1、NORME INTERNATIONALE ISO 15517 Premire dition 2003-04-15 Numro de rfrence ISO 15517:2003(F) ISO 2003 Tabac Dtermination de la teneur en nitrates Mthode par analyse en flux continu T obacco Determination of nitrate content Continuous-flow analysis methodISO 15517:2003(F) ii ISO 2003 Tous droits rserv
2、s PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisa
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7、1 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en SuisseISO 15517:2003(F) ISO 2003 Tous droits rservs iii Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Ll
8、aboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent g
9、alement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniq
10、ues est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le
11、fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 15517 a t labore par le comit technique ISO
12、/TC 126, Tabac et produits du tabac, sous-comit SC 2, Tabacs en feuilles iv NORME INTERNATIONALE ISO 15517:2003(F) ISO 2003 Tous droits rservs 1 Tabac Dtermination de la teneur en nitrates Mthode par analyse en flux continu 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode po
13、ur la dtermination de la teneur en nitrates dans le tabac, par analyse en flux continu. La prsente mthode est applicable aux tabacs bruts et aux tabacs manufacturs. 2P r i n c i p e Un extrait aqueux (voir ci-dessous) de tabac est prpar et la teneur en nitrates contenue dans lextrait est dtermine pa
14、r rduction des nitrates en nitrites par du sulfate dhydrazine en prsence dun catalyseur au cuivre, suivie dune raction avec de la sulfanilamide pour former le compos diazoque. Celui-ci est associ du N-napthyl-1 thylnediamine dichlorhydrate pour former un complexe color, mesur . Les nitrites ventuell
15、ement prsents seront galement mesurs et ajouts au rsultat des nitrates. Des essais interlaboratoires ont montr que cette mthode donne des rsultats quivalents pour lextraction leau et lacide actique . Il est recommand dutiliser des extraits lacide actique dans le cas danalyses simultanes des nitrates
16、, des substances rductrices (voir lISO 15153) ou des hydrates de carbone rducteurs (voir lISO 15154). 3R actifs Tous les ractifs doivent tre utiliss selon les bonnes pratiques de laboratoire et les rglementations nationales en vigueur. Utiliser de leau distille ou dune puret au moins quivalente. 3.1
17、 ther laurique de polyoxythylne (solution de Brij 35) Ajouter 1 litre deau de solution de Brij 35. Chauffer et agiter jusqu dissolution. 3.2 Solution dhydroxyde de sodium (NaOH), de qualit pour analyse Dissoudre dhydroxyde de sodium dans de leau distille. Ajouter de solution de Brij 35 (3.1) et comp
18、lter 1l i t r e . 3.3 Solution mre de sulfate de cuivre (CuSO 4 ), de qualit pour analyse Dissoudre de sulfate de cuivre(ll) pentahydrat dans de leau distille et complter . 3.4 Ractif au sulfate dhydrazine/sulfate de cuivre Dissoudre la quantit optimale de sulfate dhydrazine (N 2 H 6 SO 4 , de quali
19、t pour analyse) dans de leau. Ajouterde solution mre de sulfate de cuivre (3.3) et complter 1 litre avec de leau. Conserver dans un flacon en verre ambr. Prparer une solution frache tous les mois. 520 nm 5% 5% 250 g 8,0 g 1 ml 1,20 g 100 ml 1,5 mlISO 15517:2003(F) 2 ISO 2003 Tous droits rservs 3.5 R
20、actif la sulfanilamide (NH 2 C 6 H 4 SO 2 NH 2 ) Ajouter dacide orthophosphorique concentr (H 3 PO 4 , en fraction volumique, faible teneur en nitrates) environ deau. Dissoudre de sulfanilamide dans la solution, puis ajouter de N-napthyl-1 thylnediamine dichlorhydrate (C 10 H 7 NHCH 2 CH 2 NH 2 ,2HC
21、l). Complter avec de leau et filtrer laide dun papier-filtre Whatman n 40 1)(ou lquivalent). Conserver dans un flacon en verre ambr. Prparer une solution frache tous les deux jours. 3.6 Nitrate de potassium (KNO 3 ), de qualit pour analyse 3.7 Solutions talons de nitrates 3.7.1 Solution mre Peser, p
