1、- 1 -辽宁省实验中学东戴河分校 2018-2019 学年高二生物下学期第四次周测试题一选择题（每小题只有一个选项符合题意，每题 4 分共 60 分）1下列有关基因工程基本工具的叙述，错误的是（ ）ADNA 连接酶与限制酶作用的化学键相同B限制酶可以对烟草花叶病毒的核酸进行切割C运载体质粒的复制和表达也遵循中心法则D E.coliDNA 连接酶来自大肠杆菌，只能连接黏性末端2下列有关限制酶知识的叙述，错误的是( )A产生于细胞内，同时可以在细胞外起作用B一种限制酶可以识别多种特定的核苷酸序列C限制酶作用于两个核苷酸之间的磷酸二酯键D微生物中的限制酶对自身 DNA 无损害作用3下列关于基因工程
2、操作程序的叙述，正确的是A将目的基因导入受体细胞是基因工程的核心步骤B检测目的基因是否翻译的原理是 DNA 分子杂交技术C从 cDNA 文库中获取的 DNA 来源于 mRNA 的反转录DPCR 技术建立在对扩增的目的基因序列完全巳知的基础上4下列获取目的基因的方法中需要模板链的是( )从基因文库中获取目的基因 利用 PCR 技术扩增目的基因 反转录法 通过 DNA 合成仪利用化学方法人工合成A B C D5PCR 技术中，如何设计引物( )APCR 引物要根据需要扩增的目标 DNA 的碱基序列来设计BPCR 引物要根据已知的 DNA 序列对应的 RNA 序列来设计CPCR 引物要根据已知的 D
3、NA 序列对应的 tRNA 的序列来设计D以上都不是正确方法6如图甲、乙中的箭头表示三种限制酶的酶切位点，ampR 表示氨苄青霉素抗性基因，neoR表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是- 2 -A图甲中的质粒用 BamH切割后，含有 4 个游离的磷酸基团B在构建重组质粒时，可用 Pst和 BamH切割质粒和外源 DNAC同时用 Pst和 Hind酶切，加入 DNA 连接酶后可得到两种重组质粒D导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长7如图是利用基因工程技术生产可食用疫苗的部分过程，其中Pst、 Sma、 EcoR、 Apa为四种限制性核酸内切酶。下列有关说法正确的是（ ）A一种限制
4、性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B表达载体构建时需要用到 Sma、 Pst限制性核酸内切酶C抗卡那霉素基因的主要作用是促进抗原基因在受体细胞中表达D除图示标注的结构外表达载体中还应有起始密码子和终止密码子等8科学家运用基因工程技术，将人血清白蛋白基因导入山羊的受精卵中，培育出羊乳腺生物反应器，使羊乳汁中含有血清白蛋白。以下相关叙述错误的是（ ）A该转基因羊中的血清白蛋白基因只存在于乳腺细胞中B可用显微注射技术将含有目的基因的表达载体导入羊的受精卵中C血清白蛋白基因需要与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件进行重组D羊细胞中能合成人的血清白蛋白利用了遗传密码在不同物种的通用性9下列关于基因
5、工程应用的叙述，正确的是（ ）A基因治疗就是把缺陷基因诱变为正常基因B原核生物的基因不能用于真核生物的遗传改良- 3 -C利用 DNA 探针可以检测饮用水中是否含有某种病毒D利用基因工程生产乙肝疫苗的目的基因来自肝脏细胞10下列关于蛋白质工程应用的叙述正确的是（ ）A基因工程和蛋白质工程产生的变异都是可遗传的B蛋白质工程和基因工程的目的是获得人类需要的蛋白质，所以二者没有区别C只有利用蛋白质工程才可以在大肠杆菌细胞中得到人的胰岛素D当得到可以在70条件下保存半年的干扰素后，在相关酶、氨基酸和适宜的温度、pH条件下，干扰素可以大量自我合成11下列关于蛋白质工程的叙述，错误的是（ ）A蛋白质工程的
6、实质是通过改造基因来改造蛋白质B蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子C蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的D蛋白质工程遵循的原理包括中心法则12下列关于蛋白质工程的叙述，错误的是（ ）A通过蛋白质工程可以改变蛋白质的活性B蛋白质工程可以改造酶的结构从而提高酶的热稳定性C利用蛋白质工程可以在大肠杆菌细胞中得到人的胰岛素D蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程13基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点是GGATCC，限制酶的识别序列和切点是GATC。根据下图示判断下列操作正确的是( )A目的基因和质粒均用
