1、医 学 分 子生 物 学 考 试 重 点 一、 名词 解释 R eg ul a ti on of ge n e e xp r es si on 基 因 的 表达 调 控 ： 不同 发育 阶段 、不 同的 微环 境、 不同 的功 能状 态 下， 选择 性、 程序 性地 在特 定细 胞表 达特 定数 量的 特定 基因 。 O pe ro n 操 纵 子 ： 由功 能相 关的 一组 结构 基因 串联 在一 起， 包括 上游 的调 控区 共同 构成 。 G en e 基 因 ： 是 位 于 染 色 体 上 呈 直 线 的 遗 传 单 位 。 从 分 子 水 平 讲 ， 基 因 是 能 表 达 而 形
2、成 有 功 能 产 物 （ pr o te in/R NA ） 的 DN A 序 列（ 在一 些病 毒内 为 RN A ） 。 包括 ：编 码序 列（ 编码 蛋白 质肽 链 /R NA ） ； 内含 子 ； 启动 子； 调控 序列 （位 于 5 端上 游的 非编 码区 ） ；终 止子 （位 于 3 端下 游的 非编 码区 ） 。 G en om e 基 因 组 ： 细 胞 / 非 细 胞生 物 体 中， 一套 完 整 单 倍 体的 遗 传 物 质 （核 酸 ） 的总 和。 大 小 由 C 值 表 示 。 人 类 基 因 组 ： 22 条 常 染 色 体 ， X, Y 两 条 性 染 色 体 上
3、 全 部 遗 传 物 质 （ 核 基 因 组 ） + 细 胞 质 中 线 粒 体 上 遗 传物 质（ 线粒 体基 因组 ） 。基 因组 的功 能 - - 贮存 和表 达遗 传信 息。 人类 基因 组有 3. 2 10 9 bp 。 C el lu l ar ge n o me 细 胞 基 因 组 ： 对 于细 胞 生物 而 言 ，一 个细 胞所 有不 同 染色 体 上 全部 基 因和 基 因间 的 DN A 总和 称为 细胞 基因 组。 C -V a lu e p ar a do x ： 生 物 单 倍 体 基 因 组 所 含 的 DN A 总 量 被 称 为 C 值 。 以 基 因 组 的
4、碱 基 对 总 数 来 表 示 。 每 种生 物各 有其 特定 的 C 值 范围 ， 不 同物 种的 C 值 相差 很大 。 一 般来 讲 ， 基 因组 越大 ， 生 物进 化程 度越 高 。 C 值和 生物 进化 程度 不一 致的 现象 称为 C 值悖 论。 如： 人基 因组 3. 2 10 9 bp ，肺 鱼长 达 10 12 bp 。 c DN A 文 库 ： 由 来 自 细 胞 或组 织 mR N A 种 类 的 DN A 拷 贝 组 成 的 文库 称 为 cD N A 文 库 。 一 个 理想 的 cD N A 文 库 应 忠实 完 整 地 代 表所 制 备组 织 中所 有 的 mR
5、 N A 分 子 。 cD N A 文 库 的主 要 目 的 是 作为 分 离和 克 隆感 兴 趣 的 单 个重 组 DN A 序列 的来 源。 cD N A 文库 可用 质粒 载体 或噬 菌体 载体 构建 。具 有易 于操 作的 优点 。 基 因 文 库 ： 某 生 物 的 基 因 组 DN A 或 cD N A 片 段 与 适 当 的 载 体 在 体 外 重 组 后 ， 转 化 宿 主 细 胞 ， 在 细 胞 内 进 行 复 制 转 录 翻 译 ， 经 筛 选 后 得 到 大 量 的 阳 性 菌 落 or 噬 菌 体 ， 所 有 菌 落 或 噬 菌 体 的 集 合 合 称 基 因 文 库
6、， 理想 的包 含着 该物 种的 全部 遗传 信息 。 P ro te n om e 蛋 白 质 组 ： 是 蛋白 质 （ pr o t ei n ） 和 基因 组 （ ge nome ） 两 个词 的 组合 词 ， 即 基因 组 表达 的 全 套蛋 白质 。 由于 受到 基因 表达 调控 的影 响 ， 基因 表达 在同 一个 体内 不同 器官 间 ， 甚至 同一 器官 的不 同阶 段 ， 基因 表达 的情 况都 会不 同， 因此 蛋白 质组 是一 个动 态的 概念 。P ro te m ic s 蛋 白 质 组 学 ： 是 以蛋 白 质 组 为 研究 对 象， 从 整体 角 度 ， 分 析细
