1、NORME INTERNATIONALE ISO 8128-2 Premire dition 1993-07-01 Jus de pommes, concentrs de jus de pommes et boissons base de jus de pommes - Dtermination de la teneur en patuline - Partie 2: Mthode par chromatographie sur couche mince Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juic
2、e - Determina tion of pa tulin content - Part 2: Method using thin-layer chromatography Numro de rfrence ISO 8128-2:1993(F) ISO 8128=2:1993(F) Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une federation m.ondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de IISO)
3、. Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comites techniques de IISO. Chaque comite membre intress par une tude a le droit de faire partie du comite technique cree a cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen- tales, en liaison avec IISO
4、participent galement aux travaux. LISO colla- bore etroitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les projets de Normes internationales adoptes par les comits techniques sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publicat
5、ion comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des co- mites membres votants. La Norme internationale ISO 8128-2 a ete laboree par le comit techni- que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comit SC 3, Produits d mlange de tolune/actate dthyle/acide formi- que (90
6、 % en masse) (5:4:1 en volume). 3.3 Gel de silice, pour chromatographie sur co- lonne, de 0,063 mm 0,2 mm de granulomtrie. 2 Principe Extraction de la patuline dans un mlange dactate dthyle-chloroforme (3:2 en volume). Filtration de lextrait sur une colonne de gel de silice et estimation qualitative
7、 et semi-quantitative par chromatographie sur couche mince bidirectionnelle (CCM). Les taches sont dveloppes par emploi dune solution de chlor- hydrate dhydrazone de 3-mthyl-2-benzothiazoline (MBTH). 3 Ractifs Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue, et de leau distille ou dmin
8、ralise ou de leau de puret au moins quivalente. AVERTISSEMENT - Des pr A276 est Iabsorbance de la solution de patuline, au maximum dabsorption de 276 nm (voir note 3). est la masse moleculaire relative de la patuline; C est la constante de lappareil (1 en gn- ral). NOTE 3 Le coefficient dabsorption
9、molculaire de la patuline mesur 276 nm, est gal 14 600. 3.6 Solution de chlorhydrate de MBTH. Dissoudre 0,5 g de chlorhydrate dhydrazone de 3-mthyl-2-benzothiazoline (MBTH) monohydrat dans 100 ml deau. Placer au rfngrateur et prparer une nouvelle solu- tion au moins tous les 3 jours. 4 Appareillage
10、Rincer le materiel de laboratoire avant son utilisation avec une solution dhypochlorite de sodium 10 g/l. Matriel courant de laboratoire, et notamment: 4.1 Colonnes chromatographiques, de 300 mm x 22 mm, prsentant un reservoir de 250 cm3 et un robinet darrt, et munies, une ex- trmit, dun disque en v
11、erre fritt. 4.2 quipement CCM, reservoirs de dvelop- pement en verre, lampe UV ondes longues (360 nm) et pulvrisateur. 4.5 tuve, ventile, pouvant 1 13O”C+l “C. - 5 chantillonnage CCM, de I de silice (3.3) sans indicateur tre rgle II est important que le laboratoire reoive un chan- tillon rellement r
12、eprsentatif, non endommage ou modifie lors du transport et de lentreposage. 6 Mode opratoire 6.1 Prparation de la solution dessai Diluer les concentres de jus de pommes dans leau, en utilisant un mlange 1:5 de concentre et deau, en volume. Proceder ensuite comme pour les autres produits de la faon s
13、uivante. Extraire 50 ml de lchantillon pour laboratoire (dilue si necessaire avec de leau) avec 50 ml dun mlange dactate dthyle/chloroforme (3:2 en volume) pendant au moins 1 min. Rpter lextraction deux autres fois avec des por- tions de 50 ml de mlange dacetate dthyle/chloroforme et filtrer chaque
14、portion sur un entonnoir en verre fritt, contenant une couche de 1 cm de sulfate de sodium anhydre, en recueillant le filtrat directement dans un ballon dvaporation de 250 ml. vaporer sous vide jusqu siccit dans un vapo- rateur rotation et transferer quantitativement le re- sidu ainsi obtenu dans un
15、e prouvette gradue de 100 ml, en rinant le ballon avec quatre portions de 5 ml dactate dthyle. Diluer 25 ml avec de Iac- tate dthyle, puis a 100 ml avec du tolune. 6.2 Chromatographie sur colonne Placer un petit tampon de laine de verre dans le bas de la colonne (4.1), ajouter ensuite 25 ml de tolun
16、e. Ajouter une bouillie compose de 15 g de gel de silice (3.3) dans 40 ml de toluene dans la colonne, puis 15 g de sulfate de sodium anhydre et laisser goutter le solvant jusqu ce que la surface du solvant soit de niveau avec le haut du garnissage. Ajouter lextrait de la prise dessai dans la colonne
17、 et laisser goutter jusqu ce que la surface du solvant soit de niveau avec le haut du garnissage. liminer cet luat. Ajouter 200 ml de la solution dlution (3.4) dans la colonne et rcuprer Iluat dans une prouvette gradue un debit denviron 5 ml/min. vaporer Ieluat jusqu en- viron 2 ml. 4.3 Fluorodensit
18、om Vl est le volume, en m de I a solution d essai icro #litres , de la tache est le volume, en microlitres, des taches de la solution talon de patuline (3.5) don- nant une intensit de fluorescence gale celle donnee par la tache de la solution dessai; PPS est la concentration, en microgrammes par mil
19、lilitre, de la solution talon de patuline. 8 Fidlit Les paramtres statistiques sont exprimes selon IISO 57251. 8.1 Rptabilit r = 33,4; s, = 29,4 o r est la limite de rptabilit; Sr est lcart-type de rptabilit. 8.2 Reproductibilit R = 41 ,O; SR = 35,8 o R est la limite de reproductibilit; SR est lcart
20、-type de reproductibilit. 9 Rapport dessai Le rapport dessai doit indiquer - la methode utilise, - le rsultat obtenu, - et si la rptabilit a te vrifie, le rsultat final cite qui a te obtenu. 1) HMF = hydroxy-5 mthylfurfural ISO 8128=2:1993(F) II doit, en outre, mentionner tous les d&aiIs opratoi- re
21、s non prvus dans la prsente partie de IISO 8128 ou facultatifs, ainsi que les incidents ventuels sus- ceptibles davoir agi sur le ksultat. Le rapport dessai doit donner tous les rensei- gnements ncessaires lidentification complte de I6chantiIIon. Figure 1 - Chromatographie sur couche mince bidirecti
22、onnelle Direction II Dimensions en centimtres 4 Annexe A (informative) Bibliographie 1 ISO 5725: 1986, Fidelit des mthodes dessai - Dtermination de la reptabilite et de la re- productibilite dune mthode dessai normalisee par essais interlaboratoires. pa tuline - Partie 1: Methode par chromatogra- ph
23、ie en phase liquide a haute performance. 3 Officia1 Methods of Analysis, Vol. 12, Washington DC: AOAC, 1975, p. 463. 2 ISO 8128-l :1993, Jus de pommes, concentres de jus de pommes et boissons a base de jus de pommes - Dtermination de la teneur en 4 LINDROTH, S. et NISKANWN, A. J. Food Sci., 43, 446-448 (1978). ISO 8128=2:1993(F) CDU 663.813:634.11:543.544:632.4 Descripteurs: produit agricole, produit vgtal, produit alimentaire, boisson, pomme, jus de fruit et de lgume, analyse chimique, dosage, patuline, mthode chromatographique sur couche mince. Prix bas sur 5 pages
