1、1第 14讲 生物技术在食品加工中的应用及植物组织培养考试要求 1.果酒及果醋的制作。2.泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定。3.植物的组织培养。1.(2017浙江 11月考节选)回答与酿酒和制醋有关的问题：(1)为了获得优良的酿酒红曲霉菌株，将原菌株的孢子诱变处理后制成较稀浓度的单孢子悬液，这样做的目的是在培养时有利于获得_。(2)大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后，用某酿酒酵母进行酒精发酵，发酵完毕后得到新鲜红曲酒，酒中乙醇浓度不超过 15%。其主要原因是当发酵液中的乙醇浓度接近 15%时，_(A.乙醇氧化逐渐增强直至平衡 B.葡萄糖分解逐渐增强直至平衡 C.乙醇氧化逐渐减弱直至停止 D.葡萄糖分解逐渐减
2、弱直至停止)。(3)已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色。采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄糖含量的步骤如下：第一步，标准曲线的制作。用蒸馏水配制_，与蒽酮试剂反应后，用比色计测定，并制作_的标准曲线。第二步，样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是_。第三步，样品测定与计算。(4)影响红曲酒风味的主要因素，除了温度、pH、氧气等环境因素外，还有_(答出 2点即可)。(5)在红曲醋生产工艺中，将适量的红曲酒、水和醋化醋杆菌等混合。再添加一定量谷壳糠等制成松散的发酵料，其主要目的是_，以利于醋酸发酵。解析 (1)在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的菌落，即单菌落。(2)乙醇浓度接近 15%时
3、，抑制了酵母菌的存活，可推知葡萄糖的分解会逐渐减弱直至停止。2(3)标准曲线的制作：用蒸馏水配置不同浓度葡萄糖标准溶液，与蒽酮试剂反应后，用比色计测定，并制作以葡萄糖浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标的标准曲线。样品处理：因为要用比色杯测光密度值，所以将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是防止酒样的颜色影响比色。(4)酿酒过程中，除了温度、pH、氧气等环境因素外，还有酿酒原料、菌种活性、糖含量、杂菌污染、次级代谢产物等都会影响酒的风味。(5)酿酒过程中，添加一定量谷壳糠等制成松散的发酵料，可在发酵过程中为醋酸发酵积存氧气，松散有利于空气流通。答案 (1)单菌落 (2)D(3)一系列浓度的葡萄糖标准
4、溶液 葡萄糖浓度与光密度值关系 排除酒原有颜色的干扰 (4)不同的菌株、不同的原料 (5)增加通气性2.(2017浙江 4月选考节选)回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：(1)制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用_蘸取少量的稀释液，在 MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。(2)泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取亚硝酸盐，与_发生重氮化反应，再与 N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光程为1 cm 的_，在 550