7、 胞 或 组 织 内蛋 白 质构 成 的动 态变 化和 活动 规律 的科 学。 比 较 蛋 白 质组 学 （ 表 达 蛋 白 质 组 学 ） ： 通 过 比 较 同 一 个 体 肿 瘤 细 胞 与 正 常 细 胞 间 蛋 白 质 在 表 达 数 量 、 表达 位置 、 修饰 状态 上的 差异 ， 发现 与肿 瘤发 病或 发展 有关 的分 子标 记 ， 用来 作为 肿瘤 诊断 的肿 瘤相 关蛋 白 。 基 本技 术平 台 ： 双 向凝 胶电 泳技 术 2- D E （ 首 选蛋 白质 分离 技术 ） ； 质 谱技 术 MS （ 蛋 白质 鉴定 的核 心技 术 ） ；生 物信 息学 。 （新 发展
8、 ：差 异凝 胶电 泳 DI GE ；同 位素 标记 相对 和绝 对定 量 iT RAQ ） 。 肿瘤 蛋白 质组 学有 两种 研究 方法 ：比 较蛋 白质 组学 ；血 清蛋 白质 组学 。 功 能 蛋 白 质 组 学 ： 是 指对 蛋白 质 间 、 蛋 白质 与 DN A/RN A 间 的相 互作 用 的研 究 。 以 细胞 内与 某 个功 能有 关或 某种 条件 下的 一群 蛋白 质为 主要 研究 内容 ， 由此 建立 细胞 内外 信号 传递 的复 杂网 络 。 技术 平台 ： 噬菌 体展 示技 术； 酵母 双杂 交系 统； 蛋白 质芯 片技 术。 R ep et i ti ve s eq
9、 u en ce 重 复 序 列 ： 在基 因组 中多 次反 复出 现的 DN A 序列 ， 按其 出现 频率 可分 低 、 中 （ 10 34 ） 、 高度 （ 10 6 ）重 复序 列。 出现 原因 ： 基因 的多 拷贝 ； 与染 色质 的构 像 , 着丝 点的 形成 有关 ； 参与 表达 调控 ，染 色质 DN A 的 “ 区间 性 ” 。 微 卫 星 ( mi c ro sa te l li te ) ： 遍布 于人 类基 因组 的短 小重 复序 列 ， 每一 重复 序列 为 1b p 6 bp ， 重复 次数 不超 过 60 次， 片段 长度 小于 35 0 bp 。微 卫星 不稳
10、定性 的研 究方 法： PC R 变性 PA G E 银染 ：与 正常 组织 相比 较 , 若某 一等 位基 因条 带消 失或 相对 密度 减少 50 % 以上 , 记为 杂合 性缺 失 LO H ; 若等 位基 因条 带增 多和 大小 有改 变则 记为 MI 。 H ou se - ke ep in g g en e 管 家 基 因 ： 维 持一 般 细 胞正 常 功能 所必 需 的 、 而 且持 续 表 达的 基 因 ， 其 转录 起 始 区域 极少 发生 甲基 化。 生殖 细胞 中， 全部 组织 特异 性的 基因 均不 表达 且被 甲基 化。 R NA e di t in g ： R N
11、A 编 辑 ： RN A 分 子 上 的 一 种 修 饰 。 插 入 、 缺 失、 核 苷 酸 替 换 信 息 改 变 氨 基 酸 序 列不 同的 多种 蛋白 质。 意义 ：扩 大遗 传信 息； 生物 适应 。 R NA s pl ic in g ： RN A 剪 接 ： 将 hn R N A 中 的 内 含子 序 列 切 除， 外 显子 部 分 连 接 起 来 。 组 成 性 剪 接 ： 有 序 地 删 除 mR N A 前 体 中的 每 一 个 内含 子 。 选 择 性 剪 接 (a l t er na ti ve s pl ic in g) : 某 个 内含 子 5 的 供 点可 在 特
12、 定 条件 下与 另一 个内 含子 3 受 点进 行剪 接 ， 从 而同 时删 除这 两个 内含 子及 其中 间的 全部 外显 子或 内含 子 。 来 自 一个 基 因 的 mR N A 前 体 因选 择 性 剪接 而产 生 多 种 mR N A ， 翻 译出 不 同 蛋 白 质， 或形 成 一 组相 似 的 蛋 白 质 家 族 ， 称 为 同 源 蛋 白 质 ( is of or m) 。 脊 椎动 物 中约 5 的基 因 以该 方式 剪 接 ， 各 个同 源 蛋白 质具 有 相同 结 构 或功 能域 ，还 具有 特异 性质 的差 别。表 观 遗 传学 （ ep i g en et ic s
