1、Norme internationale INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONMEXAYHAPOJJHAR OPI-AHM3AL ils seront prcissdans chaque Norme internationale particulire. 1 ISO 76094985 (FI doser et ne se superposer aucun composs de Ihuile essentielle. des pics correspondant aux 7 Conditions opratoires 7.1 Temprat
2、ures 4.6 Alcanes normaux, de puret minimale 95 % dtermi- ne par chromatographie. La gamme des alcanes normaux utiliser dans une certaine Norme internationale dpend de lindice de rtention des composs concerns dans les condi- tions de lessai. Les tempratures du fo ur, de I injecteur et du dtecteur ser
3、ont prcises dans chaque Norme internationale particulire. 7.2 Dbit du gaz vecteur NOTE - Les alcanes normaux sont dterminer les indices de rtention. uniquement si lon dsire Rgler le dbit de manire obtenir lefficacit ncessaire (voir 8.2). 4.7 Mlange dessai. 7.3 Dbit des gaz auxiliaires Prparer un mla
4、nge contenant des proportions peu prs gales de Se rfrer aux instructions du constructeur de lappareil, de manire respecter les conditions optimales de rponse du dtecteur. - limonne, - actophnone, 8 Performances de la colonne - linalol, - actate de linalyle, 8.1 Test dinertie chimique - naphtalne, In
5、jecter une quantit dactate de linalyle dans les conditions danalyse (voir 7.1). - alcool cinnamique. Tous ces ractifs doivent tre de puret minimale 95 % dtermi- ne par chromatographie. On doit obtenir un seul pic (dans la limite de puret dfinie). 8.2 Efficacit de la colonne NOTE - Dautres produits p
6、euvent tre utiliss dans chaque Norme internationale particu ire. ; ils seront prciss Dterminer lefficacit de la colonne sur le pic du linalol, tem- prature isotherme de 130 OC. Dterminer le nombre de pla- teaux effectifs, N, qui doit tre au moins gal a 25 000, laide de lune ou lautre des formules su
7、ivantes: 5 Appareillage 5.1 Chromatographe, quip dun injecteur spcial pour colonnes capillaires, permettant linjection de quantits de lordre de 10w6 g, dun dtecteur appropri et dun programma- teur de temprature. Les systmes dinjection et de dtection doivent tre munis de dispositifs permettant le rgl
8、age indpen- dant de leurs tempratures respectives. Formule no 7 (voir figure 1) d 2 N=16 r 0 cr) Formule no 2 5.2 Colonne, en matriau inerte (par exemple verre, acier inoxydable, silice ou silice fondue), dun diamtre intrieur compris entre 0,2 et 0,5 mm, et dune longueur de 15 100 m. o La nature de
9、la phase stationnaire sera prcise dans chaque Norme internationale particulire. Actuellement, les phases sta- tionnaires les plus couramment utilises sont: les polysiloxanes mthyls ou phnyls ou polythylnes glycols dont les fonc- tions alcool terminales peuvent tre libres ou estrifies. d: est la dist
10、ance de rtention rduite, en units de lon- gueur (distance de rtention du p.ic du linalol moins la dis- tance de rtention du pic de lair ou du pic du mthane 130 OC, assimilable au pic de lair); 53 forma Enregistreur et intgrateu r lectronique, dont les per- nces sont compatibles avec lensemble de 1 a
11、ppareillage. ct) est la distance, en mmes units de longueur que la dis- tance de rtention, comprise entre les deux points dinter- section de la ligne de base avec les deux tangentes aux points dinflexion du pic du linalol; 6 Prparation de lchantillon pour essai b est la largeur, en millimtres, (lina
12、lol) mi-hauteur du pic. du pic du compos spcifi Voir ISO 356. La vitesse de droulement du papier de lenregistreur doit tre telle que cc) soit au moins gale 10 mm, de facon avoir une prcision suffisante. Si lchantillon pour essai injecter doit subir une prparation spciale, celle-ci sera indique dans
13、la Norme internationale particulire. 2 ISO 76094985 (F) Figure 1 La vitesse de droulement du papier de lenregistreur doit tre telle que b soit au moins gale 5 mm, de facon avoir une prcision suffisante. 8.3 Rsolution et shparation Pour dbterminer la rsolution et/ou la sparation, injecter une quantit
14、 du mlange dessai (4.7) dans les conditions de lessai. 8.3.1 Dbtermination de la rhsolution Calculer le facteur de rsolution, R, de deux pics avoisinants I et II, laide de la formule R 2 dr(ll) - d,(l) = ql) + WI) Figure 2 Si les deux pics ne sont pas compltement spars, les tangen- tes aux points di
15、nflexion des deux pics se croisent au point C. Pour sparer compltement les deux pics la distance entre les deux pics doit tre gale o d r(ll) -4(l) = 6 0 d,(l) est la distance de rtention du pic 1; do R = 1,5 (voir figure 3). d,(ll, est la distance de rtention du pic II; OI() est la largeur de la bas
16、e du pic 1; (11) est la largeur de la base du pic II; Si o(l) = o(I), calculer R laide de la formule R= 4(lI) - 4l) = 411) - 4(l) cc) 40 o 0 est lcart-type (voir figure 1). Si la distance entre les deux pics, drlllj -drllj, est gale 4 O, le facteur de rhsolution R = 1. Figure 3 3 ISO 76094985 (FI 8.
