1、 Numro de rfrence ISO 12873:2010(F) ISO 2010NORME INTERNATIONALE ISO 12873 Premire dition 2010-05-01Huiles dolive et huiles de grignons dolive Dtermination de la teneur en cires par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire Olive oils and olive-pomace oils Determination of wax content
2、by capillary gas chromatography ISO 12873:2010(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet e
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5、 mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2010 Droits de reproduction rservs.
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7、du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2010 Tous droits rservsISO 12873:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs iiiAvant-propos LISO (Organisation internationale de n
8、ormalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les
9、organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdige
10、s conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes inter
11、nationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir ident
12、ifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 12873 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 11, Corps gras dorigines animale et vgtale. ISO 12873:2010(F) iv ISO 2010 Tous droits rservsIntroduction Dans le cadre de la Norme commerciale appli
13、cable aux huiles dolive et aux huiles de grignons dolive, le Conseil olicole international (COI) a publi la COI/T.20/Doc. 18:2007 4 . La COI/T.20/Doc. 18 tait applicable aux huiles dolive et aux huiles de grignons dolive et tait utilise pour faire la distinction entre les huiles dolive vierges lampa
14、ntes et les huiles de grignons dolive brutes. Les grignons dolive constituent la pte rsiduelle qui contient encore une quantit variable deau et dhuile aprs pressage ou centrifugation. En 2008, le COI a soumis le document lISO/TC 34/SC 11 en vue de son adoption en tant que Norme internationale. NORME
15、 INTERNATIONALE ISO 12873:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs 1Huiles dolive et huiles de grignons dolive Dtermination de la teneur en cires par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie la dtermination de la teneur en cire
16、s, sous forme de fraction massique exprime en milligrammes par kilogramme, des huiles dolive et des huiles de grignons dolive. Les diffrentes cires sont spares en fonction du nombre datomes de carbone. La mthode est recommande pour diffrencier lhuile dolive obtenue par pressage ou centrifugation de
17、celle obtenue par extraction (huile de grignons dolive). NOTE La prsente Norme internationale est fonde sur la mthode COI/T.20/Doc. 18/Rev. 2:2007 4 . 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldit
18、ion cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 661, Corps gras dorigines animale et vgtale Prparation de lchantillon pour essai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfi
19、nitions suivants sappliquent. 3.1 teneur en cires fraction massique de ces substances dans un chantillon, dtermine conformment la mthode spcifie dans la prsente Norme internationale NOTE La teneur en cires est exprime en milligrammes par kilogramme. 4 Principe Lhuile, additionne dun talon interne ap
20、propri, est fractionne par chromatographie sur colonne de gel de silice hydrat. La fraction lue dans les conditions de lessai ( polarit infrieure celle des triglycrides) est rcupre et analyse par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire. 5 Ractifs AVERTISSEMENT Il est ncessaire de se