7、限制酶切割 B质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割C目的基因和质粒均用限制酶切割 D质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割14下图是利用基因工程技术生产某药物蛋白的部分过程，其中- 4 -Pst、Sma、EcoR、Apa为四 种限制性核酸内切酶。下列叙述不正确的是（ ）A构建基因表达载体需要用到 EcoR、Pst两种限制酶B若用图中四种限制酶同时切割质粒，可以产生四个 DNA 片段C表达载体中除图示标注的结构外还应有启动子和终止子等调控因子D筛选含重组质粒的受体细胞时应在培养基中加入卡那霉素抗性基因15下列关于蛋白质工程及其应用的说法，正确的是（ ）A蛋白质工程能定向改造蛋白质分子结构，使之
8、更加符合人类需要B蛋白质工程的实质是通过改变氨基酸的结构改变蛋白质的功能C当前限制蛋白质工程发展的关键因素是基因工程技术还不成熟D蛋白质工程技术中的操作对象是蛋白质或控制蛋白质合成的基因二非选择题（40 分）16青蒿素是最有效的抗疟疾药物，但野生黄花蒿青蒿素产量低，为缓解青蒿素供应不足的状况，科学家将 tms 基因和 tmr 基因导入黄花蒿的愈伤组织从而获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程用到的部分结构如图。- 5 -（1）科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞的常用方法是_ _。（2）图中结构 P、T 是基因成功转录的保证，其中结构 P 的作用是_。为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目
9、的基因的细胞筛选出来，图中还缺少的结构是_。 （3）在获得转基因的冠瘿组织过程中，_是核心步骤，在具体操作中常常使用两种能产生不同黏性末端的限制酶对目的基因和运载体的两端分别进行切割，这样做的好处是_。 （4）T-DNA 的作用是可以使_，并插入到植物细胞中染色体的 DNA上，要检测目的基因是否插入到冠瘿组织细胞的染色体 DNA 上，可采用_技术。（5）与愈伤组织相比，冠瘿组织的生长速度更快，原因可能是_ 。17植物甲含有 A 基因，其编码的蛋白质中富含赖氨酸。科学家通过基因工程培育出的转基因玉米也能合成甲的富含赖氨酸的蛋白质，使玉米中赖氨酸的含量比原来提高 30%。请回答：（1）在获取目的基
10、因时，常从甲的细胞中提取富含赖氨酸的蛋白质的 mRNA，并利用 mRNA 人工合成 cDNA。上述人工合成 cDNA 的过程称作_；与甲细胞中的 A 基因相比，cDNA 中不具有调控基因表达的_ 等组件。（2）将携带了目的基因的农杆菌和玉米薄壁组织细胞共培养时，需用酚类化合物对玉米细胞进行处理，这种处理的作用是_。- 6 -（3）在获得转基因玉米后，可采用核酸分子杂交技术对玉米细胞中是否存在 A 基因的转录产物进行检测，检测时需用_制作基因探针。（4）实验发现，某携带了 A 基因的玉米植株（乙）自交，其子代中富含赖氨酸的个体占15/16，而用乙的体细胞离体培养所产生的植株 100%富含赖氨酸。
11、若乙中的 A 基因都能表达，且不考虑突变和染色体交叉互换，乙自交子代富含赖氨酸的个体占 15/16，原因是 。18.下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中 Ap 为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ 为蓝色显色基因，EcoR （0.7Kb）、Pvu（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000 个碱基对长度。请据图回答：（1）质粒 A、C 不能作为目的基因运载体的理由分别是 、 。（2）将图中的目的基因与质粒 B 进行重组，需要用到 酶。（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用 酶切质粒，完全酶切后进行电泳观
