1、KSKSKSKS SKSKSKS KSKSKS SKSKS KSKS SKS KS 2006 10 31 http:/www.kats.go.krKS I ISO 13829umu KS I ISO 13829： 2006 (2011 )I ISO 13829： 2006 : ( ) ( ) KIST ( ) : (http:/www.standard.go.kr) ： ：2001 12 26 ：2006 10 31 ：2011 12 26 2011-0623 ： ： ( 02- 509-7270) (http:/www.kats.go.kr). 10 5 , . ICS 13.060.70
2、KS I ISO umu 13829： 2006(2011 ) Water quality Determination of the genotoxicity of water and waste water using the umu-test 2000 1 ISO 13829 Water quality Determination of the genotoxicity of water and waste water using the umu-test . . . . . . 1. umu (1) . umuC (2) SOS (3) . (1) ( ) (2) umuC UV mut
3、agenesis( ) C . umuC DNA . (3) SOS . 2. . . . IEC ISO . KS M ISO 5667 16 16： 3. . A . 3.1 (stock culture) 3.2 (overnight culture) 3.3 (pre-culture) (overnight) 3.4 (inoculum, inoculation material) I ISO 13829： 2006 2 3.5 (concentration effect relationship) umuC 3.6 (培地)(culture medium) 3.7 (test sam
4、ple) , , , pH , . 3.8 (dilution series) 3.9 (test mixture) , , 3.10 (negative control) 3.10.1 (blank) 3.10.2 (negative control for test samples) , , 3.10.3 (solvent control) , , 3.11 (positive control) , , 4- N- 2- . 3.12 S9 (S9 fraction) 9 000 g . 4. . 4 umuC (induction) . 5. 5.1 5.1.1 , Enterobact
5、eriaceae (gram negative) ( ) ( ) . TA1535 . umuC lacZ pSK1002 . “TA1535/pSK1002”( B ) . 5.1.2 2 mL 10 % (DMSO) 20 % 150 L 80 . . 5.2 . . 5.2.1 c(HCl) 1 mol/L 5.2.2 c(NaOH) 1 mol/L 5.2.3 (DMSO) C2H6SO4 DMSO . 5.2.4 TGA , , . 10 g, (NaCl) 5 g, 4-(2- )-l-HEPES(piperazineethanesulphonic acid) 11.9 g pH
6、I ISO 13829： 2006 3 (7.00.2) 980 mL 20 121 . D( ) (anhydrous) 2 g 20 mL . TGA 1 000 mL 50 mg . 4 20 . 5.2.5 10 TGA 10 TGA(5.2.4) . 4 14 . 5.2.5.1 S9 . 10 g, (NaCl) 5 g HEPES 11.9 g 80 mL . pH (7.00.2) . D( ) (anhydrous) 2 g 20 mL . 121 20 100 mL 50 mg . 5.2.5.2 S9 . 10 g, (NaCl) 5 g, (KCl) 2.46 g, (
7、MgCl26H2O) 1.63 g HEPES 11.9 g 80 mL . pH (7.00.2) . D( ) (anhydrous) 2 g 20 mL . 121 20 100 mL 50 mg . 5.2.6 B (4) . (Na2HPO4 2H2O) 20.18 g, (NaH2PO4 H2O) 5.5 g, (KCl) 0.75 g, 7 (MgSO4 7H2O) 0.25 g 900 mL . pH (7.00.2) . (SDS) 1.0 g 1 000 mL . B 100 mL 2 0.27 mL . (4) . 5.2.7 pH (7.00.2) (4) (Na2HP
8、O4 2H2O) 1.086 g (NaH2PO4 H2O) 0.538 g 100 mL . pH (7.00.2) 121 20 . 5.2.8 (4) (Na2CO3) 105.99 g 900 mL 1 000 mL . 5.2.9 D (ONPG) ONPG 45 mg (5.2.7) . ONPG , ( 2 ) . . 5.2.10 S9 . S9 . . S9 . 5.2.11 . NADP ( salt) 148 mg 6 ( salt) 76 mg 10TGA(5.2.5) 5 mL . 5.2.12 (DMSO) . 2 AA . 4 N (4 NQO) 5 mg DMS
9、O 5 mL . (stock solution) 20 (aliquots) . 30 % DMSO (DMSO/： 3/7) 2 000 . I ISO 13829： 2006 4 (2 AA) 5 mg DMSO 5 mL . 20 . 30 % DMSO (DMSO/： 3/7) 500 . 6. . ： 250 mL 500 mL ： 1 mL, 10 mL, 25 mL (8 channel)： 550 L, 50200 L, 50300L ： 17 mL 34 mL ： 500 mL , ： 100 mL ： 2 mL( ) 2530 (1) (water bath) ( 125
10、150 r/min) (281) (371) 96 ( 380 L) / (1 cm cuvettes) 7. 4 . 48 KS M ISO 5667 16 18 . (： ) , (KS M ISO 5667 16) . . (5.2.1) (5.2.2) pH (7.00.2) . . . pH (KS M ISO 5667 16). 8. / . / (blank) . , . 9. 9.1 . TGA (5.2.4) 20 mL . (5.1.2) . TGA (5.2.4) 1 mL . I ISO 13829： 2006 5 (10 min, 3 000 g). . TGA (5
