und die Grnde fr Abweichungen von diesem Verfahren bei besonderen Produkten bercksichtigt werden. Die Harmonisierung von Untersuchungsverfahren kann nicht sofort erfolgen, und fr bestimmte Produkt-gruppen knnen bereits Internationale Normen und/oder nationale Normen vorliegen, die diesem horizonta
28、len Verfahren nicht entsprechen. Es ist jedoch anzustreben, dass solche Normen bei einer berarbeitung vern-dert werden, um dieser Internationalen Norm zu entsprechen, so dass es sich bei eventuell noch verbleiben-den Abweichungen von diesem horizontalen Verfahren nur um solche handelt, die aus berec
29、htigten techni-schen Grnden erforderlich sind. EN ISO 21871:2006 (D) 5 1 Anwendungsbereich Diese Internationale Norm legt ein horizontales Verfahren fr den Nachweis oder die Zhlung niedriger An-zahlen lebensfhiger Keime von prsumtivem Bacillus cereus mittels der Technik der wahrscheinlichsten Keimza
30、hl fest. Diese Internationale Norm gilt fr Erzeugnisse, die fr den menschlichen Verzehr oder als Futtermittel bestimmt sind, und Umgebungsproben im Bereich der Herstellung und Behandlung von Lebensmitteln. 2 Normative Verweisungen Die folgenden zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokume
31、nts erforderlich. Bei datierten Ver-weisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). ISO 6887 (all parts), Microbiology of food and animal feeding stuffs Preparation of test samp
32、les, initial sus-pension and decimal dilutions for microbiological examination ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs General rules for microbiological examination ISO 8261, Milk and milk products General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions and decimal
33、 dilutions for microbiological examination ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs Guidelines on quality assurance and per-formance testing of culture media Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory ISO/TS 11133-2, M
34、icrobiology of food and animal feeding stuffs Guidelines on quality assurance and per-formance testing of culture media Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gilt der folgende Begriff. 3.1 prsumtiver Bacillus cereus Mikroorg
35、anismus, der auf der Oberflche selektiver Nhrbden typische oder atypische Kolonien bildet und der unter den in dieser Internationalen Norm festgelegten Bedingungen positive Besttigungsreaktionen zeigt ANMERKUNG Im Sinne eines praktikablen Untersuchungsverfahrens beschreibt diese als Grundlage des Ve
36、rfahrens dienende Definition von prsumtivem Bacillus cereus nicht ausschlielich Stmme von Bacillus cereus. Im Besonderen sind die Besttigungsuntersuchungen nicht geeignet, zwischen Bacillus cereus und anderen nah verwandten, aber weni-ger hufig nachzuweisenden Bacillus-Arten, wie Bacillus weihenstep
37、hanensis, Bacillus anthracis, Bacillus thuringiensis, Bacillus mycoides und Bacillus pseudomycoides zu unterscheiden. 4 Kurzbeschreibung 4.1 Zhlverfahren 4.1.1 Beimpfen von drei Rhrchen mit doppelt konzentriertem flssigem selektivem Anreicherungsmedium 5.3.1.1 a) mit einer festgelegten Menge der Ers
38、tverdnnung (Ausgangssuspension). 4.1.2 Beimpfen von drei Rhrchen mit einfach konzentriertem flssigem selektivem Anreicherungsmedium 5.3.1.1 b) mit einer festgelegten Menge der Erstverdnnung (Ausgangssuspension). Dann wird unter den gleichen Bedingungen einfach konzentriertes flssiges selektives Anre