21、conformer toute rglementation locale relative la manipulation des substances dangereuses. Des mesures de scurit technique, organisationnelle et personnelle doivent tre suivies. ISO 12873:2010(F) 2 ISO 2010 Tous droits rservsAu cours de lanalyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des rac
22、tifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise ou de leau de puret quivalente. 5.1 Gel de silice, dune granulomtrie comprise entre 60 m et 200 m, prpar comme suit: placer le gel de silice dans le four moufle 500 C pendant au moins 4 h; laisser refroidir, puis ajouter 2 % deau p
23、ar rapport la masse de gel de silice utilise; agiter convenablement afin dhomogniser la masse. Conserver labri de la lumire pendant au moins 12 h avant emploi. 5.2 n-Hexane, qualit pour chromatographie. 5.3 ther dithylique, qualit pour chromatographie. 5.4 n-Heptane, qualit pour chromatographie. 5.5
24、 talon interne, solution darachidate de lauryle dans lhexane, concentration massique 0,1 g/100 ml. NOTE Il est galement possible dutiliser du palmitate de palmityle ou du starate de myristyle. 5.6 Soudan I (1-phnylazo-2-naphtol). 5.7 Gaz vecteur: hydrogne ou hlium, qualit pour chromatographie en pha
25、se gazeuse. 5.8 Gaz auxiliaires: hydrogne, exempt dhumidit et de substances organiques, et air synthtique, qualit pour chromatographie en phase gazeuse. 6 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Erlenmeyer, de 25 ml. 6.2 Colonne en verre pour chromatographie
26、liquide, diamtre intrieur 15,0 mm, hauteur 30 cm 40 cm, quipe dun robinet. 6.3 Chromatographe en phase gazeuse, appropri au fonctionnement avec colonnes capillaires, quip des lments spcifis de 6.3.1 6.3.5. 6.3.1 Dispositif dinjection on column froid. 6.3.2 Four thermostat, quip dun programmateur de
27、temprature. 6.3.3 Dtecteur ionisation de flamme. 6.3.4 Systme informatique dintgration. 6.3.5 Colonne capillaire, en silice fondue, longueur 8 m 12 m, diamtre intrieur 0,25 mm 0,32 mm, avec phase liquide SE-52 ou SE-54 1)ou quivalent, avec une paisseur de film comprise entre 0,10 m et 0,30 m. 6.4 Mi
28、croseringue pour injection directe sur colonne, de 10 l, munie dune aiguille rigide. 6.5 Agitateur lectrique. 1) SE-52 et SE-54 sont des exemples de produits appropris disponibles sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie
29、nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif des produits ainsi dsigns. ISO 12873:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs 36.6 vaporateur rotatif. 6.7 Four moufle. 6.8 Balance analytique, pour peser avec une prcision de 0,1 mg. 7 chantillonnage Lchantillonnage ne fait pas partie de la mtho
30、de spcifie dans la prsente Norme internationale. Une mthode dchantillonnage recommande est indique dans lISO 5555 1 . Il est important que le laboratoire reoive un chantillon rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors du transport ou de lentreposage. 8 Prparation de lchantillon pour essai P
31、rparer lchantillon pour essai conformment lISO 661. 9 Mode opratoire 9.1 Prparation de la colonne pour chromatographie Mettre en suspension 15 g de gel de silice (5.1) dans le n-hexane (5.2) et introduire dans la colonne pour chromatographie (6.2). Laisser dposer spontanment. Utiliser un agitateur l
32、ectrique (6.5) pour faciliter le tassement du dpt et rendre la couche chromatographique plus homogne. Percoler 30 ml de n-hexane afin dliminer les impurets ventuelles. Peser, 0,1 mg prs, environ 500 mg de lchantillon dans un Erlenmeyer de 25 ml (6.1), ajouter une quantit approprie dtalon interne (5.