5、nm 光波下测定光密度值，与由一定浓度梯度亚硝酸钠制作的_比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。(3)已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐。在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和_环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解。解析 (1)平板上划线的工具为接种环。(2)泡菜腌制过程中醇类是由假丝酵母进行厌氧呼吸产生。测定泡菜中亚硝酸盐含量时，要从泡菜中提取亚硝酸盐，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与 N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，然后用光程为 1 cm 的比色杯，在 550 nm 光波下测定光密度值，与由一定浓度梯度亚硝酸钠制作的标准曲线比对，从而计算样品中
6、亚硝酸盐的含量。(3)随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和酸性环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解。3答案 (1)接种环 (2)假丝酵母 对氨基苯磺酸 比色杯 标准曲线 (3)酸性3.(2015浙江 10月选考)科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：(1)为了获得大量的目的基因，将其与含有抗生素抗性基因的质粒 DNA形成重组 DNA，再与经_(A.氯化钙 B.氯化钠 C.蔗糖 D.葡萄糖)处理的大肠杆菌液混合，使重组DNA进入大肠杆菌。用_的玻璃刮刀将稀释后的大肠杆菌液_接种到含有抗生素的固体培养基上，经培养形成 _，再
7、进行鉴定和扩大培养。(2)从扩大培养的大肠杆菌中提取含有目的基因的 DNA，用 _分别切割含目的基因的 DNA和农杆菌的 Ti质粒，然后用 DNA连接酶连接，形成重组 DNA并导入农杆菌。(3)取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用 70% _浸泡，再用 5%次氯酸钠浸泡，最后用_清洗，作为转基因的受体材料。(4)将消毒后的矮牵牛叶片剪成小片，在含有目的基因的农杆菌溶液中浸泡后，取出并转移至加有适当配比生长调节剂的 MS培养基(含蔗糖、琼脂和抗生素，下同)上，使小叶先脱分化形成_。再将其转移至另一培养基诱导形成芽，芽切割后转移至_(A.LB培养基 B.MS 培养基适宜浓度 NAA C.MS
8、 培养基适宜浓度 BA D.NAA/BA 小于 1的 MS培养基)上生根，形成完整植株。(5)取出试管苗，在适宜的光照、温度和 80%以上的_等条件下进行炼苗。提取叶片组织的 DNA，采用 PCR技术_目的基因，鉴定目的基因是否成功导入。(6)为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转基因植株的_性状。解析 (1)将目的基因导入微生物细胞需要利用钙离子处理使受体细胞变成感受态细胞。用灭菌的玻璃刮刀将稀释后的大肠杆菌液涂布接种到含有抗生素的固体培养基上，经培养形成菌落。(2)基因工程的工具酶包括限制性核酸内切酶和 DNA连接酶。(3)外植体需依次经自来水冲洗、70%酒精浸泡、5%次氯酸