39、icherungsmedium 5.3.1.1 b) mit fest-gelegten Mengen von Dezimalverdnnungen der Erstverdnnung (Ausgangssuspension) beimpft. EN ISO 21871:2006 (D) 6 4.1.3 Bebrten der Rhrchen mit doppelt konzentriertem und einfach konzentriertem flssigem selektivem Anreicherungsmedium (5.3) bei 30 C fr 48 h. 4.1.4 Bei
40、mpfen des festen Selektivmediums (5.4 oder 5.5) aus dem flssigen selektiven Anreicherungs-medium (5.3). 4.1.5 Bebrten des festen Selektivmediums (5.4 oder 5.5) fr 18 h bis 48 h bei 37 C (5.4) oder 30 C (5.5) und Untersuchen der Platten auf Anwesenheit von Kolonien, die nach ihren charakteristischen
41、Merkmalen als prsumtiver Bacillus cereus angesehen werden. 4.1.6 Besttigung von verdchtigen Kolonien mittels Hmolysereaktion (9.1.5.3) oder einer mikroskopi-schen Untersuchung (9.1.5.4). 4.1.7 Berechnung der wahrscheinlichsten Keimzahl (MPN) der prsumtiven Bacillus cereus je Gramm oder je Milliliter
42、 der Probe durch Bezugnahme ausgewhlter Verdnnungen auf MPN-Tabellen. 4.2 Nachweisverfahren 4.2.1 Beimpfen eines flssigen selektiven Anreicherungsmediums (5.3) mit einer festgelegten Menge der Erstverdnnung der Untersuchungsprobe. 4.2.2 Bebrten des Rhrchens fr 48 h bei 30 C. 4.2.3 Beimpfen des feste
43、n Selektivmediums (5.4 oder 5.5) aus dem flssigen selektiven Anreicherungsme-dium (5.3). 4.2.4 Bebrten des festen Selektivmediums (5.4 oder 5.5) fr 18 h bis 48 h bei 37 C (5.4) oder 30 C (5.5) und Untersuchen der Platten auf Anwesenheit von Kolonien, die nach ihren charakteristischen Merkmalen als p
44、rsumtiver Bacillus cereus angesehen werden. 4.2.5 Besttigung von verdchtigen Kolonien mittels Hmolysereaktion (9.1.5.3) oder einer mikroskopi-schen Untersuchung (9.1.5.4). 4.2.6 Angabe der Ergebnisse als Anwesenheit“ oder Abwesenheit“ von prsumtivem Bacillus cereus in Gramm oder Milliliter des Produ
45、kts. 5 Verdnnungsflssigkeit, Nhrmedien und Reagenzien 5.1 Allgemeines Zur blichen Laboratoriumspraxis siehe ISO 7218, ISO/TS 11133-1 und ISO/TS 11133-2. 5.2 Verdnnungsflssigkeit Siehe ISO 6887 (zutreffender Teil), ISO 8261 und jede spezifische Norm fr das zu untersuchende Produkt. EN ISO 21871:2006
46、(D) 7 5.3 Flssiges selektives Anreicherungsmedium: Trypton-Soja-Polymyxin-Bouillon (TSPB) (siehe Literaturhinweis 1) 5.3.1 Grundmedium 5.3.1.1 Zusammensetzung a) Doppelt konzentriertes Medium b) Einfach konzentriertes Medium Casein, enzymatisch verdaut 34,0 g 17,0 g Soja, enzymatisch verdaut 6,0 g 3
47、,0 g Natriumchlorid (NaCl) 10,0 g 5,0 g Glucose 5,0 g 2,5 g Dikaliumhydrogenphosphat (K2HPO4) 5,0 g 2,5 g Wasser 1 000 ml 1 000 ml 5.3.1.2 Herstellung Die Bestandteile bzw. das vollstndige Grundmedium werden durch Erhitzen und Schtteln im Wasser gelst. Im Bedarfsfall wird der pH-Wert bei 25 C nach d
48、em Sterilisieren auf 7,3 0,2 eingestellt. Jeweils 10 ml doppelt konzentriertes Medium (5.3.1.1 a) und 9 ml einfach konzentriertes Medium (5.3.1.1 b) der Medien werden auf Kulturrhrchen geeigneter Gre z. B. 16 mm 160 mm (6.7) verteilt. Die Medien werden 15 min im Autoklaven (6.1) bei 121 C sterilisie
49、rt. 5.3.2 Polymyxin B-Sulfat-Lsung 5.3.2.1 Zusammensetzung Polymyxin B-Sulfat 500 000 Einheiten (entspricht etwa 0,05 g) Wasser 50 ml 5.3.2.2 Herstellung Das Polymyxin B-Sulfat wird im Wasser gelst, und die Lsung wird sterilfiltriert. 5.3.3 Vollstndiges Medium Unmittelbar vor der Verwendung werden 200 l (bei doppelt k