12、察，若出现长度为 1.1kb 和 kb，或者 kb 和kb 的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与 EcoR的识别位点之间的碱基对忽略不计）。(第 19 题，实验班必做，平行班可以不做。)19甲型流感病毒为 RNA 病毒，易引起流感大规模流行。我国科学家在 2017 年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法，主要环节如下。（1）改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒 RNA 为模板，逆转录成对应 DNA 后，利用_技术扩增，并将其中某些基因（不包括表面抗原基- 7 -因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列。与改造前的基因相
13、比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的_，因此不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒，并保存。（2）构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊 tRNA 的基因，其产物的反密码子能与（1）中的_配对结合，并可携带一个非天然氨基酸（Uaa） ，以便合成完整多肽。将该基因与载体连接后导入宿主细胞。提取宿主细胞的_进行分子杂交鉴定，筛选获得成功表达上述_的转基因宿主细胞。（3）利用转基因宿主细胞制备疫苗。将（1）中的重组质粒导入（2）中的转基因宿主细胞，并在补加_的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特殊 tRNA，翻译出改造病毒基因的完整蛋白，产生大量
14、子代病毒，用于制备疫苗。- 8 -参考答案1B【解析】【分析】基因工程的基本操作工具有限制酶、DNA 连接酶和基因的载体三种，限制酶具有特异性，识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点进行切割，限制酶切割得到的有黏性末端或平末端。【详解】DNA 连接酶与限制酶都作用在磷酸二酯键上，A 正确。烟草花叶病毒的核酸是 RNA，限制酶切割的是 DNA，B 错误。质粒是一种小型环状 DNA 分子，其复制和表达的过程也遵循中心法则，C 正确。E. coliDNA 连接酶是从大肠杆菌中分离获得的，它只能连接黏性末端，D 正确。【点睛】DNA 连接酶根据酶的来源不同，可分为 EcoliDNA 连接酶（来自于大肠杆
15、菌）和 T4DNA 连接酶（来自于 T4噬菌体,属于病毒）两类。前者只能连接黏性末端，后者既能连接黏性末端，也能连接平末端。2B【解析】【分析】限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，具有特异性，即能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。【详解】A. 限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，可以用于体外基因工程中对目的基因的切割，故其产生于细胞内，同时可以在细胞外起作用，A 正确；B. 限制酶可以识别特定特定的核苷酸序列，并在特定的位点进行切割，B 错误；C. 限制酶作用于每一条链中特定部位，使得两个核苷酸之间的磷
16、酸二酯键断裂，C 正确；D. 微生物中的限制酶对自身 DNA 无损害作用，主要用于切割外源 DNA，D 正确。3C【解析】【分析】基因工程四个步骤：- 9 -1、目的基因的获取。2、基因表达载体的构建。3、将目的基因导入受体细胞。4、目的基因的检测与表达。【详解】基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，A 错误。检测目的基因是否翻译应用的是抗原-抗体杂交的方法，B 错误。cDNA 文库建立的过程是指某生物某一发育时期所转录的 mRNA 全部经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接后储存在受体菌群中，C 正确。利用 PCR 技术扩增的目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，D 错