9、钠浸泡、无菌水清洗，才能够作为转基因的受体材料。(4)外植体先在 MS培养基上脱分化形成愈伤组织，然后转移至发芽培养基诱导形成芽，芽切割后转移至生根培养基(MS 培养基适宜浓度 NAA)上生根，形成完整植株。(5)炼苗需要在 80%以上湿度下进行。PCR 技术可以扩增目的基因。(6)为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转基因植株的花色性状。答案 (1)A 灭菌 涂布 菌落 (2)限制性核酸内切酶 (3)酒精 无菌水 (4)愈伤组织 B (5)湿度 扩增 (6)花色41.正误判断(1)酒精发酵的反应式为 C6H12O62CO 22C 2H5OH，果酒的整个制作过程需严格控制无氧环境
10、。()(2)醋化醋杆菌是好氧菌，醋酸发酵过程中需向发酵瓶中缓缓通入无菌空气，直至发酵液pH不再减少。()(3)醋杆菌在缺乏糖源时，有氧条件下可将乙醇氧化为醋酸，所以果酒搁置时间过久，会产生酸味。()(4)腌制泡菜的盐水要煮沸冷却后使用，以有效杀灭水中的微生物及除去水中氧气，利于乳酸发酵。()(5)亚硝酸盐可与 N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。()(6)发芽培养基和生根培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压。()(7)培养一株完整的试管苗，必须先进行生根培养，然后进行生芽培养。()(8) 植物组织培养得到的试管苗，必须通过移栽炼苗后方可转移至土中培养。()2.读图析
11、图以下图 1、图 2为酒精发酵、醋酸发酵装置简图。(1)图 1为_发酵装置简图。图中在弯曲玻璃管中装水的作用有_；发酵瓶中要留约 1/3的空间，目的是_；5将发酵瓶放在_ 条件下，当_，表示发酵完成。(2)图 2为_发酵装置简图。发酵瓶中装锯末的目的类似于_技术，将适量的醋化醋杆菌培养物加在酒水混合物中，混匀，并调 pH至 _ 后，倒入图 2的_瓶；管内塞有的棉花常用_，用以_；当流入丙瓶的流出液_，表示发酵完成。提示 (1)酒精 防止氧气进入和空气中杂菌污染、逸出发酵过程产生的 CO2以减少瓶内压力 给酵母菌提供氧气以使其快速繁殖、防止瓶中发酵液溢出 2530 发酵瓶中停止出现气泡 (2)醋
12、酸 酶的固定化 7.0 乙 脱脂棉 过滤空气 pH 不再减少考点 1 果酒及果醋的制作1.(2018浙江“超级全能生”联考)蓝莓富含花青素等营养成分，具有保护视力、软化血管、增强人体免疫力等功能。如图为蓝莓果酒生产工艺流程简图，据图回答下列问题。选料冲洗粉碎灭菌？发酵？果酒(1)流程中“？”处的内容分别为_、_。(2)制作果酒时，温度应该控制在_ ；若温度过高，将影响酒的_；若发酵瓶的密封性不好，可能会在_(A.酵母菌厌氧呼吸 B.乳酸菌 C.醋化醋杆菌 D.霉菌)的作用下导致果酒变酸。(3)蓝莓果酒的制作过程中，接种完成后要先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，其目的是_。当发酵罐中_，表示果
13、酒发酵完毕。答案 (1)接种 过滤 (2)2530 风味 C (3)在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，增加数量 停止出现气泡2.(2018嘉兴一中期末)葡萄是常见水果，可以用来榨果汁、制果酒和果醋，下图是制作果酒果醋的简易装置。请回答：(1)用该装置进行葡萄酒酿制过程中，开关 1和 2的开闭情况为_。6(2)研究发现很多因素会影响葡萄酒的品质，为提高葡萄酒的澄清度，可以添加_处理葡萄汁。一般情况下可给葡萄汁添加_以提高酒精度。(3)在葡萄酒发酵过程中，不同品种的酵母菌发酵产生的葡萄酒酒精度不同，若要从野生酵母中筛选出酒精转化率高、对酒精耐受能力强的酿酒酵母，可用_。(4)用葡萄酒制作果醋过程中将
