1、 Numros de rfrence ISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) ISO et FIL 2005NORME INTERNATIONALE ISO 11866-1 FIL 170-1 Deuxime dition 2005-12-01 Lait et produits laitiers Dnombrement dEscherichia coli prsums Partie 1: Technique du nombre le plus probable avec utilisation de 4-mthylumbellifryl- -D-glucur
2、onide (MUG) Milk and milk products Enumeration of presumptive Escherichia coli Part 1: Most probable number technique using 4-methylumbelliferyl- -D-glucuronide (MUG) ISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres in
3、tgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les
4、parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO et la FIL dclinent toute responsabilit en la matire. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss po
5、ur la cration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimiss pour limpression. Toutes les mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO et les comits nationaux de la FIL. Dan
6、s le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central de lISO ladresse donne ci-dessous. ISO et FIL 2005 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque fo
7、rme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit soit de lISO soit de la FIL ladresse respective ci-aprs. ISO copyright office Fdration Internationale de Laiterie Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Diamant Building Boulevard Aug
8、uste Reyers 80 B-1030 Bruxelles Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88 Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13 E-mail copyrightiso.org E-mail infofil-idf.org Web www.iso.org Web www.fil-idf.org Publi en Suisse ii ISO et FIL 2005 Tous droits rservsISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) ISO et
9、 FIL 2005 Tous droits rservs iii Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre i
10、ntress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce
11、qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits tech
12、niques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou d
13、e droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 11866-1FIL 170-1 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fdration internat
14、ionale de laiterie (FIL). Elle est publie conjointement par lISO et la FIL. Cette dition de lISO 11866-1FIL 170-1 annule et remplace lISO 11866-2:1997, dont elle constitue une rvision mineure. LISO 11866-1:1997 a t annule et remplace par lISO 7251:2005, Microbiologie des aliments Mthode horizontale
15、pour la recherche et le dnombrement dEscherichia coli prsums Technique du nombre le plus probable. LISO 11866FIL 170 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Lait et produits laitiers Dnombrement dEscherichia coli prsums: Partie 1: Technique du nombre le plus probable avec utilis
16、ation de 4-mthylumbellifryl- -D-glucuronide (MUG) Partie 2: Technique par comptage des colonies obtenues sur membranes 44 C ISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) iv ISO et FIL 2005 Tous droits rservsAvant-propos La FIL (Fdration internationale de laiterie) est une fdration mondiale du secteur laitie
17、r avec un Comit National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comit National a le droit de faire partie des Comits permanents de la FIL auxquels sont confis les travaux techniques. La FIL collabore avec lISO pour llaboration de mthodes normalises danalyse et dchantillonnage pour le lait et les pr
18、oduits laitiers. Les projets de Normes internationales adopts par les quipes dAction et les Comits permanents sont soumis aux Comits Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 50 % au moins des Comits Nationaux votants de la FIL. Lattention est appele
19、 sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 11866-1FIL 170-1 a t labore par l
20、e comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fdration internationale de laiterie (FIL). Elle est publie conjointement par lISO et la FIL. Lensemble des travaux a t confi au groupe dexperts mixte ISO/FIL/AOAC charg des Contaminants pathognes (E
