1、1考点 71 微生物的培养和应用 1培养基（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对 pH、氧气以及特殊营养物质的要求。（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。2无菌技术（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。（2）关键：防止外来杂菌的入侵。（3）不同对象的无菌操作方法(连线)3大肠杆菌的纯化培养（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基操作步骤倒平板的方法及注意事项a请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙乙甲丁。b甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c丁
2、中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。（2）纯化大肠杆菌的方法2纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。常用的微生物接种方法有两种a平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。b稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。系列稀释操作(如图所示)：涂布平板操作(如图所示)：（3）菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。4土壤中分
3、解尿素的细菌的分离与计数（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。（3）实验流程：土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察细菌的计数。5分解纤维素的微生物的分离（1）纤维素酶组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 C1酶、C X酶和葡萄糖苷酶。作用纤维素 C1 酶纤维二糖葡萄糖3（2）纤维素分解菌的筛选原理筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。实验流程考向一 培养基及其制备方法分析
4、1下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 蒸馏水含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mLA从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基B该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C该培养基缺少提供生长因子的物质D该培养基调节合适的 pH 后就可以接种使用【参考答案】B4解题必备1培养基的配制原则（1）目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。（3）pH 要适宜：细菌为 6.57.5，放线菌为 7.
5、58.5，真菌为 5.06.0，培养不同微生物所需 pH 不同。2微生物对主要营养物质的需求特点不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。（1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的 CO2，氮源可由含氮无机盐提供。（2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。2如下表所示为培养某种微生物的培养基的配方，请回答：成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO47H2O FeSO4 (CH2O) 琼脂 H2O含量 3 g 1.5 g 0.5 g 0.01 g 30 g
6、10 g1 000 mL（1）依物理性质，该培养基属于_培养基。（2）根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是_。（3）该培养基中的碳源是_。（4）不论何种培养基，在配好之后倒平板之前都要先进行的_；倒平板时，一般需冷却至_左右，并在_操作。（5）若用该培养基培养分解尿素的细菌，应除去物质_，并加入物质5_【答案】（1）固体（2）异养型（3）(CH 2O)（4）灭菌 50 酒精灯附近（5）NaNO 3 尿素考向二 无菌技术的操作3无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中正确的是A紫外线照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果B高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
7、C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D在微生物接种的实验中，用 95%酒精对实验者的双手和超净工作台进行消毒【参考答案】A【试题解析】用紫外线照射 30 min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果，A 正确；高压灭菌加热结束时，待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，B 错误；为了防止污染，接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落，C 错误；在微生物接种的实验中，一般用 75%酒精对实验者的双手进行消毒，用紫外线照射 30 min 对超净工作6台进行灭菌，D 错误。解题技巧消毒和灭菌的辨析项目 条
8、件 结果 常用方法 应用范围煮沸消毒法 日常用品巴氏消毒法 不耐高温的液体消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灼烧灭菌法 接种工具干热灭菌法 玻璃器皿、金属工具灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌4细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌A接种环、手、培养基B高压锅、手、接种环C培养基、手、接种环D接种环、手、高压锅【答案】C考向三 大肠杆菌的纯化方法及过程分析75下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，
9、乙是平板划线法的操作结果。下列叙述中错误的是A甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液B对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为 102，则所得的菌落不一定是由单一的细胞或孢子繁殖而成C乙培养皿中所得的菌落都符合要求D乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端【参考答案】C归纳整合两种纯化细菌方法的比较项目 优点 缺点 适用范围平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数 适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌86下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题。（1）图甲是利用_法进行微生物接种，
10、图乙是利用_法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是_和_；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。（2）接种操作为什么一定要在火焰附近进行？_。（3）接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？_。（4）如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填“图甲”或“图乙”)。【答案】（1）平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器 灼烧灭菌（2）火焰附近存在着无菌区域（3）避免培养过程产生的水分影响微生物的生长（4）图乙考向四 选择培养基成分及配制方法的分析97选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用