13、 ） ： 是研 究不 涉及 DN A 序列 改变 的基 因表 达和 调控 的可 遗传 修饰 。 三个 层面 调控 基因 表达 ： D NA 修 饰 ： DN A 共价 结合 1 个修 饰基 团， 使具 有相 同序 列的 等位 基因 处于 不同 的修 饰状 态 。 蛋 白 质 修饰 ： 通过 对特 殊蛋 白的 修饰 或改 变蛋 白的 构像 实现 对基 因转 录的 调控 。 非 编 码 RN A 调 控 ： 通过 某些 机制 实现 实现 对基 因表 达的 转录 后调 控， 如 RN A 干扰 。 反 义 RN A ： 一 段含 有与 被调 控 基因 所产 生 mR NA 互 补碱 基序 列的 小
14、分子 RN A 。 根 据其 作用 机制 可 分 3 类 ： I 类 反 义 RN A 直 接作 用于 靶 mR N A 的 SD 序 列和 / 或 部分 编码 区， 直 接抑 制翻 译 ，或 与靶 mR NA 结 合形 成双 链 RN A ， 从而 易被 RN A 酶 II I 降 解； I I 类 反 义 R NA 与 mR N A 非 编码 区结 合 ，引 起其 构 象变 化， 抑 制翻 译； II I 类 反 义 R NA 直接 抑制 靶 mR NA 的转 录。 R NA i ： R NA 干 扰 ： 将 与 mR N A 对 应 的 正 义 RN A 和 反 义 RN A 组 成 的
15、 双 链 RN A （ ds R N A ） 导 入 细 胞 ， 可 以 使 mR N A 发 生 特异 性 降 解 ， 导致 其 相应 的 基因 沉 默 ， 这 种 转 录 后 基 因 沉 默 P TG S 称 为 RN A i 。 RN A 干 扰 包括 起 始 阶段 和效 应阶 段。 RN A i 高效 性。 RN A i 目标 序列 选取 原则 。 C el l s en e sc en ce 细 胞 衰 老 ： 细 胞 衰 老是 正 常 环 境 条件 下发 生 的 功 能减 退 ， 逐 渐 趋 向死 亡 的 现象 。细 胞在 形态 上发 生明 显变 化， 细胞 皱缩 ，质 膜透 性和
16、 脆性 提高 ，线 粒体 数量 减少 ，染 色质 固缩 、断 裂等 。 T el om e re 端 粒 ： 由 几 百 个 简 单 无 信 息 的 重 复 序 列 构 成 的 3 端 凸 出 的 特 出 结 构 。 作 用 ： 1 、 保 护 染 色 体 末端 ； 2 、 防 止染 色体 复制 时末 端丢 失 ， 导 致染 色体 断端 融合 ； 3 、 固 定染 色体 位置 ， 端 粒 DN A 附 着于 核 基质 。 T el om e ra se 端 粒 酶 ： 一 个自 带 引物 的 逆转 录 酶， 由 RN A 和 酶蛋 白 组成 。 含有 1 个 15 9nt 的 RN A 部 件
17、 ， 该部 件含 有与 端粒 d （ TT G G G G ）重 复序 列互 补的 （ AA C C C CA A C ）序 列。 端 粒 、 端 粒 酶 与 衰老 的 关 系 ： 随 着 D N A 的 复制 和细 胞 的不 断 分裂 ， 端 粒的 长度 不 断缩 短 ， 当 缩短 到 影 响 D N A 复 制时 ， 染 色体 失去 稳定 性 ， 细 胞就 停止 分裂 ， 于 是细 胞进 入衰 老死 亡阶 段。 端粒 长度 决定 细 胞 分裂 次数 。 端 粒长 度是 由端 粒酶 决定 的 。 正 常人 体细 胞经 多次 分裂 后 ， 端 粒缩 短 ， 但 如果 在端 粒缩 短的 同 时
18、， 激 活端 粒酶 ， 就 能以 自身 的模 板合 成端 粒 ， 以 弥补 端粒 的缺 损 ， 维 持染 色体 的稳 定性 ， 使 细胞 免于 衰老 死亡 而获 得生 存 ， 发展 成为 “ 永生 细胞 ” 。 M MR ge n e 错 配 修 复 基 因 （ m is m at ch r ep a ir g en e ） ： 属 于 管 家 基 因。 可 查 出并 纠 正 DN A 复 制 及 DN A 损 伤过 程中 未配 对的 碱基 ，保 证复 制和 重组 的精 确性 。 R ep or t er ge n e 报 告 基 因 ： 是 一 种 编码 可 被检 测 的蛋 白 质 或 酶
19、的基 因 。 也 就 是说 ， 是一 个 其 表达 产 物 非 常 容 易 被 鉴 定 的 基 因 。 在 酵 母 双 杂 交 系 统 中 ， BD - X 称 为 诱 饵 ， AD - Y 称 为 猎 物 ， 能 显 示 两 者 相 互 作 用 的基因 称为 报告 基因 ，反 过来 ，可 通过 检测 报告 基因 来判 断猎 物与 诱饵 间有 无相 互作 用。 G 蛋 白 ： 一 般 是 指 与 膜 受 体 偶 联 的 异 三 聚 体 G 蛋 白 。 由 三 种 亚 基 组 成 。 分 子 量 约 10 0kD 。 亚 基 是活 性亚 基 ， 其 上有 一 GT P 结 合位 点 ， 并 具有