17、误。4D【解析】【分析】获取目的基因的方法主要有两种：（1）从供体细胞的 DNA 中直接分离基因，最常用的方法是“鸟枪法”又叫“散弹射击法“；（2）人工合成基因，这种方法有两条途径，一是以目的基因转录的信使 RNA 为模板，反转录成互补的单链 DNA，再在酶的作用下合成双链 DNA，即目的基因；另一条途径是蛋白质的氨基酸序列，推测出信使 RNA 序列，再推测出结构基因的核苷酸序列，然后用化学的方法以单核苷酸为原料合成。【详解】从基因文库中获取目的基因不需要模板链，错误；利用 PCR 技术扩增目的基因需要模板链，正确；反转录法合成目的基因需要以模板链，正确；通过 DNA 合成仪利用化学方法人工合
18、成目的基因不需要模板链，错误；故选 D。【点睛】本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，掌握获取目的基因的几种方法，能根据题干要求准确判断各选项，属于考纲识记层次的考查。5A【解析】【分析】利用 PCR 技术扩增目的基因的前提，是要有“一段已知目的基因核苷酸序列” ，以便根据这一序列合成引物，在引物作用下，DNA 聚合酶从引物 3端开始延伸 DNA 链。【详解】- 10 -设计引物就是直接根据基因序列来设计，即根据需要扩增的目标 DNA 的碱基序列来设计，A正确。6C【解析】【分析】分析题图：质粒和外源 DNA 分子都含有三种限制酶切点，即限制酶 BamH、Ps
19、t和 Hind III，其中 BamH切割位点在目的基因上，所以不能用该酶切割外源 DNA 了。用 Pst和Hind III 酶切质粒切成两个片段，用 Pst和 Hind III 酶能将外源 DNA 切成三段，只有含目的基因的片段通过 DNA 连接酶与质粒连接形成的重组质粒符合要求，而另一个重组质粒无目的基因，不符合要求，导入目的基因的大肠杆菌，其重组质粒是用 Pst和 Hind III 酶切割的，其中的 Ampr（氨苄青霉素抗性基因）已被破坏，不能抗氨苄青霉素。【详解】质粒用 BamH切割后将产生一个切口，打开了 2 个磷酸二酯键，产生 2 个游离的磷酸基团，故 A 错误；由于目的基因中含有
20、一个 BamH的识别位点，若用 BamH切割将破坏目的基因的结构，故 B 错误；目的基因两侧分别有 Pst和 Hind的识别位点，且质粒也含有二者的识别位点，同时用这两种酶切割时，目的基因与质粒之间有一种符合要求的连接方式和一种不符合要求的连接方式，故 C 正确； Pst的识别位点位于氨苄青霉素抗性基因中，用 Pst切割后，导致该抗性基因被破坏，从而造成导入目的基因的大肠杆菌不具有抗氨苄青霉素的特性，故 D 错误，故选 C。【点睛】考查结合题图，考查基因工程的相关知识，意在考查考生分析题图提取有效信息的能力；能理解所学知识要点，霸把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，解决
21、问题的能力。7A【解析】【分析】据图分析可知，切割目的基因和质粒的限制酶应该为 Pst、 EcoR，不能用 Sma，因为Sma会破坏质粒和目的基因。抗卡拉霉素基因属于标记基因，标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。【详解】- 11 -一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，A 正确；表达载体构建时不能用 Sma，因为 Sma会破坏目的基因，B 错误；抗卡那霉素基因的主要作用是供重组 DNA 的鉴定和选择，C 错误；除图示标注的结构外表达载体中还应有启动子和终止子等，D 错误；因此，本题答案选 A。【点睛】解答本题的关键是：明确启动子
22、和起始密码子的区别，启动子位于 DNA 中，而起始密码子位于 mRNA 中，再根据题意作答。8A【解析】【分析】乳腺生物反应器：将药物蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，导入哺乳动物的受精卵中，最终培育的转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁生产所需要的药物。【详解】本过程是把人血清白蛋白基因导入山羊的受精卵中，因此在山羊的各个细胞中都含有血清白蛋白基因，A 错误。当把目的基因导入动物受精卵时，应用显微注射法，B 正确。若想血清白蛋白基因在乳腺中表达，则应将血清白蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件进行重组，C 正确。不同的物种共用一套密码子，羊细胞中能合成人的血清白蛋