11、这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为A伊红美蓝培养基、含青霉素培养基B含青霉素培养基、含氨的无机培养基C含氨的无机培养基、含青霉素培养基D含青霉素培养基、伊红美蓝培养基【参考答案】B技法提炼选择培养基的制作方法（1）在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌
12、。（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的 CO2制造有机物生存。（3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。（4）通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。108杀虫脒，又名氯苯脒，是一
13、种有机氮农药，具有高效广谱杀虫杀螨的作用，但长期使用容易导致土壤污染，为探究能降解杀虫脒的细菌进行了以下实验。（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、_、水、无机盐四类，该实验所用的培养基只能以杀虫脒作为唯一氮源，其原因是_，从功能上讲，该培养基属于_培养基。（2）微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法在功能上的区别是_，此外，_也是测定微生物数量的常用方法。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和_。培养基一般不使用干热灭菌的原因
14、是_。【答案】（1）氮源 只有能利用杀虫脒的微生物才能正常生长和繁殖 选择（2）稀释涂布平板法可以用于统计样品中活菌数目 显微镜直接计数（3）强（4）高压蒸汽灭菌 湿度低会破坏培养基中的营养成分11考向五 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数9下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，不正确的是A用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂不变红B分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氨和二氧化碳C统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在 30300 的平板进行计数D将实验组和对照组平板倒置，3035 恒温培养 2448 小时【参考答案】A【试题解析】用尿素为唯一氮源、
15、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，尿素分解菌将尿素分解为易错警示稀释涂布平板法计数微生物的注意问题用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在 30300 的平板进行计数。解题时易出现以下误解：（1）只得到 1 个菌落数在 30300 的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。（2）得到 3 个或 3 个以上菌落数在 30300 的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：不同平板间差异较大，如得到 3 个平板，菌落数分别为 230、34、240，虽然菌落数均在“30300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。不
16、同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。12可见，并不是只要得到 3 个“菌落数在 30300 的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在 30300 的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。10下表是某同学列出的分离土壤中微生物培养基的配方，据此回答下列问题：培养基配方KH2PO4 1.4 gNa2HPO4 2.1 gMgSO47H2O 0.2 g葡萄糖 10.0 g尿素 1.0 g琼脂 15.0 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL（1）从作用上看，该培养基属于_培养基，提供氮源的物质是_，细菌能利用该氮源
17、是由于体内能合成_酶。（2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入_指示剂，若指示剂变_，说明有目的菌株存在。（3）为了测定微生物的数量，接种时应采用_法，某同学在 4 个培养基上分别接种稀释倍数为 106的土壤样液 0.1 mL，培养后菌落数分别为180、155、176、129 个，则每毫升原土壤样液中上述微生物的数量为_，测定的活菌数比实际活菌数_(填“低”“高”或“基本一致”)。【答案】（1）选择 尿素 脲(催化尿素分解的)（2）酚红 红（3）稀释涂布平板 1.610 9 低13考向六 分解纤维素的微生物的分离11分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是A经选择培养后即
18、可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少C经稀释培养后，用刚果红染色D此实验中需设置对照组【参考答案】A【试题解析】经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经富集培养得到了欲分离的微生物。解题技巧两种微生物筛选方法的比较项目 土壤中分解尿素的细菌的分离 分解纤维素的微生物的分离方法使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养利用富含纤维素的选择培养基进行培养原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用
19、因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖特有代表过程CO(NH2)2H 2OCO22NH 3纤维素纤维二糖葡萄糖1412植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列相关问题：（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3 种组分形成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_分解成_。（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)染料时，CR 可与纤维素形成_色复合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。（3）为从富含纤维素分解菌的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落并加以鉴定，某同学设计了甲、乙两种培养
20、基：酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR 溶液 水培养基甲 培养基乙 注：“”表示“有”，“”表示“无”。据表判断，培养基甲_(填“能”或“不能”)用于分离纤维素分解菌，原因是_；培养基乙_(填“能”或“不能”)用于鉴定纤维素分解菌，原因是_。【答案】（1）纤维二糖 葡萄糖（2）红 透明圈（3）不能 液体培养基不能分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素(不能形成CR纤维素红色复合物)【解析】（1）葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。（2）刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。（
21、3）纤维素分解菌分离和鉴别培养基属于固体培养基，而培养基甲中没有琼脂，是液体培养基，要分离和鉴别纤维素分解菌，需要以纤维素为唯一碳源的培养基，培养基乙没有纤维素，不能形成 CR纤维素红色复合物，无法鉴定纤维素分解菌。1下列有关微生物培养的叙述，错误的是A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B平板划线法和稀释涂布平板法都可对微生物进行计数C培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌15D倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落，造成污染2用平板划线法或稀涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点是A都可以用固体培养基或液体培养基B都需要使用接种环进行接种C接种时都需要在酒精灯的火焰旁进行D都可以用来统计样品中的活菌