20、 GT P 酶 活性 ， 另 外还 有受 体和 酶的 结合 位点 。 具 有特 异性 ， 被 用 作 G 蛋 白 分类 依 据 。 各 种 G 蛋 白 亚 基 都比 较 相 似 。 G 蛋 白 在结 构 上 没有 跨膜 蛋 白 的 特点 ， 它 们 通 过对 其亚 基上 氨基 酸残 基的 酯化 修饰 作用 将 G 蛋白 锚定 在细 胞膜 内侧 。主 要类 型： G s 、 G i 、 Gq 、 G t 。 Gs 和 Gi ：效 应分 子为 AC ，第 二信 使为 cA M P ，靶 分子 为 PK A ； Gq ：效 应分 子为 PL C- ，第 二信 使为 IP 3 DG Ca 2+ ，靶
21、分子 为 PK C ； Gt ：效 应分 子为 cG MP 磷酸 二酯 酶 ，第 二信 使为 cG M P ，靶 分子 为 Na + 通道 关闭 。 S H2 do ma i n ： 由 约 10 0 个 氨基 酸残 基 组成 ，介 导 信号 分子 与 含磷 酸 酪氨 酸蛋 白 分子 的结 合 ，这 种结 合 依 赖 于酪 氨 酸 残 基的 磷 酸 化及 其周 围 的 氨基 酸 残 基 所构 成 的 基 序。 SH 2 识 别 序列 的 磷 酸 化酪 氨 酸 位于 蛋白 质的 C 端， 而 PT B 结 构 域 （类 似于 SH 2 结构 域） 识别 的酪 氨酸 位于 N 端。 S H3 d
22、om a in ： 由 约 50 1 00 个 氨 基 酸 残 基 组 成 ， 介 导信 号 分子 与 富 含 脯 氨 酸 的 蛋 白 分 子 的 结 合 ， 其 亲 和力 与脯 氨酸 残基 及其 邻近 的氨 基酸 残基 所构 成的 基序 序列 有关 。 WW 结 构 域 与 SH 3 很相 似。 J AK （ j an u s k in as e ） ： 是 胞质 内 的一 类 非受 体 酪氨 酸 蛋白 激 酶家 族 ， 已 发现 有 4 个 成员 ： JA K 1 ， JA K2 ， JA K 3 ， TY K2 。 J AK 1 ， JA K 2 ， T YK 2 广 泛 存 在 与 各
23、 种 组 织 和 细 胞 中 ， JA K 3 仅 存 在 于 骨 髓 和 淋 巴 细 胞 中 。 其 结 构 不 含 SH 2 , SH 3 结 构 域 ， C 端 具 有 两 个 相 连 的 激 酶 区 ， N 端 的 几 个 结 构 区 段 无 酶 活 性 ， 可 能 在 受 体 蛋 白 与 JA K 的偶 联中 发挥 作用 。 S TA T ： 信 号 转 导 子 / 转 录 激 活 子 ： 具 有信 号 传递 和 转录 因 子的 双重 功能 。 包 括 ST A T1 STA T6 。 ST A T 的 C 末端 有 SH 2 结构 域， 而且 有一 保守 的酪 氨酸 位点 ，该 位
24、点 被激 活的 JA K 磷酸 化， 使 ST A T 活化 。 C yc li n bo x 周 期 蛋 白 盒 ： 各 类周 期 蛋白 均 含有 一 段约 10 0 个 氨基 酸 的保 守 序列 ， 称 为周 期 蛋白 盒 ， 介 导 周期 蛋 白 与 CD K 结 合。 补 充 ： Cy c l i n 也 含有 降 解 盒 （ d es t ru ct io n b ox ） 或 P ES T （ 脯氨 酸 谷氨 酸 丝 氨 酸 苏氨 酸 ） 序 列 ， 它 可以 通过 定时 降解 或恒 定地 迅速 周转 来调 节这 些蛋 白质 的水 平 ， 起 着 CD K 的 调节 亚基 的作 用
25、。 CD K 为催 化亚 基， cy c l i n 为调 节亚 基， 两者 共同 组成 MP F 。 R es tr i ct io n po i n t ： R 点 ： G 1/ S 检 验 点 。 在 酵 母 中 称 s ta rt 点 ， 在 哺 乳 动 物 中 称 R 点 ， 控 制 细 胞 由 静止 状态 的 G 1 进入 DN A 合成 期， 相关 事件 ： DN A 是否 损伤 ？细 胞外 环境 是否 适宜 ？细 胞体 积是 否足 够大 ？ M PF 促 细 胞 分 裂因 子 ： 存 在于 M 期 细胞 中具 有 促进 间 期细 胞进 行 分裂 的因 子 。 它 能激 活促 使