14、醋化醋杆菌与酒水混合物混匀，并_后加入发酵瓶中，发酵过程中要不断从开关 1通入_，在这个过程中也可以用_替代醋化醋杆菌。解析 酵母菌进行厌氧呼吸生成酒精和 CO2，葡萄酒酿制过程中应始终关闭开关 1，以保证厌氧环境；同时定时打开开关 2，以释放 CO2。醋化醋杆菌进行需氧呼吸生成醋酸，发酵过程中要不断从开关 1通入无菌空气，以保证有氧环境。答案 (1)始终关闭开关 1，定时打开开关 2 (2)果胶酶 蔗糖 (3)含高浓度酒精的培养基进行筛选 (4)调节 pH 无菌空气 醋曲(1)酵母菌是兼性厌氧型生物，在制作果酒的发酵初期，酵母菌利用发酵瓶内留存的氧气进行需氧呼吸以实现快速繁殖；瓶内氧气耗尽后
15、，酵母菌进行厌氧呼吸产生酒精。整个发酵过程，酵母菌始终产生 CO2，因此需要不断释放 CO2。(2)醋化醋杆菌是需氧菌，只进行需氧呼吸，即使短时间缺氧也会导致其死亡，所以整个发酵过程需要不断通入无菌空气。(3)发酵菌种、发酵原材料、发酵条件(温度、pH、氧气、杂菌等)均会影响发酵产品的产量和质量。考点 2 围绕泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定考查社会责任3.(2018杭州质检)不同浓度还原型谷胱甘肽(GSH)处理对甘蓝泡菜中硝酸还原酶(NR)活性和亚硝酸盐含量的影响如图所示。7请回答：(1)甘蓝泡菜的腌制和样品处理：腌制甘蓝泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是_。甘蓝样品处理过程中，加硫酸锌产生沉淀后，
16、水浴加热的目的是_。然后冷却至室温，用滤纸过滤，用水淋洗 23 次，将_在容量瓶中定容。(2)测定亚硝酸盐含量：取 10 mL样品溶液，进行显色处理。用光程为 1 cm的_在550nm处测定光密度值。(3)甘蓝泡菜发酵过程中 NR活性和亚硝酸盐含量均呈_的趋势。添加不同浓度的GSH处理均可_NR 活性和亚硝酸盐含量的峰值。当添加 GSH的质量分数较低时，NR活性和亚硝酸盐含量随着 GSH浓度的增大而_。答案 (1)杀灭杂菌并去除氧气 进一步让蛋白质沉淀 滤液和洗涤液 (2)比色杯 (3)先上升后下降 抑制 降低(1)泡菜腌制过程中起作用的主要是假丝酵母和乳酸菌，二者均是厌氧菌，所以泡菜腌制过程
17、中要严格控制无氧环境。如盐水煮沸、坛口水封等。(2)泡菜腌制过程亚硝酸盐含量的变化及原因腌制初期，乳酸菌含量很少，坛内有氧环境有利于一些杂菌如硝酸盐还原菌的繁殖，这些细菌可以促进硝酸盐还原为亚硝酸盐。但随着腌制时间的增加，氧气消耗，发酵液酸性增强，乳酸菌大量繁殖，亚硝酸盐被乳酸菌中的亚硝酸还原酶降解，含量又有所下降。8考点 3 植物的组织培养4.某同学欲用组织培养方法快速繁殖百合，其流程如下：请回答下列问题：(1)配好的培养基需经_灭菌后才能使用。用_对自然生长的百合鳞茎进行消毒，然后在超净台中用_冲洗，切段后进行接种。(2)诱导丛状苗时，培养基中应添加的植物激素及配比是_(A.生长素用量高于
18、细胞分裂素用量 B.生长素用量低于细胞分裂素用量 C.生长素用量低于赤霉素用量 D.生长素用量高于赤霉素用量)。(3)将生根后的百合直接定植于土壤中，死亡率很高。改进的措施是将其移至蛭石中，用塑料布罩 23 天后，逐步加大塑料布开口，使其生长环境中的_逐步降低，这一过程即为图中的_。解析 (1)培养基需要通过高压蒸汽灭菌法灭菌。自然生长的外植体须在 70%乙醇中浸泡 10 min，再在 5%次氯酸钠溶液中浸泡 5 min，再用另一 5%次氯酸钠溶液浸泡 5 min，最后用无菌水清洗再接种。(2)诱导丛状苗应选用发芽培养基，细胞分裂素的用量要高于生长素的用量。(3)组织培养得到的试管苗需要经过锻