33、5) en fonction de la teneur prsume en cires. Ajouter 0,1 mg darachidate de lauryle dans la solution dtalon interne (5.5) dans le cas dune huile dolive, et 0,25 mg 0,50 mg dans le cas dune huile de grignons dolive. Transfrer la prise dessai dans la colonne pour chromatographie laide de deux portions
34、de 2 ml chacune de n-hexane. Laisser scouler le solvant jusqu 1 mm au-dessus du niveau suprieur de labsorbant. Percoler 70 ml de n-hexane supplmentaires afin dliminer les n-alcanes naturellement prsents. Commencer alors llution chromatographique en recueillant 180 ml dun mlange de 99 ml/100 ml de n-
35、hexane (5.2) et de 1 ml/100 ml dther dithylique (5.3) un dbit denviron 15 gouttes toutes les 10 s. Effectuer la chromatographie sur colonne temprature ambiante. Prparer le mlange n-hexane-ther dithylique chaque jour. Pour contrler visuellement llution correcte des cires, ajouter 100 l de Soudan I (5
36、.6) en solution une concentration de 1 g/100 ml dans la prise dessai en solution. Le colorant est retenu entre les cires et les triglycrides sur la colonne pour chromatographie. Par consquent, lorsque le colorant atteint le bas de la colonne, stopper llution car toutes les cires ont t lues. vaporer
37、la fraction obtenue laide dun vaporateur rotatif (6.6) jusqu limination presque totale du solvant. liminer les deux derniers millilitres de solvant laide dun faible courant dazote, puis ajouter 2 ml 4 ml de n-heptane. ISO 12873:2010(F) 4 ISO 2010 Tous droits rservs9.2 Analyse par chromatographie en
38、phase gazeuse 9.2.1 Oprations prliminaires Si la colonne est utilise pour la premire fois, il est recommand de procder son conditionnement. Laisser passer un faible dbit de gaz travers la colonne, puis mettre en marche lappareil de chromatographie en phase gazeuse. Chauffer graduellement jusqu attei
39、ndre, au bout de 4 h environ, une temprature de 350 C. Maintenir cette temprature pendant au moins 2 h, puis procder au rglage de lappareil aux conditions de fonctionnement (dbit de gaz, allumage de la flamme, temprature du four pour colonne, dtecteur, etc.). Enregistrer le signal une sensibilit au
40、moins deux fois suprieure celle prvue pour lexcution de lanalyse. Il convient que la ligne de base soit linaire, exempte de pics de toute nature, et elle ne doit pas prsenter de drive. Une drive rectiligne ngative indique une tenue incorrecte des raccordements de la colonne; une drive positive indiq
41、ue un conditionnement insuffisant de la colonne. 9.2.2 Conditions opratoires Les conditions opratoires suivantes sont recommandes. Temprature de la colonne: maintien 80 C pendant 1 min; augmentation de 20 C/min jusqu 240 C; augmentation de 5 C/min jusqu 325 C, puis maintien 325 C pendant 5 min; augm
42、entation de 20 C/min jusqu 340 C, puis maintien 340 C pendant 10 min; temprature du dtecteur: 350 C; volume dinjection: 1 l de la solution de n-heptane; gaz vecteur: hlium ou hydrogne la vitesse linaire optimale pour le gaz slectionn (voir Annexe C). Compte tenu de la temprature finale leve de 340 C
43、 dans la colonne, une drive positive est admise, mais elle ne doit pas tre suprieure 10 % de la pleine chelle. Ces conditions doivent tre modifies en fonction des caractristiques de la colonne et de lappareil de chromatographie en phase gazeuse, de manire obtenir une sparation de toutes les cires et
44、 une rsolution satisfaisante des pics (voir Figure A.1). Le temps de rtention de ltalon interne doit tre de (18 3) min et le pic le plus reprsentatif des cires doit correspondre au moins 60 % de la pleine chelle. 9.3 Excution de lanalyse Prlever 1 l de la solution laide de la microseringue de 10 l (
45、6.4); tirer le piston de la seringue jusqu ce que laiguille soit vide. Introduire laiguille dans le dispositif dinjection et, aprs 1 s 2 s, injecter rapidement. Au bout denviron 5 s, extraire lentement laiguille. Enregistrer le chromatogramme jusqu lution complte des cires. La ligne de base doit tou
46、jours rpondre aux conditions requises. 9.4 Identification des pics Identifier les pics partir des temps de rtention en les comparant aux temps de rtention connus de mlanges de cires analyss dans les mmes conditions. La Figure A.1 reprsente un chromatogramme de la fraction de cires dune huile dolive
47、vierge. ISO 12873:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs 510 Analyse quantitative et expression des rsultats Dterminer les aires des pics correspondant ltalon interne et aux esters aliphatiques de C 40 C 46et calculer la teneur en cires, w w , en milligramme par kilogramme dhuile, daprs lquation: IS w IS 1 000 i i Am w Am = o A iest laire de pic de chaque pic correspondant aux esters en C 40 C 46 , compris; A ISest laire du pic cor