26、 G2 / M 的 转换。 由 CD K1 和 cy c l in B 组成 。即 MP F = P3 4 cdc2 (C D K 1) +Cyc lin B 。 P ro t ai n c hi p 蛋 白 质 芯 片 ： 是 将大 量 蛋白 质 分子 按照 预 先设 置 的排 列 固定 于 一种 载体 表面 ， 形 成微 阵 列 ， 根 据蛋 白质 分子 间特 异性 结合 的原 理 ， 构 建微 流体 生物 化学 分析 系统 ， 以 实现 对生 物分 子的 准确 、 快 速 、 大 信息 量的 检测 。 荧 光 标 记 是 芯片 采集 中使 用最 多 也是 最成 功的 报告 标 志 。 根
27、 据固 定介 质的 不同 可 分 为 ： 化学 型 （ SE L D I -T O F- MS ） 、 生物 型 （ 抗体 芯片 、 靶蛋 白芯 片 ） 。 根据 片基 材料 的不 同可 分为 ： 膜芯 片 、 玻璃 芯片 、液 相芯 片（ 液相 蛋白 质芯 片） 等。 G en e c hi p 基 因 芯 片 /D N A 芯 片 /D N A 微 阵 列 / 寡 核 苷 酸 阵 列 ： 是 指 采用 原 位 合成 或显 微 打 印 手 段， 固 相 合 成数 以万 计的 DN A 探 针 ， 并 把它 们有 规律 地排 列在 指甲 大小 的芯 片上 ， 产 生二 维 DN A 探 针阵
28、列 ， 然 后与 标记 的样 品进 行杂 交 ， 通过 激光 共聚 焦显 微镜 对芯 片进 行扫 描 ， 检测 杂交 信号 ， 从而 对生 物样 品进 行快 速 、 高 效的 检测 或医 学诊 断。 通过 对正 常人 的标 准图 谱和 患者 的待 测图 谱的 比较 分析 ，可 得出 病变 DN A 信 息 。 这种 基因 芯片 技术 有快 速、 高效 、敏 感、 经济 、平 行化 、自 动化 的特 点。 癌 基 因 ： 细 胞基 因组 中具 有能 使正 常 细胞 发生 恶性 转化 的 基因 ， 称 为癌 基因 。 癌 基因 是细 胞内 控制 细 胞生 长的 基因 ，具 有潜 在的 诱导 细胞
29、恶性 转化 的特 性， 在癌 基因 异常 表达 时， 其产 物可 使细 胞无 限分 裂 。 激 活 机 制 ： 原癌 基因 点突 变； 获得 启动 子与 增强 子； 扩增 ； 移位 或重 排。 抑 癌 基 因 / 抗 癌 基 因 / 肿 瘤 易 感 基 因 / 隐 性 癌 基 因： 是 指 存 在 于 正 常 细 胞 内 的 一 大 类 可 抑 制 细 胞 生 长 并 具有 潜在 抑癌 作用 的基 因。 当这 类基 因发 生突 变、 缺失 或失 活时 ，可 引起 细胞 恶性 转化 而导 致肿 瘤发 生 。 基 因 治 疗 （ ge ne t he r ap y ） ： 是 指 从 DN A 水
30、 平 所 采 取 的 一 切 治 疗 措 施 和 新 技 术 。 例 如 向 有 功 能缺 陷 的 细胞 补充 相应 功能 基因 ， 以纠 正或 补偿 其基 因缺 陷 ； 或采 用特 定方 式关 闭 、 抑制 异常 表达 的基 因从 而达 到 治 疗的 目的 。 途 径 ： 生 殖细 胞基 因治 疗 （ 存 在伦 理学 障碍 ， 不 考虑 人类 ） ； 体 细胞 基因 治疗 （ 主 要是 转基 因治 疗） 。 基 因 干 预 ： 采 用特 定方 式抑 制某 个基 因 表达 ， 或 通过 破坏 某个 基因 而使 之 不表 达 ， 以 达到 治疗 疾病 的 目的 。 基 因 干 预的 手 段 ：
31、反义 RN A ； RN A i ；三 链 DN A ；核 酶裂 解特 异的 靶 mR N A 。 A PU D 细 胞 系 统 ： 是指 能摄 取胺 和胺 前体 并在 细胞 内脱 羧产 生肽 和 / 或胺 类激 素的 内分 泌细 胞的 总称 。 R -T P CR 逆 转 录 P CR （ R ev er se Tr a ns cr ip t io n- Po l ym er as e Ch ai n R ea c ti on ） ： 是 将 RN A 的 逆 转 录 （ RT ） 和 cD N A 的 聚 合 酶 链 式 扩 增 反 应 （ PC R ） 相 结 合 的 技 术 。 以 由