17、3.2 Dtermination de la sparation (voir figure 4) Tracer une droite passant par les sommets des pics concerns. A partir de la ligne de base, tracer une perpendiculaire passant par le minimum entre les deux pics. Mesurer la distance, h, sur cette perpendiculaire, entre la ligne de base et son point di
18、ntersection avec la droite passant par les sommets des pics concerns. Mesurer galement la distance, v, sur la perpendiculaire entre la ligne de base et le point minimal entre les deux pics. Calculer la sparation, p, exprime en pourcentage, laide de la formule 100 (h - v) P= h 8.3.3 Contrle de la spa
19、ration en temprature programme Travailler dans les conditions suivantes: - colonne de dimthylpolysiloxane ou de polythylne glycol ; - temprature programme de 80 220 OC, raison de 2 ou 3 OC/min. Le dbit du gaz vecteur doit permettre llution de tous les com- posants du mlange dessai (4.7) et des alcan
20、es normaux (4.6) ncessaires pour la dtermination de leurs indices de rtention avant la fin de la programmation de temprature. 8.3.3.1 Injecter une quantit approprie du mlange dessai (4.7). Sur le chromatogramme obtenu : a) sur les colonnes de dimthylpolysiloxane, les pics du limonne et de Iactophnon
21、e doivent tre spars 95 % au moins (voir 8.3.2); b) sur les colonnes de polythylne glycol UV, = 20 OOO), les pics du linalol et de lactate de linalyle doivent etre sepa- rs 95 % au moins (voir 8.3.2). Pour les autres remplissages ventuellement indiqus dans la mthode danalyse, les exigences seront prc
22、ises dans celle-ci. 8.3.3.2 Injecter une quantit approprie du mlange dessai (4.7) et calculer les indices de rtention (voir chapitre 9) des constituants du mlange dessai. Sur les colonnes de dimthylpolysiloxane, utiliser les alcanes Sur les colonnes de polythylne glycol (M, = 20 000), utiliser les a
23、lcanes CI1 +, d; d;. Comparer les chromatogrammes A (voir 10.1 .l) et B (voir chapitre 9) et reprer dans le chromatogramme BH les pics correspondant aux alcanes normaux. 9.2.2 Opration effectue en progra temprature linaire ds linjection mmation de Sur le suit. chromatogramme a B ), effectuer les mes
24、ures comme Ce calcul nest valable que pour les composs dont les temps de rtention sont compris dans la zone linaire de program- mation. 9.1.1 Conditions isothermes Calculer lindice de rtention, I, laide de la formule Calculer la diffrence des distances de rtention entre le som- A I = 100-J+ loon du
25、met du pic considr et le sommet cette diffrence, en mill imtres. du pic du ne. Soit dk Calculer la diffrence des distances de rtention entre le som- met du pic du mthane et le sommet du pic de Ialcane normal dont le temps de rtention est immdiatement infrieur celui du pic considr. Soit d; cette diff
26、rence, .en millimtres. o A, est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic dont il faut calculer lindice de rtention, et le sommet du pic de Ialcane normal n atomes de carbone (voir 9.1.2); Calculer la diffrence des distances de rtention entre le som- met du pic du mthane et le sommet du pic
27、 de Ialcane normal dont le temps de rtention est immdiatement suprieur celui du pic considr. Soit dA+l cette diffrence, en millimtres. A, est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic de Ialcane normal n atomes de carbone, et le sommet du pic de Ialcane normal (n + 1) atomes de carbone (voi
28、r 9.1.2). 9.1.2 Opration effectue en prog temprature linaire ds Ii njection rammation de NOTE - Si des programmes mixtes de tempratures il nest Pas possible de calculer lindice de rtention. ont t effectus, Mesurer la distance sur la ligne de base entre le sommet du pic dont il faut dterminer lindice
29、 de rtention, et le sommet du pic de Ialcane normal (n atomes de carbone) dont le temps de rtention est immdiatement infrieur celui du pic considr. Soit A, cette distance, en millimtres. 10 Mthodes de dosage 10.1 Conditions gnrales Mesurer la distance sur la ligne de base entre les sommets des pics
30、de Ialcane normal infrieur avoisinant (n atomes de car- bone) et Ialcane normal (n + 1 atomes de carbone) dont le 10.1.1 Chromatogramme de Ihuile essentielle temps de rtention est immdiatement suprieur considr. Soit Ay cette distance, en millimtres celui du pic Prparer le chromatogra nationale parti
31、culire. mme comme le prcise la Norme i nter- Les conditions de temprature et de dbit doivent tre les mmes que celles utilises pour lessai defficacit de la colonne (voir 8.2). t - bg d; + mon log d;+, - log dl, Aprs stabilisation de la temprature de la colonne, injecter une quantit approprie de la pr
32、ise dessai ( de lordre de 10 -6 9). o On obtient le chromatogramme A. 10.2 Mthode de ltalon interne Raliser successivement le chromatogramme de Ihuile essen- tielle et celui de ltalon interne (4.5) en utilisant les mmes con- ditions opratoires. Vrifier sur les chromatogrammes, dune part, que les pro
33、duits doser sont spars des autres consti- tuants de Ihuile essentielle et, dautre part, que ltalon interne ninterfre avec aucun constituant de Ihuile essentielle. d n+l est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic de Ialcane normal (n + 1) atomes de carbone, et le sommet du pic dit de lair (ou le pic du mthane) (voir 9.1.1).
