1、 KSKSKSKS KSKSKSK KSKSKS KSKSK KSKS KSK KS KS P 1011 2 KS P 1011:2008 2008 9 30 http:/www.kats.go.krKS P 1011:2008 : ( ) ( ) () ( ) : () ( ) () () () : (http:/www.standard.go.kr) ： ： 2008 9 30 2008-0632 ： ： ( 025097266) (http:/www.kats.go.kr). 10 5 , . KS P 1011:2008 i ii 1 1 2 1 3 .1 4 3 4.1 .3 4.2
2、 3 4.3 3 5 3 6 .3 6.1 3 6.2 4 6.3 4 6.4 5 6.5 .5 6.6 5 7 5 7.1 .6 7.2 .6 A( ) 2 7 A.1 .7 A.2 7 A.3 7 A.4 8 A.5 9 A.6 (IEF) 10 A.7 .11 A.8 (SDS-PAGE) .11 A.9 .12 A.10 .13 A.11 .14 A.12 .14 A.13 2 .16 23 KS P 1011:2008 ii . . , , . , , . KS P 1011:2008 2 Test method of the 2-D electrophoresis for reco
3、mbinant bacteria 1 2 (2-D gel electrophoresis) . 2 . . ( ) . KS M 0001, 3 . 3.1 (recombinant bacteria) (pool) . 3.2 2 (two-Dimensional gel Electrophoresis： 2-DE) 2 1 2 (SDS-PAGE) 2 , . 3.3 (internal standard) KS P 1011:2008 2 3.4 (method validation) 2 2-D . 3.5 (specificity) 3.6 (accuracy) 1 . 2 (%)
4、 . (%) ( / )100 3.7 (precision) 1 . 2 . , , . , , . 3 . n . (%) ( / )100(%) 3.8 (linearity) . 3.9 (range) , , 3.10 (robustness) , . KS P 1011:2008 3 4 , . 2 . ICH Q2A . 4.1 2 2 . 2-DE , , , , . . . 4.2 . a) . b) . c) 2 . d) , , , , , . e) . 4.3 . 5 2 , . 6 6.1 6.1.1 , , . KS P 1011:2008 4 . 6.1.2 .
5、2 . 6.2 6.2.1 80 %, 100 %, 120 % , 2 (normalization volume) . 6.2.2 , , 3 . 3 80 %, 100 %, 120 % 3 9 . 6.2.3 (%) . (%) ( / )100 6.3 6.3.1 80 %, 100 %, 120 % , 2 . 6.3.2 6.3.2.1 3 3 9 100 % 6 . 6.3.2.2 3 3 9 100 % 6 . KS P 1011:2008 5 6.3.3 . (%) ( / )100(%) 3 , t . 6.4 6.4.1 80 %, 90 %, 100 %, 110 %
6、, 120 % , 2 . 6.4.2 5 3 . 6.4.3 1 . , , . 6.5 6.5.1 , , , . 6.5.2 , , . 6.6 6.6.1 4 , 5 , 6 2 . 6.6.2 5 10 . 7 KS P 1011:2008 6 7.1 . 7.2 7.2.1 t . . 7.2.2 2 2 (ANOVA) . , P 0.05 . KS P 1011:2008 7 A ( ) 2 A.1 , . 2 . ICH Q2A . A.2 A.2.1 pH (IPGphor) A.2.2 (Immobiline DryStrip) A.2.3 A.2.4 A.2.5 A.2
7、.6 A.3 A.3.1 A.3.2 (Urea) NH2CONH2A.3.3 (Thiourea) CH4N2S A.3.4 (3-(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio-1-propanesulfonate： CHAPS) C32H58N2O7S A.3.5 (Dithiothreitol： DTT) HSCH2(CHOH)2CH2SH A.3.6 (Protease inhibitor cocktail： PIC) A.3.7 (Acrylamide) A.3.8 pH (IPG buffer) KS P 1011:2008 8 A.3.9 (Bromoph
8、enol blue： BPB) 3,3,5,5-Tetrabromophenolsulfone phthalein A.3.10 Tris(hydroxymethyl)-aminomethane： Tris A.3.11 (Sodium dodecylsulfate： SDS) A.3.12 (TEMED) N, N, N, N-Tetramethylethylenediamine A.3.13 (Glycerol) HOCH2CH(OH)CH2OH A.3.14 (Iodoacetmide： IAA) C2H4INO A.3.15 (Glycine) A.3.16 (Piperazine d