22、数3在微生物培养的过程中，需要通过选择培养或鉴别培养的方法来筛选出目标菌种，下列与之相关的叙述中不正确的是A纤维素分解菌能够分解刚果红染料，从而使菌落周围出现透明圈B尿素分解菌能够将尿素分解为氨，从而使酚红指示剂变红C在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株D在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现“溶钙圈”4某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是A培养基分装到培养皿后进行高压蒸汽灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察三次菌落生长5幽门螺杆菌（能分解对热不稳定的尿素）是急慢性胃炎和消化道溃
23、疡的主要致病因素。为从带菌者胃粘膜样本中分离出该细菌，相关实验步骤和方法不合理的是A配制培养基并灭菌后，需要加入无菌尿素B应设置未接种的培养基，做为实验的对照C统计样本中活菌数量时，可用划线法接种D可利用酚红指示剂对培养的菌落进行鉴定6如图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程，其中 LB 培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是A需要对活性污泥作灭菌处理16B中 LB 培养基应以甲醛为唯一碳源C目的菌种异化作用类型为厌氧型D经处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养7如图所示，自来水经滤膜过滤后，转移到牛肉膏蛋白胨培养基上，适宜条件下培养 48 h，染色后统计变色菌落数目为 165 个
24、。下列说法正确的是A若培养基含伊红美蓝，大肠杆菌菌落呈蓝绿色B自来水中大肠杆菌浓度是 33 个L -1，比真实值偏大C为了提高准确度，需设重复实验，但不用空白对照D若培养基菌落数目大于 300，可适当减少自来水量8下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图，有关叙述错误的是A在配制步骤、的培养基时，应先调 pH 值后高压蒸汽灭菌B步骤采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素C步骤挑取中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力D步骤纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落9分离筛选降解纤维素能力强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题
25、具有重要意义。研究人员用化合物 A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请回答下列问题：（1）培养基中加入的化合物 A 是_。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养，目的是_。（2）为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入_溶液，等培养基上17长出菌落后，能产生纤维素酶的菌落周围会出现_。（3）为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用_进行接种。若用稀释涂布平板法进行接种，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是_。（4）用三种菌株对秸秆进行处理，并在第 5 天和第 10 天对秸秆和秸
26、秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定（结果如图）。据图分析可知，三种菌株对_的降解作用最强。与第 5 天结果相比，第 10 天秸秆各组分中_的降解率变化最大。10聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以 PET 为碳源和能量来源的细菌，该发现对 PET 类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：（1）实验小组欲从土壤中获取 PET 降解菌，需将土壤样品置于_为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是_。（2）该实验小组选取 PET 浓度为 800 mgL-1的富集液进行系列稀释，分别取 10-3、10 -4和 10-5倍数的稀释液
27、0.1 mL 涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为（286、298、297)，(35、32、31)，(36、7、2)，不适合用于计数的为_倍数的稀释液，用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是_。（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是_。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是_。用平板划线法纯化 PET 降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原因是_。（4）在保藏 PET 降解菌菌种时，可采取_的方法进行长期保存。1811（2018全国卷）将马铃薯
28、去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到 M 培养基。回答下列问题：（1）M 培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。（2）M 培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_ （答出两点即可）。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_（答出两点即可）。（3）若在 M 培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。（4）甲、乙
29、两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了 3 个平板，统计的偏落数分别是 110、140 和 149，取平均值 133；乙同学涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别是 27、169 和 176，取平均值 124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。12（2018全国卷）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两
30、种方法的优点是_。（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_，在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。（4）水厂供应的自来水通常是经过_（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。19（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。13（2018江苏卷）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将
31、其溶解、定容后，调节培养基的，及时对培养基进行分装，并进行灭菌。（2）取步骤中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤中将温度约（在 25 、50 或 80 中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤所示进行划线。下列叙述合理的有。a为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落c挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株（4）步骤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀
32、释 1 000 倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用 2516 型血细胞计数板计数 5 个中格中的细胞数，理论上色细胞的个数应不少于，才能达到每毫升 3109个活细胞的预期密度。1【答案】B20【解析】微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A 正确；利用稀释涂布平板法接种微生物可以形成单菌落，常用来进行微生物的计数，但利用平板划线法接种微生物不易分离出单菌落，不能对微生物进行计数，常用来筛选分离微生物，B 错误；常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，C 正确；倒平板后，需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而造成污染，D 正确。2【答案】C【解析】平板划线法和稀释涂布平板
33、法都是在固体培养基上进行的，A 错误；平板划线法接种用接种针，稀释涂布平板法接种要用涂布器，B 错误；不论是平板划线法还是稀释涂布平板法，都需要进行无菌操作，在酒精灯火焰旁进行，C 正确；平板划线法不能用于计数活菌，只能用于分离菌种，稀释涂布平板法可以用来计数活菌，D 错误。3【答案】A4【答案】B【解析】在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A 错误；灼烧接种环可以防止残留菌种对实验的干扰，因此转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B 正确；接种后放置在恒温培养箱中进行培养，C 错误；微生物的繁殖速度快，培养过程中一般要隔天观察一次，D 错误。5【答案】C【解析】幽门螺杆菌能分解尿
34、素，因此在分离培养基中加入尿素作为唯一氮源，将幽门螺杆菌跟其他微生物分离，由于尿素对热不稳定，需对培养基灭菌后再加入无菌尿素，A 正确；依据实验的对照原则，应设置未接种的培养基，做为实验的对照，B 正确；划线法不能用于统计活菌的数目，C 错误；幽门螺杆菌菌落将尿素分解为氨，使培养基显碱性，可利用酚红指示剂进行鉴定，D 正确。6【答案】D21【解析】该实验是从活性污泥中分离和纯化分解甲醛细菌，则活性污泥不能灭菌，A 错误；LB 培养基使菌种成倍扩增，应用完全培养基培养，B 错误；图示分解甲醛细菌是在培养皿中进行的，属于需氧型细菌，C 错误；经处理后，瓶中甲醛浓度降低，甲醛浓度最低的一组中分解甲醛
35、细菌纯度最高，可进一步纯化培养，D 正确。7【答案】D【解析】若培养基含伊红美蓝，大肠杆菌菌落呈黑色或紫黑色，有金属光泽，A 错误；自来水中大肠杆菌浓度是 1655=33 个/L，由于两个或多个大肠杆菌可能长成一个菌落，因此比真实值偏小，B 错误；为了提高准确度，需设重复实验，同时需要设置空白对照，C 错误；若培养基菌落数目大于 300，说明细菌数目较多，可适当减少自来水量，D 正确。8【答案】B9【答案】（1）纤维素 增加纤维素分解菌的浓度（2）刚果红 透明圈（3）平板划线法 培养基表面的菌液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果（4）半纤维素 纤维素【解析】（1）为筛选能够降解纤维素的微生
36、物，培养中应添加以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，因此培养基中加入的化合物 A 是纤维素，选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度。（2）纤维素分解菌的鉴定需用刚果红，等培养基上长出菌落后，能产生纤维素酶的菌落周围会出现透明圈。（3）平板划线法以接种环为接种工具，用接种环取菌后需要在平板上划线进行接种。稀释涂布平板法接种前需将待分离的菌液进行稀释，涂布时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多，防止培养基表面的菌液出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。（4）据图可知，三种菌株对半纤维素的降解率最高，与第 5 天结果相比，第 10 天秸秆各组分中半纤维素和木质素降解率变化不大，纤维素22的降解率变化较
37、大。10【答案】（1）PET 增加 PET 降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌 （2）10 -5 稀释倍数为 10-3时，更多的菌落连在一起，最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为 10-4组的结果 （3）灭菌，防止微生物污染 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落 （4）甘油管藏【解析】（1）欲从土壤中获取 PET 降解菌，需将土壤样品置于以 PET 为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是增加 PET 降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌。（2）为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30300 的平板进行
38、计数，据此结合题意可知：不适合用于计数的为 10-5倍数的稀释液。用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数，得到的细菌数不一致的原因可能是稀释倍数为 10-3时，更多的菌落连在一起，最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为 10-4组的结果。（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，其目的是灭菌，防止微生物污染。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此这个平板不能用来培养大肠杆菌。用平板划线法纯化 PET 降解菌的过程中，为使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划
39、线的末端开始划线。（4）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。11【答案】（1）细菌 选择 （2）碳源、无机盐 蛋白质、核酸 （3）碘液 淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈（4）乙同学的结果中，1 个平板的计数结果与另 2 个相差悬殊，结果的重复性差2312【答案】（1）可以 （2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少 （3）破坏 DNA 结构 消毒液（4）氯气 （5）未将锅内冷空气排尽【解析】（1）能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。 （2）煮沸消毒法即在 100时煮沸56min 可以杀死
40、微生物细胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在 7075时煮 30min 或在 80时煮 15min，可以杀死微生物，并且保证营养物质不被破坏。因此，与煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高温瞬时消毒法的优点是达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。（3）因紫外线能破坏 DNA 结构，所以密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒。在照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。（4）通常乙醇消毒是 75%的酒精，有气味，影响水质，不适宜消毒自来水；高锰酸钾本身有颜色，消毒后溶液呈紫红色，无法使用；因此水厂供应的自来水通常是经过氯气消毒的。（5）采用高压蒸汽灭菌时，锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后才能将锅密闭。如果未将锅内冷空气排尽，则会出现压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度的现象。13【答案】（1）pH 高压蒸汽（湿热）（2）50 （3）a、b、d（4）氧气 无 3024