22、rs, environ de nitrate de potassium (3.6). Dissoudre dans de leau dans une fiole jauge et complter 1 litre. Cette solution contient environ de nitrates. Conserver au rfrigrateur. Prparer une solution frache tous les mois. 3.7.2 Solutions dtalonnage partir de la solution mre (3.7.1), prparer une srie
23、 dau moins cinq solutions dtalonnage dont les concentrations couvrent la gamme de concentrations prsumes des chantillons analyser (par exemple de de nitrates). Calculer la concentration exacte pour chaque talon. Conserver au rfrigrateur. Prparer des solutions fraches toutes les deux semaines. Si de
24、lacide actique doit tre utilis (5 fois) pour extraire la nicotine de lchantillon pour essai en 5.2, les solutions dtalonnage (3.7.2) doivent tre prpares toutes les deux semaines partir de la solution mre en utilisant de lacide actique la place de leau. 4 Appareillage Matriel courant de laboratoire e
25、t, en particulier, ce qui suit. 4.1 Analyseur flux continu, comprenant un chantillonneur, un dialyseur, un bain-marie, des bobines de raction, un colorimtre (ou lquivalent) avec filtre(s) de , un enregistreur. Voir un exemple lAnnexe B. 5 Mode opratoire 5.1 Prparation des chantillons analyser Broyer
26、 les chantillons de tabac analyser (il convient que la totalit de lchantillon passe travers un tamis de douverture de maille) et en dterminer le taux dhumidit. Si le tabac est trop humide pour tre broy, 1) Whatman n 40 est un exemple de produit appropri disponible sur le march. Cette information est
27、 donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. 25 ml 85 % 175 ml 2,5 g 0,125 g 250 ml 0,000 1 g 3,3 g 2 mg/ml 10 g/ml 200 g/ml 5% 5% 520 nm 1mmISO 15517:2003(F) ISO 2003 Tous droi
28、ts rservs 3 il peut tre sch une temprature nexcdant pas . viter au maximum toute contamination par les nitrates ou les nitrites. 5.2 Prise dessai Peser, prs, environ de tabac dans une fiole conique sche de . laide dun distributeur, ajouter deau distille, boucher la fiole et agiter pendant . 5.3 Prpa
29、ration de lextrait pour essai Filtrer lextrait travers un papier-filtre Whatman n 40 (ou lquivalent). Rejeter les premiers millilitres de filtrat et recueillir le reste dans le flacon de lanalyseur. Analyser les chantillons et les talons de faon habituelle (par exemple commencer avec six extraits de
30、 tabac, des solutions dtalonnage et des chantillons avec une solution dtalonnage intermdiaire tous les six chantillons). Si les concentrations des chantillons se trouvent hors de la gamme dchantillonnage, les chantillons doivent tre dilus et lanalyse doit tre recommence. 6C a l c u l s 6.1 Tracer la
31、 courbe reprsentative des hauteurs de pics en fonction des concentrations quivalentes en nitrates pour toutes les solutions dtalonnage. 6.2 Calculer le pourcentage de nitrates dans le tabac, , rapport la matire sche, laide de la formule o est la concentration en nitrates, exprime en microgrammes par
32、 millilitre, obtenue partir de la courbe dtalonnage (voir 6.1); est le volume, en millilitres, de lextrait prpar (voir 5.2) (normalement ); est la masse, en milligrammes, de lchantillon (voir 5.2); est le taux dhumidit du tabac, exprim en pourcentage en masse (voir 5.1). Les rsultats dessai doivent
33、tre exprims avec deux dcimales. Lors dextractions lacide actique , les solutions talons de nitrates (3.7) doivent tre compltes avec de lacide actique et le cycle de rinage doit tre ralis avec de lacide actique . 7R ptabilit et reproductibilit Une tude interlaboratoires organise sur le plan internati
34、onal, conduite en 1993, avec la participation de 12 laboratoires et portant sur 3 chantillons, a permis dobtenir les valeurs suivantes pour les limites de rptabilit ( ) et de reproductibilit ( ) lors de lanalyse de grades dfinis de tabac par la prsente mthode. La diffrence entre deux rsultats indivi