21、102), sous la conduite de sa prsidente, Mme R. Lodi (IT). Cette dition de lISO 11866-1 FIL 170-1 annule et remplace lancienne partie 2 de la FIL 170A:1999, dont lancienne partie 1 a t remplace par lISO 7251:2005. NORME INTERNATIONALE ISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) ISO et FIL 2005 Tous droits
22、rservs 1 Lait et produits laitiers Dnombrement dEscherichia coli prsums Partie 1: Technique du nombre le plus probable avec utilisation de 4-mthylumbellifryl- -D-glucuronide (MUG) 1 Domaine dapplication La prsente partie de lISO 11866 FIL 170 spcifie une mthode pour le dnombrement dEscherichia coli
23、prsums et des coliformes prsums, au moyen de la technique de culture en milieu liquide contenant du MUG et calcul du nombre dEscherichia coli prsums et/ou des coliformes par gramme ou par millilitre, par la technique du nombre le plus probable (NPP) aprs incubation 30 C. Cette mthode est plus rapide
24、 que celle dcrite dans lISO 7251 tant donn que le temps dincubation est rduit (omission de plusieurs tapes denrichissement). Cette mthode est applicable aux lait et produits laitiers liquides; lait sec, lactosrum sucr sec, babeurre sec et lactose; casine acide, casine lactique et casine prsure; casi
25、nates et lactosrum acide sec; fromage et fromages fondus; beurre; produits laitiers congels (y compris les glaces de consommation); crme anglaise, desserts et crme. La mthode spcifie dans la prsente partie de lISO 11866 FIL 170 est la mthode recommande pour les chantillons supposs contenir un nombre
26、 relativement faible dEscherichia coli prsums et/ou autres coliformes prsums (moins de 100 par gramme ou 10 par millilitre). ATTENTION Certaines espces pathognes dEscherichia coli ne se dveloppent pas 44 C. Les possibilits dapplication de la prsente partie de lISO 11866 FIL 170 sont limites du fait
27、que cette mthode est sujette de grandes variations. Il est recommand dappliquer cette mthode et dinterprter les rsultats la lumire des renseignements donns lArticle 12. NOTE Pour rfrence, les mthodes dcrites dans lISO 4831 sappliquent pour le dnombrement des coliformes. ISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1
28、2005(F) 2 ISO et FIL 2005 Tous droits rservs2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y com
29、pris les ventuels amendements). ISO 7218, Microbiologie des aliments Recommandations et rgles gnrales pour les examens microbiologiques ISO 8261FIL 122, Lait et produits laitiers Lignes directrices gnrales pour la prparation des chantillons pour essai, de la suspension mre et des dilutions dcimales
30、en vue de lexamen microbiologique 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 Escherichia coli prsums bactries qui, 30 C, sparent le 4-mthylumbellifryl- -D-glucuronide (MUG) en mettant une fluorescence et qui produisent de lindole pa
31、rtir du tryptophane, dans les conditions spcifies dans la prsente partie de lISO 11866FIL 170 3.2 coliformes bactries qui, 30 C fermentent le lactose avec production de gaz, lorsque lessai est effectu selon la mthode spcifie dans la prsente partie de lISO 11866 FIL 170 4 Principe 4.1 Ensemencement d
32、e trois tubes de milieu slectif liquide denrichissement double concentration avec une quantit dtermine de lchantillon pour essai si le produit examiner est liquide, ou avec une quantit dtermine de suspension mre dans le cas dautres produits. 4.2 Ensemencement de trois tubes de milieu slectif liquide
33、 denrichissement simple concentration avec une quantit dtermine de lchantillon pour essai si le produit examiner est liquide, ou avec une quantit dtermine de suspension mre dans le cas dautres produits. Puis, dans les mmes conditions, ensemencement du milieu simple concentration avec des dilutions d
34、cimales de lchantillon pour essai ou de la suspension mre. 4.3 Incubation des tubes de milieu double ou simple concentration 30 C pendant 24 h 48 h. 4.4 Identification comme tant positifs pour Escherichia coli prsums, des tubes prsentant une fluorescence et une formation dindole. 4.5 Identification