32、 mR N A 逆 转 录 而 来 的 DN A 为 模 板 ， 由 此 产 生 出来 的 DN A 不 带 有 内 含 子 ( 基 因 中不 具 意 义 的 段落 ) ， 常 应用 于 分 子 克隆 技 术 。 RT - P CR 技 术 灵敏 而 且 用 途 广 泛， 可用 于检 测细 胞 / 组织 中基 因表 达水 平， 细胞 中 RN A 病毒 的含 量和 直接 克隆 特定 基因 的 cD N A 序列 等 。 E xp re s s v ec to r 表 达 载 体 ： 为 了使 插 入的 外 源基 因 能够 表 达为 多 肽链 而 设计 的载 体称 为 表达 载 体 。 除 需载
33、 体必 备条 件外 ，还 需要 相应 的启 动子 、核 糖体 结合 位点 、增 强子 、终 止子 等表 达调 控构 件。 基 因工 程载 体 分 克 隆 载 体 、 表 达 载 体 ， 前 者主 要用 于 克隆 和扩 增目 的 基因 序列 ， 为 研究 提供 材 料及 建 立基 因文 库； 后者 主要 用于 高效 表达 目的 基因 以便 获得 大量 蛋白 质产 物。 常 用 的 克隆 载 体 ： 质粒 载体 ： pB R 3 22 - 万用 质粒 ，最 广泛 ； pU C 18 蓝白 色菌 落筛 选。 噬菌 体载 体： 噬菌 体衍 生物 载体 ；粘 粒； 单链 DN A 噬菌 体载 体。 表
34、达 载 体根 据 适 应 的 宿主 细胞 可 分 ： 原 核表 达载 体 ： pG E M - 3Z （ 蓝 白斑 筛选 ） ； pK K 1 77 -3 （ 该 表达 载体 上外 源基 因 表达 可被 IP TG 诱 导去 阻遏 ）； 真 核表 达载 体 ： 病 毒表 达载 体 （ SV 4 0 衍 生载 体 、 RV 载 体 、 Ad V 载 体 、 AA V 载 体 ） ； 酵 母细 胞的 表达 载体 ；昆 虫细 胞表 达载 体（ 常用 昆虫 杆状 V 载体 ）。 B lo tt i ng 印 迹 ： 将 存在 于凝 胶 中的 生物 大 分子 （ DN A , R NA , 蛋 白质 ）
35、 转 移 （ 印 渍 ） 到 固化 介质 上 ， 并 加 以检 验分 析的 技术 。 S ou ther n DN A ； no rthe rn RN A ； we ster n- 蛋白 质。 基 因 重 组 ： 是 指在 体外 用酶 学 方法 将不 同来 源 的 DN A 进 行切 割 、 连 接 ， 组 成一 个新 的 DN A 分 子的 过程 。 又称 DN A 重组 。包 括位 点特 异性 重组 （整 合酶 催化 ） 、同 源重 组两 种类 型。 分 子 克 隆 / 基 因 克 隆 ： 是 按 照 人 的 意 愿 ， 在 体 外 对 DN A 分 子 进 行 重 组 ， 再 将 重 组
36、 分 子 导 入 受 体 细 胞 ， 使 其在 受体 细胞 中扩 增和 繁殖 ， 以 获得 该 DN A 分 子的 大量 拷贝 。 克 隆 ： 无 性繁 殖系 及其 后代 ， 基 因完 全相 同。 基 因 工 程 / 重 组 D N A 技 术 / 基 因 拼 接技 术 ： 是将 不同 来源 的 DN A 片段 与载 体分 子连 接形 成重 组 DN A 分子 ， 再导 入宿 主细 胞内 进行 表达 的操 作。 质 粒 载 体 p la s mi d ： 细菌 染色 体以 外的 ，能 自主 复制 的双 链闭 合环 状 DN A 分子 。能 把外 源目 的基 因送 到宿 主细 胞中 克隆 扩增
37、或克 隆表 达 。 基因 工程 主要 是用 人工 构建 的质 粒 。 总之 ， 质粒 载体 应该 是一 种分 子量较 小、 高拷 贝的 松弛 型质 粒， 且具 有一 个以 上遗 传标 志和 MC S 。广 泛应 用的 ： p BR 3 2, pU C1 8 等。 M CS 多 克 隆 位 点 （ mu lt i pl e c lo ni ng si te ） ： 是 一 段 人 工合 成 的 DN A 序 列 ， 含 有密 集 排 列 的多 种 限 制 性酶 切位 点， 以利 于不 同来 源的 外源 DN A 片段 插入 载体 。 T aq D NA 聚 合 酶 ： 是 一类 耐热 的 DN