11、.2.4) 1 mL . TGA 0.5 mL . (371) (12 , ) . 800 FNU(formazine nephelometric units) . 9.2 TGA (37 )(5.2.4) 10 . (371) 1.5 . TGA 1 cm cuvette(KS M ISO 7027, 1 ) (60020) nm TGA 340350 FNU . . 10 . 9.3 S9 (9.2) . 1 . a) 180 L . AF, 13, 16 . b) ( ) 360 L (AF, 13： A 1, 13； B 2, 13 ). c) 1： 2 ( 1 ). . d) (AF
12、, 1012) 180 L . e) (H1H6) 153 L . f) 30 % /DMSO 27 L H4H6 . g) (H1H3) 2 000 NQO (stock solution)(5.2.12) 27 L . ： 4 NQO 50 ng/mL h) 10TGA (5.2.5) 20 L (AH, 112) . i) (340350 FNU) (9.2) 70 L (AF, 112) ( , ). j) (9.2) 70 L , , (G, 112 H, 16) . k) TGA (5.2.4) 70 L (blank)(H7H12) . I ISO 13829： 2006 6 1
13、 ( 96 ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A S1 1： 1.5 S1 1： 1.5 S1 1： 1.5 S1 1： 3 S1 1： 3 S1 1： 3 S1 1： 6 S1 1： 6 S1 1： 6 S1 1： 12 S1 1： 12 S1 1： 12B S2 1： 1.5 S2 1： 1.5 S2 1： 1.5 S2 1： 3 S2 1： 3 S2 1： 3 S2 1： 6 S2 1： 6 S2 1： 6 S2 1： 12 S2 1： 12 S2 1： 12C S3 1： 1.5 S3 1： 1.5 S3 1： 1.5 S3 1： 3 S3 1： 3 S3 1：
14、 3 S3 1： 6 S3 1： 6 S3 1： 6 S3 1： 12 S3 1： 12 S3 1： 12D S4 1： 1.5 S4 1： 1.5 S4 1： 1.5 S4 1： 3 S4 1： 3 S4 1： 3 S4 1： 6 S4 1： 6 S4 1： 6 S4 1： 12 S4 1： 12 S4 1： 12E S5 1： 1.5 S5 1： 1.5 S5 1： 1.5 S5 1： 3 S5 1： 3 S5 1： 3 S5 1： 6 S5 1： 6 S5 1： 6 S5 1： 12 S5 1： 12 S5 1： 12F S6 1： 1.5 S6 1： 1.5 S6 1： 1.5 S6
15、1： 3 S6 1： 3 S6 1： 3 S6 1： 6 S6 1： 6 S6 1： 6 S6 1： 12 S6 1： 12 S6 1： 12G NC NC NC NC NC NC NC NC NC NC NC NC H PC PC PC SC SC SC BL BL BL BL BL BL S1 1, 1： 1.5, 1： 3, 1： 6, 1： 12 S6 6, 1： 1.5, 1： 3, 1： 6, 1： 12 NC PC SC BL 9.4 S9 10TGA 9.3(a)9.3 g) . 9.3 g, H1H3 4 NQO , 3 % DMSO(5.2.12) 500 2 AA (st
16、ock solution) 27 L . 200 ng/mL 2 AA . a) S9 (5.2.10). b) 20 L . c) (340 350 FNU) 15 mL S9 450 L( .) . d) S9 70 L A1F12 . e) TGA 1.5 mL S9( .) 45 L S9 70 L . 9.5 A, B, C S9(9.3) , S9(9.4) . . . (120150 r/min) A 2 (371) . . 1 (2 ) TGA ( 270 L) B . (371) . . A 30 L B (10 ) . I ISO 13829： 2006 7 A B 2 .
17、 C . 10. 10.1 2 BA(600nm20nm) . 10.2 umuC . (C) B (5.2.6) 120 L . (281) ( ). B ( , ) 30 L C . ONPG (5.2.9) . (281) 30 . (5.2.8) 120 L C . . (42020) nm . . 11. ( ), , . G : GB600,N600,B600,T600,AAAA A600.T： (60020) nm A600.N： (60020) nm ( ) A600.B： (60020) nm ( ) (UT) UTB600,T600,B,420T,420AAAA (UN)
18、. G1 G12 ( 1 ) . IR IRB,420N,420B,420T,4201AAAAG A420.T： (42020) nm A420.N： (42020) nm ( ) A420.B： (42020) nm ( ) IR 1.5 D( ) ( D ). S9 . ( E ). I ISO 13829： 2006 8 12. F.1 F.2 . 13. 2 . G 0.5 . B (G, 112) 140 FNU 14. (： G ) , . a) b) pH c) ( , ) d) e) ： , A600 A420 , (A420/ A600) , f) (： , , ) (： )
19、 I ISO 13829： 2006 9 A() A.1 genome( ) A.2 . ： DNA , DNA A.3 DNA DNA , DNA , , . A.4 Genome ( , DNA) A.5 ( ) ( ) ( ) DNA I ISO 13829： 2006 10 B() TA1 535/pSK1002 German Collection for Microorganisms and Cell cultures(DSMZ), Mascheroder Weg 1b, D 38124 Braunschweig, Germany： Order No. 9274 . I ISO 13
20、829： 2006 11 C() C.1 . C.1 D (7.) L (5.) L 10TGA (5.2.5 9.4)L (9.2 9.4) L 1:1.5 1.5 180 0 20 70 1:3 3 90 90 20 70 1:6 6 45 135 20 70 1:12 12 22.5 157.5 20 70 / L L 10TGA L L 1TGA L(5.2.4) 0 180 20 0 70 0 180 20 70 0 / 27 153 20 70 0 I ISO 13829： 2006 12 D() 1.5 D DLI D(IR 1.5) . DLI (lowest ineffective dilution) I ISO 13829： 2006 13 E() ( , 2 ), pSK1002, (deep rough mutation) UVrB . DSMZ (fresh stock) . (pSK1002) ( ) . pSK1002(： TA1535) . (372) . TA1535 TA1535/pSK1002 . (crystal-violet sensitivity) 0.1 mL . ( 1 mg/mL) 10 L ( 9 mm) . (372) . . 14 mm . UV (UVrB)