19、炼来适应外界湿度的变化。待生根后，将苗移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持 80%以上的湿度，23 天后逐渐降低湿度进行锻炼，直到处于自然湿度下为止。答案 (1)高压蒸汽 70%乙醇和 5%次氯酸钠溶液 无菌水 (2)B (3)湿度 锻炼影响植物组织培养的因素(1)培养材料：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。同一种植物材料的年龄、保存时间的长短等对培养也有影响，幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。(2)无菌条件：培养基上有细菌等微生物存在时，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞中毒，因此在培养过程中要求进行
20、一系列的消毒、灭9菌，要求无菌操作。(3)生长素和细胞分裂素的浓度和配比：生根培养基中含生长素，利于生根；发芽培养基中含生长素和细胞分裂素，但细胞分裂素较生长素多，利于发芽。1.(2018嘉兴 3月选考测试)桑葚是一种很好的食用水果，也常用来制成果汁或酿成果酒。大致流程如下：(1)在制作果汁时，为了增加出汁率和澄清度(用果汁透光率表示)，常加入果胶酶。加酶后的某研究结果如下。表：果胶酶剂量与果汁中果胶含量、透光率的关系酶剂量/ (mLL1 )0.07 0.09 0.11 0.13 0.15 0.17 0.19 0.21 0.23 0.25果胶含量程度 透光率/% 80 84 88 92 95
21、95 95 95 92 87注：果胶含量程度“”表示果胶阳性反应 “”表示果胶阴性反应果汁中果胶的含量可用加入酒精的方法进行检测，其原理是_，表中果胶阳性反应的现象是_。在生产应用中，考虑到生产成本因素，建议果胶酶的使用剂量为_ mL/L。当果胶酶剂量超过 0.21 mL/L时，透光率反而下降，这时使果汁变浑浊的物质是_。(2)酿酒时可用如图发酵瓶进行，原料装瓶后加入适量的蔗糖并接种，然后在适宜条件下进行发酵。当发酵瓶中_，即表示发酵完毕。请在下列坐标中，画出瓶内发酵过程中菌种数量的变化曲线。10(3)下列关于果酒发酵瓶及发酵过程的叙述中，正确的是_。A.处应该有水，有利于隔绝内外气体的出入B
22、.处应该伸入发酵瓶液面以下，有利于形成缺氧条件C.处果汁装瓶容量不超过 2/3，以免发酵过程中液体溢出D.不同温度下完成发酵的时间不同，而最终果酒的风味相同答案 (1)果胶不溶于酒精 出现絮状物 0.15 果胶酶(2)停止出现气泡(如图)(3)C2.你对泡萝卜、酸黄瓜和酸豆角一定不陌生吧？一碟酸甜香脆的泡菜，能令人胃口大开。请根据所学知识回答下列问题。(1)泡菜在发酵过程中，起作用的微生物主要是_和乳酸菌，其发酵产物中含有有机酸和_等。(2)腌制的食物中往往含有少量的亚硝酸盐，对亚硝酸盐的定量测定可以用_法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与_偶联成_色化合物。在实验过程中，测定的是_值
23、，以反映溶液中亚硝酸盐的含量。解析 (1)泡菜制作过程中，起作用的微生物主要是假丝酵母和乳酸菌，在无氧条件下它们可以将菜中的糖和其他营养物质发酵为有机酸和醇类物质等。(2)亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与 N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，然后用光电比色法定量测定。答案 (1)假丝酵母 醇类物质 (2)光电比色 N1萘基乙二胺 紫红 OD(光密度)113.请回答黄花蒿植物组织培养的有关问题：(1)黄花蒿的植物组织培养研究在我国已有数年历史。选取黄花蒿的茎段后，通常用体积分数为 70%的酒精等药品对茎段进行_，然后再放入_溶液中浸泡，最后用无菌水冲洗。若外植体不慎被细菌感染