38、A 聚 合酶 ，有 5 -3 聚 合酶 活性 、 5 -3 外 切酶 活性 。 多数 Ta q 聚 合 酶缺 乏 3 -5 外 切 活性 。 催 化 的 最 适温 度 范 围 70 75 ， 在 95 以 上 高温 可 半 小 时 不失 活。 最 适 合用 于 PC R 。 限 制 性 内切 酶 ： 一类 由细 菌产 生的 、 能专 一识 别和 切割 双链 DN A 中特 定碱 基序 列的 核酸 内切 酶 。 一般 分为 I, I I ,I I I 型， 基因 工程 中常 用 I I 型 。切 割位 点： 4 8bp 长度 ，具 有 回 文 序 列 的 DN A 片段 。主 要产 生 3 种
39、末 端 ： 5 - 粘性 末端 ； 3 - 粘性 末端 ； 平端 / 钝端 。 应用 ： DN A 重组 、 制备 探针 、 分子 杂交 、 序列 分析 等。 T -A 克 隆 ： Ta q DN A 聚 合酶 具有 末端 转移 酶 的活 性， 可在 新 链的 3 末 端添 加一 个核 苷酸 ， 通常 为 A 。 T- v e ct o r ： 普 通 的克 隆 载 体 切 成线 状， 并 使 之在 3 末 端 含 有一 个 突出 碱 基 T 。 Ta q 酶 扩 增 的产 物 可以 与 T 载体 进行 粘端 互补 链接 ，达 到高 效克 隆的 目的 。 C pG I sl a nd ： 结
40、构 基 因 的 5 端 调 控 区 域 ， Cp G 常 常 以 成 簇 串 联 形 式 存 在 ， 此 区 域 称 Cp G 岛 。 大 小 为 50 0 10 0 0 bp ， 约 56 的 编 码 基 因 含 该 结 构 。 Cp G 岛 的 甲 基 化 阻 碍 转 录 因 子 复 合 体 与 DN A 的 结 合 ， 抑 制 基 因转 录。 核 酸 疫 苗 ( nu cl ei c a ci d v ac ci ne ) / 基 因 疫 苗 (g e n et ic va c ci ne ) ： 是 指 将 含 有 编 码 的 蛋 白 基 因 序 列 的 质 粒 载 体 ， 经 肌 肉
41、 注 射 or 微 弹 轰 击 等 方 法 导 入 宿 主 体 内 ， 通 过 宿 主 细 胞 表 达 抗 原 蛋 白 ， 诱 导 宿 主 细 胞 产生 对该 抗原 蛋白 的免 疫应 答， 以达 到预 防和 治疗 疾病 的目 的。 半 保 留 复制 （ se m i co ns er va ti ve r ep l ic at io n ） ： 一种 双链 脱氧 核糖 核酸 （ DN A ）的 复制 模型 ，其 中亲 代双 链分 离后 ， 每条 单链 均作 为新 链合 成的 模板 。 因此 ， 复制 完成 时将 有两 个子 代 DN A 分子 ， 每个 分子 的 核苷 酸序 列均 与亲 代分
42、子相 同， 这种 复制 方式 称为 半保 留复 制。 转 位 因 子 ： 指 能够 在 1 个 DN A 分 子内 部或 者 2 个 DN A 分 子之 间移 动 的 DN A 片 段 。 细 菌中 则指 可 在质 粒 与 染 色体 间 或 者 质粒 与 质 粒间 移动 的 DN A 片 段 。 包 括 ： 1 、 插 入序 列 IS （ 简 单转 座 子 ， 无其 它 与 转座 功能 无 关的 基因 ） ； 2 、 转 座子 Tn （ 复 杂转 座子 ， 较 大的 可移 动成 分 ， 除 转座 基因 外尚 有其 他基 因如 抗药 基因 ） ； 3 、可 转座 的噬 菌体 （与 IS ,T n
43、 相比 不含 末端 反向 重复 序列 ）。转 座 形 式： 1 、直 接以 DN A 形式 转座 ； 2 、反 转录 因子 转座 （ DN A RN A 逆转 录生 成 cD N A 整合 ）。 转 座 机 制 ： 1 、 非 复 制 性 转 座 / 简 单 转 座 ： 转 座 子 拷 贝 数 不 增 加 ； 2 、 复 制 性 转 座 ： 转 座 子 复 制 ， 一 份 留在 供体 ，一 份整 合在 靶位 点。 反转 录因 子转 座一 定是 复制 性转 座。 转 位 作 用 的 遗 传 效应 ： 1 、 基 因重 组 ； 2 、 基 因突 变 ： 插 入到 基 因内 部 ； 3 、 引 入新