9、iacrylamide： PDA) 1, 4-Diacrolyl-piperazine A.3.17 (Ammonium bicarbonate： ABC) NH4HCO3A.3.18 (Ammonium persulfate： APS) (NH4)2S2O8A.4 A.4.1 1 mL 0.42 g, 0.153 g, CHAPS 0.04 g, DTT 0.01 g, PIC 0.04 mL 20 mM Tris-Cl(pH 8.0) 1 mL . A.4.2 1 mL 0.48 g, CHAPS 0.04 g, 0.002 g, pH 0.005 mL, 100 10 L 3 1 mL
10、. A.4.3 I 1 mL 0.36 g, 1.5 M Tris-Cl(pH 8.8) 33 L, 0.3 mL, 10 % SDS 0.2 mL, DTT 0.01 g 3 1 mL . A.4.4 II 1 mL 0.36 g, 1.5 M Tris-Cl(pH 8.8) 33 L, 0.3 mL, 10 % SDS 0.2 mL, IAA 0.015 g 3 1 mL . A.4.5 30 % 1 L 300 g, PDA 8 g 3 0.45 m . A.4.6 1.5 M Tris-Cl(pH 8.8) 1 L Tris 181.71 g 3 pH 8.8 . pH KS P 10
11、11:2008 9 3 1 L . A.4.7 10 1 L Tris 30.3 g, 144 g 3 1 L . A.4.8 SDS-PAGE 10 950 mL, 10 % SDS 95 mL 3 8.5 L . A.4.9 0.5 % 100 mL 0.5 g, 100 1 mL 3 100 mL . A.4.10 1 L 500 mL, 120 mL 3 1 L . A.4.11 1 L (Na2S2O3 5H2O) 0.2 g 3 1 L . A.4.12 1 L (AgNO3) 2 g 3 1 L . A.4.13 1 L (Na2CO3) 60 g, 30 % 540 L 3 1
12、 L . A.5 A.5.1 A.5.1.1 LB 37 , 240 rpm 600 nm 0.5 . A.5.1.2 1 mM IPTG 25 , 200 rpm 4 , (8 000 rpm, 15 ) . . A.5.1.3 KS P 1011:2008 10 10 , . A.5.1.4 , (13 000 rpm, 17 , 4 ) . 30 10 . A.5.1.5 DNase(1 mg/mL), RNase(1 mg/mL) 1/10 1/40 1 . A.5.1.6 3 000 , (3 500 rpm, 4 , 60 ) . A.5.1.7 (TCA) . A.5.1.8 ,
13、 60 . 10 mL 1 g, 1 mL, DTT 0.03 g 3 10 mL . . A.5.1.9 13 000 rpm, 15 , 4 , . A.5.1.10 , 13 000 rpm, 15 , 4 . 10 mL 1 mL, DTT 0.03 g 3 10 mL . . A.5.1.11 70 % 13 000 rpm, 15 , 4 , . A.5.1.12 . A.6 (IEF) A.6.1 , . A.6.2 pH (Immobiline Dry Strip) . A.6.3 . . pH (cm) ： 7, 11, 13, 18, 24 A.6.4 pH . KS P
14、1011:2008 11 . A.6.5 . A.6.6 pH A.6.6.1 pH 1 . A.6.6.2 . . pI (step and hold) (gradient) . A.6.6.3 . . A.6.6.4 70 . A.7 A.7.1 . A.7.2 A.7.2.1 Tris-Cl(pH 8.8) 5 . A.7.2.2 SDS , APS, TEMED . A.7.2.3 . A.7.2.4 4 . A.8 (SDS-PAGE) A.8.1 A.8.1.1 10 , SDS 15 . A.8.2 A.8.2.1 I, II , DTT IAA . KS P 1011:2008
15、 12 I, II 30 DTT IAA . A.8.2.2 70 10 mL I , 15 . A.8.2.3 I , II 10 mL 15 . A.8.2.4 , II . A.8.2.5 . A.8.2.6 3 , . A.8.2.7 0.5 % . a) (LMW/HMW-SDS protein marker) 3 576 L . b) 5 SDS 1： 4 . c) 10 , 2 L . A.8.3 A.8.3.1 . A.8.3.2 . . A.8.3.3 15 . A.9 A.9.1 A.9.1.1 2 1 L . 1 . . A.9.1.2 A.9.1.2.1 50 % .
16、KS P 1011:2008 13 1 20 2 . 2 . A.9.1.2.2 3 . 20 1 . A.9.1.3 . 1 . A.9.1.4 3 . 30 3 . A.9.1.5 . 20 1 . A.9.1.6 3 . 30 3 . A.9.1.7 . 8 . A.9.1.8 . 1 . A.10 A.10.1 A.10.1.1 OHP . KS P 1011:2008 14 OHP . A.10.1.2 . A.11 A.11.1 . A.11.1.1 . A.11.1.2 , . A.11.1.3 , (normalization) . A.11.1.4 . A.12 A.12.1 (hGH) (human Growth Hormone： hGH) , . 191 , 4 (helix bundle) .