24、，采用划线分离法纯化细菌，在 4个区域内划线需要将接种环灼烧灭菌_次。(2)植物组织培养的培养基可采用_灭菌。形成愈伤组织的过程中，除需无菌、营养和激素外，_等外界条件也很重要。(3)23 周后将生长健壮的丛状苗在_(A.LB 培养基适宜浓度 BA B.LB 培养基适宜浓度 NAA C.MS 培养基适宜浓度 BA D.MS 培养基适宜浓度 NAA)上继续生根，形成完整植株。定植前，还需逐渐_进行炼苗。解析 外植体需先用 70%酒精消毒，然后再放入 5%次氯酸钠溶液中浸泡，最后用无菌水冲洗。每次划线之前需灼烧灭菌，最后一次划线后亦需灼烧灭菌，故在 4个区域内划线需要将接种环灼烧灭菌 5次。(2)
25、培养基采用高压蒸汽灭菌法灭菌。愈伤组织的产生需要一定的温度和光照条件。(3)生长素利于生根，生根培养基需要在 MS培养基中添加适量生长素。炼苗过程需在 80%以上湿度的基础上逐渐降低湿度，最终达到自然湿度，以逐渐适应自然环境。答案 (1)消毒 5%次氯酸钠 5 (2)高压蒸汽灭菌法 光照、温度 (3)D 降低湿度(时间：30 分钟)一、选择题1.严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，直接关系到是否能得到质量高，产量多的理想产物，通常所指的发酵条件不包括 ( )A.温度控制 B.溶氧控制C.pH控制 D.酶的控制解析 通常所指的发酵条件包括温度、pH、溶氧、通气与转速等。酶是自身调节物质，不
26、属于发酵条件。答案 D2.下列关于果酒制作过程的叙述，正确的是( )A.应先去除葡萄的枝梗，再进行冲洗，这样洗得彻底12B.使发酵装置的温度维持在 2530 时较好C.在发酵过程中，需从充气口不断通入空气D.由于酵母菌的繁殖能力很强，所以不需要对所用装置进行消毒处理解析 在洗葡萄时应先冲洗 12 次，再去除枝梗，以防葡萄破损被杂菌污染；酵母菌的繁殖能力虽然很强，但仍要对所用装置进行消毒处理，因为其内含有对葡萄酒发酵有害的微生物，影响酒的品质；酵母菌只有在无氧条件下才能进行酒精发酵。答案 B3.将四份等量(100 mL)接种有乳酸菌的牛奶分别装入四个容量不同的锥形瓶制作酸奶，甲锥形瓶容量为 50
27、0 mL，乙锥形瓶容量为 250 mL，丙锥形瓶容量为150 mL，丁锥形瓶容量为 100 mL。密封保存，发酵又快又好的是( )A.甲瓶 B.乙瓶 C.丙瓶 D.丁瓶解析 乳酸菌只能进行厌氧呼吸，等量的牛奶装入锥形瓶中，锥形瓶越小，锥形瓶中的氧气越少，发酵进行得越好。因此丁瓶发酵又快又好。答案 D4.下列关于测定亚硝酸盐含量原理的叙述，错误的是( )A.亚硝酸盐经显色反应后呈紫红色B.样品液显色后，通过与已知浓度的标准液比色，可大致估算出样品液中亚硝酸盐的含量C.不同浓度的亚硝酸盐显色深浅不同D.显色反应后亚硝酸盐的理化性质没有发生改变解析 测定亚硝酸盐含量的原理是：在盐酸酸化条件下，亚硝酸
28、盐先与对氨基苯磺酸发生反应，然后与 N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。在此过程中，亚硝酸盐的理化性质发生了很大变化。答案 D5.植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是 ( )A.接种环和镊子B.三角瓶和广口瓶C.发芽培养基和生根培养基D.用于培养的幼茎和幼芽解析 适宜用高压蒸汽灭菌的是培养基和培养器具。培养的幼茎和幼芽应用 70%的酒精和 5%的13次氯酸钠进行消毒。答案 D二、非选择题6.回答与生产苹果醋工艺流程有关的问题： 苹 果 苹 果 汁 苹 果 酒 苹 果 醋(1)新鲜苹果在压榨之前用_浸泡消毒，并冲洗。(2)为了提高苹果的出汁率并使果汁变得澄清，制取