23、白利用了遗传密码在不同物种的通用性，D 正确。【点睛】1.动物细胞作为受体细胞只能用受精卵。2. 人的血清白蛋白基因存在于山羊的各个体细胞中，但只在乳腺细胞中表达，是基因选择性表达的结果。9C【解析】【分析】基因工程在实际应用领域应用广泛，通过基因工程可以得到抗虫、抗逆、抗病等植物，可以转基因动物生产药物、转基因动物做器官移植的供体，可以生产基因工程药物和进行基因治疗。【详解】- 12 -基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥作用，从而达到治疗疾病的目的，不是把缺陷基因诱变为正常基因，A 错误。原核生物和真核生物的 DNA 都是规则的双螺旋结构，都以脱氧核苷酸为基本单位，原核
24、生物的基因可以用于真核生物的遗传改良，如抗虫棉用的是苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，B 错误。利用 DNA 探针根据 DNA 分子杂交的原理可以检测饮用水中是否含有某种病毒，C 正确。利用基因工程生产乙肝疫苗的目的基因来自乙肝病毒的核酸，D 错误。10A【解析】【分析】蛋白质工程的基本途径是从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因） 。【详解】基因工程和蛋白质工程产生的变异都是可遗传的，A 正确；蛋白质工程和基因工程的目的均是获得人类需要的蛋白质，但基因工程只能生产自然界中已存在的蛋白质，而蛋白质工程可对现有蛋白质进行改造，从而制造一种新的蛋白质
25、，B 错误； 通常利用基因工程在大肠杆菌细胞中得到人的胰岛素，C 错误；干扰素的化学本质是蛋白质，蛋白质不具有自我合成的能力，D 错误。故选 A。【点睛】了解蛋白质工程和基因工程的异同点是解答本题的关键。11C【解析】蛋白质工程是通过改造控制现有蛋白质的基因来改造蛋白质，A 正确；由于改造基因，则蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子，B 正确；蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程相反，C 错误；蛋白质工程过程中由蛋白质到基因、再由基因控制合成相应的蛋白质，均遵循中心法则，D 正确。12C【解析】【分析】据题文和选项的描述可知：该题考查学生对蛋白质工程等相关知识的识记和理解能力
26、。【详解】- 13 -通过蛋白质工程可以改变蛋白质的结构，进而改变蛋白质的活性，A 正确；绝大多数酶是蛋白质，蛋白质工程可以改造化学本质为蛋白质的酶的结构，从而提高酶的热稳定性，B 正确；利用基因工程可以在真菌细胞中得到人的胰岛素，C 错误；蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程，D 正确。13D【解析】限制酶的识别序列和切点是-G GATCC-，限制酶 II 的识别序列和切点是- GATC-，可知限制酶能够识别和切割限制酶切割后的黏性末端。据题图可知，目的基因两端分别是限制酶的识别序列和切点（是-G GATCC-）和限制酶的识别序列和切点（是- GATC-） ，只有用限制酶才能
27、同时将目的基因切割下来；质粒有 Gene和 Gene表示两种标记基因，分别有限制酶的识别序列和限制酶的识别序列，如果用限制酶切割，则 Gene 和 Gene都被破坏，造成重组质粒无标记基因；用限制酶切割，则破坏 Gene，保留Gene，其黏性末端和切割目的基因所在 DNA 的黏性末端相同，可以连接形成重组 DNA，故选 D。14ABC【解析】【分析】题图是基因表达载体构建的过程，是基因工程的核心步骤，基因表达载体中含有目的基因、标记基因、启动子、终止子和复制原点等五部分结构。【详解】根据图示，获得该目的基因需要 EcoR、Pst两种限制酶切割，质粒也需要与之对应的限制酶切割，A 正确。图中质粒