35、comme tant positifs pour les coliformes prsums, des tubes prsentant une formation de gaz. 4.6 Dtermination du coefficient NPP daprs le nombre de tubes positifs (4.4) de dilutions choisies, au moyen dune table NPP (voir lAnnexe A) et calcul du nombre le plus probable (NPP) dEscherichia coli prsums pa
36、r gramme ou par millilitre dchantillon original. 4.7 Dtermination du coefficient NPP daprs le nombre de tubes positifs (4.5) de dilutions choisies, au moyen dune table NPP (voir lAnnexe A) et calcul du nombre le plus probable (NPP) de coliformes par gramme ou par millilitre dchantillon original. ISO
37、 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) ISO et FIL 2005 Tous droits rservs 3 5 Diluant, milieu de culture et ractifs 5.1 Gnralits Pour les pratiques courantes de laboratoires, voir lISO 7218 et lISO 8261 FIL 122. Si les milieux de culture et les ractifs prpars ne sont pas utiliss extemporanment, ils doiv
38、ent, sauf indications contraires, tre conservs lobscurit une temprature situe entre 0 C et +5 C pendant 1 mois au maximum, dans des conditions vitant toute modification de leur composition. 5.2 Diluant Voir lISO 8261 FIL 122. 5.3 Milieux de culture 5.3.1 Bouillon la tryptose et au lauryl sulfate (mi
39、lieu slectif denrichissement) 5.3.1.1 Composition a) Milieu double concentration b) Milieu simple concentration Tryptose 40,0 g 20,0 g Lactose 10,0 g 5,0 g Hydrognophosphate dipotassique (K 2 HPO 4 ) 5,5 g 2,75 g Dihydrognophosphate de potassium (KH 2 PO 4 ) 5,5 g 2,75 g Chlorure de sodium 10,0 g 5,
40、0 g Lauryl sulfate de sodium CH 3 (CH 2 ) 11 OSO 3 Na 0,2 g 0,1 g 4-Mthylumbellifryl- -D-glucuronide (MUG) 0,2 g 0,1 g Tryptophane 2,0 g 1,0 g Eau 1 000 ml 1 000 ml 5.3.1.2 Prparation Dissoudre les composants ou le milieu complet dshydrat dans leau, en chauffant si ncessaire. Si ncessaire, ajuster l
41、e pH de sorte quaprs strilisation, il soit de 6,8 25 C. Rpartir les milieux, par quantits de 10 ml, dans des tubes de 16 mm 160 mm (6.2) contenant des cloche de Durham (6.3) dans le cas du milieu simple concentration, et dans des tubes de 20 mm 200 mm (6.2) contenant des cloches de Durham (6.3) dans
42、 le cas du milieu double concentration. Striliser lautoclave (6.1) rgl 121 C pendant 15 min. Les cloches de Durham ne doivent pas contenir de bulles dair aprs strilisation. ISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) 4 ISO et FIL 2005 Tous droits rservs5.4 Ractif pour la recherche de lindole (ractif de Ko
43、vacs) 5.4.1 Composition Dimthylamino4 benzaldhyde 5,0 g Mthyl 2 butanol 1 ou pentanol 1 75,0 ml Acide chlorhydrique ( 20= 1,18 g/ml 1,19 g/ml) 25,0 ml 5.4.2 Prparation Dissoudre le dimthylamino 4 benzaldhyde dans lalcool en chauffant doucement entre 50 C et 55 C au moyen du bain deau (6.5). Refroidi
44、r et ajouter lacide chlorhydrique. Mettre labri de la lumire et conserver environ 4 C. Le ractif doit tre de couleur jaune clair brun clair. 5.5 Hydroxyde de sodium, solution, c(NaOH) 0,5 mol/l 5.5.1 Composition Hydroxyde de sodium 2 g Eau 100 ml 5.5.2 Prparation Dissoudre lhydroxyde de sodium dans
45、leau. 6 Appareillage et verrerie Voir lISO 7218 et lISO 8261 FIL 122 pour les spcifications gnrales. La verrerie doit rsister des strilisations rptes. Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Autoclave, rglable 121 C 1 C. Pour plus de dtails, voir lISO 721
46、8. 6.2 Tubes essais, denviron 16 mm 160 mm et 20 mm 200 mm, ou fioles ou flacons de capacits appropries. Il convient de vrifier, avant utilisation, que les tubes ne prsentent aucune flluorescence propre. 6.3 Cloches de Durham, de dimensions appropries en vue de leur utilisation dans les tubes (6.2).
47、 6.4 tuve, permettant de maintenir une temprature de 30 C 1 C en tous points. 6.5 Bain deau, rglable entre 50 C et 55 C. ISO 11866-1:2005(F) FIL 170-1:2005(F) ISO et FIL 2005 Tous droits rservs 5 6.6 Lampe ultraviolets (UV) ondes longues, de longueurs dondes comprises entre 360 nm et 366 nm, de prfrence dans une enceinte UV ou une chambre noire, ou couverte dun dispositif (bote ou carton) afin de faire le noir. NOTE Les lampes ondes courtes