29、时常加入果胶酶，为证明其效果，可分别取等量浑浊的苹果汁和澄清的苹果汁，各加入等量的_，预计后者出现的沉淀物较少。要扩大培养生产果胶酶的微生物，适宜的培养基是_(A.MS 培养基；B.添加蔗糖的豆芽汁；C.蛋白胨和酵母提取物及氯化钠)。(3)果酒发酵完毕，静置沉淀后，可用_法将上清液取出。若果酒中乙醇的浓度超过_%时，酵母菌就会死亡。(4)苹果醋是最受欢迎的饮料之一，果醋生产过程利用了微生物的发酵作用。将苹果酒流经发酵瓶制成苹果醋，则发酵瓶中 CO2 的产生量是_(A.与发酵瓶体积相当；B.约为发酵瓶体积的一半；C.几乎为零)。答案 (1)高锰酸钾溶液 (2)95%乙醇 B (3)虹吸 16 (
30、4)(醋化)醋杆菌 C7.温州雁荡山的铁皮石斛是一味名贵的中草药。请回答关于铁皮石斛组织培养的有关问题：(1)生长调节剂母液的配制：将适量的 NAA和 BA分别溶解于 0.1 mol/L的氢氧化钠和_溶液中，配制生长调节剂母液，并置于冰箱中保存。(2)培养基的配制和灭菌：取适量的 BA溶液、NAA 溶液、蔗糖、琼脂和_，加热至琼脂融化后，通过_分装至三角瓶中，加上封口膜后在_压力的灭菌锅中灭菌 20 min。(3)外植体消毒与接种：取野生铁皮石斛茎切段，在 70%乙醇中浸泡 10 min，再放入_溶液中浸泡 5 min，重复一次，最后在超净台中用_清洗，将茎切段培养在生芽培养基中，待形成_后转
31、入生根培养基中继续培养。答案 (1)0.1 mol/L 的盐酸 (2)MS 培养基 三角漏斗 1 kg(3)5%次氯酸钠 无菌水 丛状苗8.微生物有多种用途，比如用于制作泡菜、酿酒、制醋等。(1)其中消耗氧气的阶段有_。14目的菌株筛选后应该利用_培养基进行扩大培养，制作泡菜时，往往将蔬菜在开水中浸泡 1分钟后入坛，其目的是_。(2)实验操作时，往往要考虑其他微生物的影响，而_是消除污染杂菌的通用方法。此外还要考虑进行无菌操作，下列关于相关操作正确的是( )A.在配制培养基时需要在酒精灯火焰旁操作B.玻璃刮刀的灭菌方式往往采用灼烧灭菌法C.制作棉塞的棉花往往选择使用的是脱脂棉D.G6玻璃砂漏斗
32、用后需用 1 mol/L的 HCl浸泡 (3)醋的制作中发酵瓶中装锯末的目的类似于_技术，将适量的醋化醋杆菌培养物加在酒水混合物中，混匀，并调 pH至_后，倒入发酵瓶。答案 (1)酿酒的前阶段和制醋的全过程 液体 改变细胞膜的通透性，加快发酵进程 (2)单菌落的分离 D (3)酶的固定化 7.09.请回答与“泡菜的腌制”实验有关的问题：(1)腌制泡菜的基本过程是：将蔬菜、盐水、糖、白酒等放入洗净的菜坛，混合均匀。坛口加盖后用_封好。如果希望发酵快些，可将蔬菜在_中浸泡 1分钟。加入的白酒，既可作为调味剂增加醇香感，还具有_的作用。(2)腌制泡菜过程中起作用的微生物主要是乳酸菌和_。为了分离某种
33、美味泡菜汁中的乳酸菌作为菌种，可将稀释后的泡菜汁用_法快速接种到平面培养基上，立即将培养皿_(A.正放于无氧培养箱 B.正放于有氧培养箱 C.倒置于无氧培养箱 D.倒置于有氧培养箱)中培养。解析 (1)菜坛坛口用水密封可以保证坛内的无氧环境。蔬菜在开水中浸泡 1 min，可加快发酵进程。白酒不但可以调味，还可以使蛋白质变性，抑制细菌滋生。(2)泡菜制作过程中起作用的主要是假丝酵母和乳酸菌。稀释后的泡菜汁涂布接种在平面培养基上，倒置于无氧培养箱中培养，可得到一个个单菌落，从而分离出乳酸菌种。答案 (1)水 开水 抑制杂菌生长 (2)假丝酵母 涂布 C10.在农村，泡菜的制作方法是：先对新鲜的蔬菜