28、上有四种限制酶切点，若用图中四种限制酶同时切割质粒，从图中可以看出可以产生四个 DNA 片段，B 正确。图示的基因表达载体标注了目的基因和标记基因，除此外还应有启动子和终止子等调控因子，C 正确。筛选含重组质粒的受体细胞时应在培养基中加入与标记基因对应的抗生素，即卡那霉素，而不是加入标记基因，D 错误。【点睛】目的基因和质粒用同种限制酶切割的目的是为了获得相同的黏性末端，便于连接。获取目的基因时，限制酶不能破坏目的基因。15BCD【解析】【分析】- 14 -1、蛋白质工程是指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，
29、以满足人类的生产和生活的需要。 2、目前，蛋白质工程成功的例子不多，因为蛋白质的功能必须依赖于正确的高级结构，而科学家对大多数蛋白质的高级结构的了解还很不够，要设计出更加符合人们需要的蛋白质还需要艰辛的探索。【详解】蛋白质工程能通过基因修饰或基因合成，定向对现有蛋白质分子的结构进行改造，使之更加符合人类需要，A 正确；蛋白质工程的实质是通过改变基因的结构达到改变蛋白质功能的目的，B 错误；当前限制蛋白质工程发展的关键因素是对蛋白质的高级结构了解不够，C 错误；蛋白质工程技术中的操作对象是控制蛋白质合成的基因，D 错误。故选 BCD。【点睛】本题考查蛋白质工程，要求考生识记蛋白质工程的概念，明确
30、蛋白质工程是通过改造基因来实现对蛋白质的定向改造，再结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查。16农杆菌转化法 RNA 聚合酶识别和结合的部位 标记基因 基因表达载体的构建（或：构建基因表达载体） 可以避免目的基因和运载体的自身连接成环和反向连接 目的基因进入植物细胞 DNA 分子杂交 tms 和 tmr 基因编码产物控制合成了生长素和细胞分裂素，促进了冠瘿组织的生长 【解析】【分析】本题中涉及 DNA 重组技术，其基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心，其目的是
31、使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。一个基因表达的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因，本题中由图可以 T 为终止子，则可推断 P 为启动子，启动子是 RNA 聚合酶识别并结合的位点，有了它才能驱动基因转录出 mRNA，最终获得所需的蛋白质。标记基因则是为了鉴别受体细胞是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。目的基因导入植物细胞常采用农杆菌转化法，主要是依赖农杆菌中的 T-RNA，它是一种可转- 15 -移的 DNA，可转移至受体细胞中，并且整合到受体细胞染色体的 DNA 上。【详解】（1）目的基因导入受体细
32、胞的方法有：农杆菌转化法、基因枪法、花粉通道法、显微注射技术、Ca 2+处理法，而导入植物细胞最常用农杆菌转化法，因此，科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞的常用方法是农杆菌转化法。（2）图中结构 P、T 是基因成功转录的保证，其中结构 P 为启动子，它的作用是 RNA 聚合酶识别和结合的部位。为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来，图中还缺少的结构是标记基因。 （3）在获得转基因的冠瘿组织过程中，基因表达载体的构建是核心步骤，在具体操作中常常使用两种能产生不同黏性末端的限制酶对目的基因和运载体的两端分别进行切割，这样做的好处是可以避免目的基因和运载体的自身连接成
33、环和反向连接。 （4）T-DNA 的作用是可以使目的基因进入植物细胞，并插入到植物细胞中染色体的 DNA 上，要检测目的基因是否插入到冠瘿组织细胞的染色体 DNA 上，可采用 DNA 分子杂交技术。（5）与愈伤组织相比，冠瘿组织的生长速度更快，原因可能是 tms 和 tmr 基因编码产物控制合成了生长素和细胞分裂素，促进了冠瘿组织的生。.【点睛】本题解答的前提是对基因工程的基本操作步骤和相关技术、方法要非常熟悉，并能分析和回答相关问题。17逆转录 启动子、终止子、内含子 T-DNA 能进入并整合到玉米染色体 DNA 上 吸引农杆菌对玉米细胞进行侵染 含 A 基因的 DNA 片段（或 A 基因）