35、duels obtenus pour diffrentes extractions par le mme oprateur utilisant le mme appareillage dans un court intervalle de temps (le temps ncessaire pour analyser 40 cupules dchantillons) et sans rtalonner lappareillage durant toute lanalyse nexcdera la limite de rptabilit () quen moyenne une fois au p
36、lus sur 20, lorsque la mthode est normalement et correctement applique. Des rsultats individuels obtenus par deux laboratoires ne diffreront de la limite de reproductibilit () q u e n moyenne une fois au plus sur 20, lorsque la mthode est normalement et correctement applique. 40 C 0,1 mg 250 mg 50 m
37、l 25 ml 30 min w w = CV 100 m 1000 100 100M C V 25 ml m M 5% 5% 5% rR r RISO 15517:2003(F) 4 ISO 2003 Tous droits rservs Lanalyse des donnes a permis dobtenir les estimations rcapitules dans les Tableaux 1 et 2. Pour calculer et , un rsultat dessai a t dfini comme tant le taux obtenu en analysant un
38、 extrait donn une seule fois. Tableau 1 Extraction leau Type de tabac Teneur moyenne en nitrate Limite de rptabilit Limite de reproductibilit(matire sche) Tabac sch lair chaud 0,11 0,03 0,12 Tabac dOrient 0,16 0,04 0,11 Tabac Burley 2,43 0,12 0,41 Tableau 2 Extraction lacide actique Type de tabac Te
39、neur moyenne en nitrate Limite de rptabilit Limite de reproductibilit(matire sche) Tabac sch lair chaud 0,11 0,03 0,20 Tabac dOrient 0,16 0,04 0,21 Tabac Burley 2,43 0,05 0,39 r R % rR 5% % rRISO 15517:2003(F) ISO 2003 Tous droits rservs 5 Annexe A (normative) Optimisation du ractif au sulfate dhydr
40、azine/sulfate de cuivre A.1 Gnralits Loptimisation du ractif au sulfate dhydrazine/sulfate de cuivre (voir3.4) doit tre effectue pendant linitialisation de linstrument. Il convient galement de la raliser chaque fois quun nouveau lot de sulfate dhydrazine est achet. A.2 Ractifs A.2.1 Solution mre de
41、nitrites Dissoudre de nitrite de sodium (NaNO 2 , de qualit pour analyse) dans de leau distille et complter au volume dans une fiole jauge de 1 litre. Cette solution contient de nitrites. A.2.2 Solutions dtalonnage de nitrites laide dune pipette, prlever une portion aliquote de de la solution mre (A
42、.2.1) et lintroduire dans une fiole jauge de puis complter au volume avec de leau distille. Cette solution contient de nitrites. A.3 Optimisation du ractif au sulfate dhydrazine A.3.1 Diluer de la solution mre de sulfate de cuivre (3.3) 1 litre avec de leau distille. A.3.2 Dissoudre de sulfate dhydr
43、azine dans de leau distille et complter dans une fiole jauge. A.3.3 laide dune burette, doser des parties aliquotes de , , , , de la solution de sulfate dhydrazine (voir A.3.2) dans des fioles jauges de , puis complter au volume avec de leau distille. Ces solutions contiennent , , , , de sulfate dhy
44、drazine par litre. A.3.4 Brancher le tube du ractif hydrazine/cuivre sur lchantillonneur de lanalyseur. Relier le tube de leau au flacon de la solution dilue de sulfate de cuivre. Relier le tube dchantillon au flacon de la solution dtalonnage de nitrites (voir A.2.2). A.3.5 Dmarrer la pompe de lanal
45、yseur et pomper tous les autres ractifs de manire normale. A.3.6 Placer les cupules dchantillons de solutions dhydrazine (A.3.3) dans lchantillonneur par ordre croissant de concentration. A.3.7 Lorsque la raction colore atteint la cellule, ajuster la rponse de lenregistreur de ltendue de lchelle et
46、dmarrer lchantillonneur. A.3.8 Une fois que toutes les solutions dhydrazine ont t analyses, noter la concentration qui provoque une perte de couleur due la rduction des nitrites en azote. A.3.9 Remplacer la solution dtalonnage de nitrites (A.2.2) par la solution talon de nitrates la plus leve (voir
47、3.7.2). Attendre que la ligne de base du ractif soit rtablie et repasser les solutions de sulfate dhydrazine. 0,900 g 0,6 mg/ml 25 ml 100 ml 150 g/ml 0,75 ml 0,5 g 100 ml 1,0 ml 2,0 ml 3,0 ml 10,0 ml 25 ml 0,2 g 0,4 g 0,6 g 2,0 g 90 %ISO 15517:2003(F) 6 ISO 2003 Tous droits rservs A.3.10 La concentration optimale de sulfate dhydrazine est celle qui assure une rduction c