34、进行整理、清洁，然后放入彻底清洗并用白酒擦过的泡菜坛中，再向坛中加入盐水、香辛料及一些“陈泡菜水” 。密封后置于阴凉处，适宜环境温度为 2830 。请回答：(1)用白酒擦拭泡菜坛的目的是_。(2)此过程中起主要作用的微生物是_(A.乳酸菌假丝酵母 B.乳酸菌醋化醋杆15菌 C.酵母菌霉菌 D.酵母菌醋化醋杆菌)，这些微生物利用蔬菜中的糖类和其他物质进行发酵，产物有_等，其中也包括亚硝酸。(3)某同学想测定制作的泡菜中亚硝酸盐的含量，需要先用亚硝酸钠标准溶液绘制_，再通过测定泡菜匀浆的_进行计算。(4)若要获得优良乳酸菌菌种，纯化菌种时，更易分离得到单菌落的接种方法是_，培养时还需提供_条件。解
35、析 (1)白酒可以使蛋白质变性，抑制杂菌生长而达到消毒目的。(2)泡菜制作过程中起主要作用的是乳酸菌和假丝酵母，这些微生物利用蔬菜中的糖类和其他物质进行发酵，产物有有机酸和醇类物质等，其中也包括亚硝酸。(3)测定泡菜中亚硝酸盐的含量，需要先用亚硝酸钠标准溶液绘制标准曲线，再通过测定泡菜匀浆的光密度值(OD 值)进行计算。(4)纯化菌种时，更易分离得到单菌落的接种方法是涂布分离法；由于乳酸菌是厌氧菌，因此培养时还需提供无氧条件。答案 (1)消毒 (2)A 有机酸和醇类物质 (3)标准曲线 光密度值(OD 值) (4)涂布分离法 无氧11.某研究小组为了生产梨酿制醋酸，具体流程如图所示，请回答：梨
36、 甲 浑 浊 的 梨 汁 乙 澄 清 的 梨 汁 丙 酒 精 发 酵 丁 醋 酸 发 酵(1)图中乙过程可加入_酶，为证明该酶的效果，可分别取等量浑浊的梨汁和澄清的梨汁，各加入等量的_，预计后者出现的沉淀物比较少。(2)适宜条件下进行酒精发酵，发酵完毕的标志是_，待沉淀后，可用_(方法)将上清液(即果酒)取出。若培养液酒精浓度超过_时，酵母菌会死亡。(3)若用于醋酸发酵的醋杆菌被杂菌污染，欲消除污染的杂菌，常用方法是_。(4)用适宜方法获得优质醋杆菌的菌种，若要扩大培养，适宜的培养基是_。A.MS培养基B.添加蔗糖的豆芽汁C.含蛋白胨、酵母提取物、NaCl 及其他适宜添加物的培养液D.尿素、葡
37、萄糖、K 2HPO4、NaCl、酚红、琼脂糖配制的培养基解析 (1)果胶酶可催化果汁中果胶分解，使果汁澄清。果胶不溶于乙醇，澄清的梨汁含有16的果胶少，加入 95%乙醇后出现的沉淀物少。(2)酒精发酵产生 CO2气体，所以发酵完毕的标志是停止产生气泡。(3)消除污染的杂菌，常用方法是单菌落的分离/划线分离法/涂布分离法。(4)醋杆菌喜荤，且在液体培养基中利于物质交换，所以醋杆菌扩大培养的适宜培养基是含蛋白胨、酵母提取物、NaCl 及其他适宜添加物的培养液。答案 (1)果胶 95%乙醇 (2)停止产生气泡 虹吸法 16% (3)单菌落的分离/划线分离法/涂布分离法 (4)C12.以野生菊花为材料
38、进行的组织培养步骤如下图所示：Error! 愈伤组织 生芽 生根 Y A B 定植(1)按照野生菊花的需求量，MS 培养基由大量元素、微量元素和_组成。MS 培养基含有十几种化合物，配制不方便也难以称量准确，可将培养基中的各种成分扩大 510 倍分别称量，配成_，用时稀释。(2)步骤 X中的野生菊花一般选择( )A.开过花的老枝B.未开花植株的茎上部新萌生的侧枝C.正在开花的枝条D.任何枝条均可(3)过程 A在无菌的条件下把消毒后的野生菊花外植体接种在三角瓶的琼脂培养基上，给予一定的温度和_，使之产生愈伤组织。过程 B要在_的培养基上进行培养，使之长出较多的丛状苗。植物组织培养使用人工合成的植物生长调节剂，而不是植物中存在的天然激素的原因是_。(4)步骤 Y表示_，再移植到土中培养(定植)，即可长成植株并开花。解析 以野生菊花为材料进行的组织培养，应选取较为幼嫩的组织，先用发芽培养基，再用生根培养基。将苗先移至草炭土或蛭石中进行锻炼后再移植到土壤中培养(定植)。答案 (1)有机成分 母液 (2)B (3)养料、激素 发芽(或细胞分裂素多于生长素) 人工合成的植物生长调节剂在植物中没有相应分解的酶，作用时间长，作用效果明显(意思合理即可) (4)移栽锻炼