34、 组织培养 乙的体细胞中有 2 条非同源染色体上含有 A 基因，所产生的配子中只有 3/4 的配子含 A 基因 【解析】【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：目的基因的获取； 基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。【详解】（1）根据题意分析，上述人工合成 cDNA 的过程是以 RNA 为模板合成 DNA 的过程，为逆转录过程；与 A 基因相比，人工合成的 cDNA 中不含启动子、终止子和内含子。（2）农杆菌细胞中的 Ti 质粒上的 T-DNA（可转移 DNA）能进入玉米细胞并整合到玉米染色- 16 -体 DNA 上，因此在利用农杆菌转化法转基因时，需将目的基因
35、插入到质粒的 T-DNA 中。将携带了目的基因的农杆菌和玉米薄壁组织细胞共培养时，需用酚类化合物对玉米细胞进行处理，以吸引农杆菌对玉米细胞进行侵染。（4）将玉米体细胞离体的培养成完整植株的过程为植物组织培养，利用了植物细胞的全能性；根据题意分析，将某携带了 A 基因的玉米植株（乙）自交，其子代中富含赖氨酸的个体占 15/16，即只有 1/16（1/41/4）的个体不富含赖氨酸，相当于两对杂合子的自交实验，说明乙的体细胞中有 2 条非同源染色体上含有 A 基因，所产生的配子中只有 3/4 的配子含 A基因。（3）检测 A 基因（目的基因）可以用 DNA 分子杂交法，该过程需要用含 A 基因的 D
36、NA 片段（或 A 基因）制作基因探针。【点睛】解答本题的关键是识记基因工程的四个基本步骤，掌握基因表达载体的基本组成成分，并能够准确分析利用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的实验原理。18 PCR 多肽（或蛋白质） 载体 总 RNA 非天然氨基酸（Uaa） D 细胞【解析】 【分析】本题以甲型流感病毒为素材，考查了基因工程、基因的表达、免疫调节的相关知识，意在考查学生的理解能力，综合运用所学知识解决问题的能力。可以改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力，此过程中需要用到 PCR 技术，然后通过基因工程构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。最后利用转基因宿主细胞制备疫苗，以预
37、防该病毒再次侵染。【详解】 （1）PCR 技术是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等反应组成一个周期，循环进行，使目的 DNA 得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。因此以病毒 RNA 为模板，逆转录成对应 DNA 后，利用 PCR 技术扩增，由于将其中某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列，因此肽链合成提前终止，这样与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的多肽（或蛋白质） ，因此不能产生子代病毒。（2）基因工程的核心步骤为基因表达载体的构建，将该基因与载体连接后才能导入
38、宿主细胞，检测目的基因是否成功表达上述 tRNA 时，利用核酸分子杂交技术，即用相应的 DNA 探针与宿主细胞的总 RNA 分子进行杂交鉴定，进而筛选获得成功表达上述 tRNA 的转基因宿主细胞。（3）因为设计的宿主细胞具有能合成一种特殊 tRNA 的基因，其产物的反密码子能与（1）- 17 -中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸（Uaa） ，因此可在补加非天然氨基酸（Uaa）的培养基中进行培养，筛选出宿主细胞。进而利用该宿主细胞，翻译出改造病毒基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，用于制备疫苗。因为转录在宿主细胞内进行，且启动子是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，因此需要使用宿主细胞的 RNA 聚合酶。故选：D。（4）不具侵染性的流感病毒灭活疫苗，不能侵入细胞内部，只能引起体液免疫，产生相应的抗体与记忆细胞，而该疫苗能够侵入细胞，引起的免疫属于细胞免疫。 【点睛】解答本题需要考生掌握基因工程的原理、操作步骤及其一些细节问题，同时还要熟练掌握有关基因的表达及免疫调节方面的问题。