44、 基 因 ； 4 、 染 色体 畸 变。 转 基 因 动 物 （ tr a ns ge ni c a ni m al s ） ： 对 动 物 个 体 来 说 ， 非 自 身的 基 因 成 分 属 于 外 源 基 因 ， 如 果 把 外 源 基因 整合 或 导入 动 物染 色体 基 因中 ， 那 么这 个外 源 基因 就 被称 为 转 基 因 ( tr an sg en e) ( 即 转移 来的 基 因 ) ， 这 种动 物就 是转 基因 动物 。 转 基因 动物 是指 将特 定的 外源 基因 导 入 动 物 受 精卵 或 胚胎 ， 使 之稳 定整 合于 动 物的 染色 体基 因组 并能 遗传
45、给后 代的 一类 动物 。 基 因 家 族 ： 核 苷酸 序列 或编 码产 物具 有 一定 程度 同源 性 ， 且 功能 相关 的一 组基 因 。 同 一祖 先基 因经 过 重复 和突 变进 化而 来 。 成员 可集 中在 同一 染色 体某 区域 ， 形成 基因 簇或 串联 重复 基因 ， 也可 以分 散在 不同 染色 体上 ，编 码一 组功 能紧 密相 关的 蛋白 。 根 据 同 源 程 度 分 类 ： 核 酸序 列相 同 ： 单 纯多 基因 家 族 ， 如 rR N A ， tR N A 。 核 酸序 列高 度 同源 ： 人 类 生 长 激素 基 因 家 族； 编 码 产物 具 有 同 源
46、的 高 度保 守的 功 能 区 ： sr c 癌 基 因家 族 。 编 码 产物 具 有 小段 保 守 基序 ； 基 因超 家族 （ 有 同源 性但 功能 并不 一定 相同 ） ； 假 基因 ： 多 基因 家族 中那 些不 产生 有功 能 基 因 产物 的一 类基 因 。 用 表 示 。 假 基因 的核 苷酸 序列 与相 应的 活性 基因 极为 相 似 ， 即 同源 ， 这 些基 因原 来 也 可能 是有 功能 的基 因 ， 后 来由 于缺 失 、 倒 位 、 点 突变 使其 失去 活性 而形 成无 功能 的基 因 。 它 们或 者不 能 转录 ，或 者转 录后 生成 无功 能的 异常 多肽
47、。 根 据 产 物分 类 ： 编码 RN A 的： rR N A ， tR N A 。 编码 蛋白 质的 ：组 蛋白 ，珠 蛋白 ，生 长激 素 . N ue le s om e 核 小 体 ： 核 小 体 是 染 色 体 的 基 本 结 构 单 位 ，由 DN A 和 组 蛋 白 (h isto ne ） 构 成 ， 4 种 组 蛋 白 H2 A 、 H2 B 、 H3 、 H4 ， 每 一种 组蛋 白各 2 分 子形 成一 个 组 蛋白 八聚 体 ， DN A 分 子盘 绕在 组蛋 白八 聚体 构成 的 核心 结构 外面 ，形 成了 一个 核小 体 。 连接 相邻 2 个核 小体 的 DN
48、 A 分子 上结 合组 蛋白 H1 。 D NA 损 伤 (D N A d am ag e) ： DN A 复 制 过 程 中 发 生 的 DN A 核 苷 酸 序 列 的 改 变。 从 分 子 水 平 看 ， 指 DN A 分 子 碱基 顺 序或 数 目的 改 变 。 DN A 损 伤又 称 基 因 突 变 （ g en e mu t a ti on ） ： 由 于 DN A 分 子中 发 生碱 基 对的 替 换 、 插入 、缺 失等 , 从而 引起 基因 结构 上发 生碱 基对 组成 或排 列顺 序的 改变 。 D NA 多 态 性 ： 在 同 种 生 物 不 同 个 体 的 基 因 组
49、中 ， 常 存 在 一 些 不 影 响 基 因 功能 的 DN A 顺 序 变 异 ， 称 DN A 多态 性 。可 分为 四类 ：等 位基 因间 DN A 位点 多态 性； RF L P ； ST R ； SN P 。D NA 多 态 性 标 记 ： 限 制性 片 段长 度 多态 性 （ re s t ri c ti on fr a g m en t le ngth po l y mo r ph ism, RF LP) ； 短 串联 重复 序列 （ sh o rt ta ndom re peat , ST R ） ；单 核苷 酸多 态性 （ si n g le nu cleo tide po lymo rphi sm, SN P ） 。 R FL P 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 （ 技 术 ） ： 是 指 用同 一 种 限 制 酶消 化 不同 个 体的 DN A 时 ， 会得 到 长 度 各 不 相 同的
