1、ICS 67.080 B 31 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 2867 2018 草莓组织培养育苗技术规程 2018 - 12 - 13 发布 2018 - 12 - 31 实施 河北省 市场监督管理局 发布 DB13/T 2867 2018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北农业大学提出。 本标准起草单位：河北农业大学 。 本标准主要起草人：师校欣 、 杜国强 、 高仪 、 杨丽丽 、王莉、 王燕霞 、刘婉君、李宝鑫、 张莹 。 DB13/T 2867 2018 1 草莓 组织培养育苗 技术规程 1 范围 本标准规定了 草莓 组织培
2、养 快速繁殖 过程中 的术语和定义、 培养基制备、 组培室 消毒灭菌 、 草莓 组培苗生产、组培苗质量 要求 等 方面的技术 规程。 本标准适用于 草莓 组织培养 繁殖苗木 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 28232 臭氧发生器安全与卫生标准 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 NY/T 3032 草莓脱毒种苗生产技术规程 DB13/T 2596 苹果组培苗繁育技术规程 3 术语和
3、定义 LY/T 1882-2010、 NY/T 2306-2013、 DB13/T 2596-2017中 界定的 以及 下列术语和定义适用于本文 件 。 3.1 草莓短缩茎 strawberry crown 草莓植株的 密集着生叶片的 中心生长轴 。 3.2 草莓匍匐茎 strawberry stolon 草莓短缩茎腋芽萌发形成的、匍匐地面生长的当年生地上茎 。 3.3 接种 inoculation 在无菌条件下将 表面灭菌 后的外植体或 继代、生根 组培材料接入培养基的过 程。 3.4 初代培养 explant culture 采集外植体并对其进行表面灭菌后接种，将其置于适宜的培养条件下，启
4、动生长、获得最初的无 菌培养材料的过程。 4 培养基制 备 DB13/T 2867 2018 2 4.1 培养基配方 4.1.1 基本培养基采用 MS 培养基，具体成分见附录 A 中 的表 A.1。 4.1.2 初代及继代培养 培养基 ： MS + 6-BA 0.5 mg/L 2.0 mg/L + IBA 0.02 mg/L 0.5 mg/L（或 NAA 0.02 mg/L 0.1 mg/L） + 蔗糖 25 g/L 30 g/L + 固化剂（能使培养基凝固的最低用量，视固化剂种 类确定）。 4.1.3 生 根培养基： 1/2 MS（ 或 MS） + IBA 0.05 mg/L 0.5 mg/
5、L（或 NAA 0.05 mg/L 0.1 mg/L） + IAA 0.0 mg/L 0.5 mg/L + 蔗糖 15 g/L 25 g/L + 固化剂 （同 4.1.2） 。 4.1.4 不同 草莓 品种组织培养时，培养基中 蔗糖浓度及 生长调节物质的 种类和 浓度可根据以上配方适 当调整 。红颜、甜查理、石莓 7 号、全明星、宝交早生等草莓品种适宜的继代培养基为 MS + 6-BA 0.5 mg/L + IBA 0.15 mg/L + 蔗糖 30 g/L + 固化剂 （同 4.1.2）；生根培养基为 1/2 MS + IBA 0.15 mg/L+ 蔗糖 25 g/L + 固化剂 （同 4.
6、1.2）。 为降低成本，蔗糖可用等量食用白砂糖代替。 4.1.5 为促进继代苗生长，继代培养基中可添加 0.2 mg/L 0.5 mg/L 的 GA3，为促进试管苗生根和根 系发育，生根培养基中可添加 0.5 g/L 3 g/L 活性炭。 4.2 培养基 母液 及培养基 配制 按 DB13/T 2596执行。 5 组培室 消毒灭菌 见 附录 B。 6 草莓 组培苗生产 6.1 无菌接种操作 按 DB13/T 2596执行。 6.2 初代 培养 6.2.1 外植体采集 及处理 选择 品种纯正 、 性状稳定、生长健壮、无病虫 病毒 危害和机械损伤的 植株， 在 5 9月采集约 2 cm 长的匍匐茎
7、顶端，立即带回实验室， 表面用自来水冲洗干净。 6.2.2 外植体 表面灭菌 在超净工作台上去掉外层苞叶，用 2 % 5 %次氯酸钠溶液，灭菌时间 8 min 12 min；或用 0.1 %氯 化汞溶液，灭菌时间 6 min 10 min。灭菌时间视外植体的洁净程度适当调整。灭菌期间多次晃动灭菌 容器，以保证外植体与灭菌剂充分接触。灭菌完成后，外植体用无菌水冲洗 3 5遍。 6.2.3 外植体接种 DB13/T 2867 2018 3 逐层剥去 茎尖 外面的叶片 ，切取 0.5 mm 5 mm茎尖（ 利用茎尖培养 脱除病毒 时， 应剥取 0.2 mm 0.5 mm的茎尖分生组织 ） 接入培养基
8、 ， 每瓶接 1 3个 外植体 ，分布均匀 ， 封好瓶口后，注明品种代号、接 种人员 及 日期等 ， 放 至 培养室培养。 6.3 继代培养 6.3.1 将 初代或继代 培养 诱导出的丛生芽苗 ，去除基部愈伤组织及生长不良的组织，切分成 2 4 株 一簇的小芽丛， 接入继代培养基， 置于 培养室培养。 6.3.2 接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距 1.0 cm 2.0 cm。 6.3.3 培养 3 6 周 ， 分化生长的苗丛 生长缓慢 至 停长 时，及时进行继代 转接 。 6.4 生根培养 将高 度大于 2 cm的继代丛生苗切分 成 单 株接 入生根培养基， 接种数量参见
9、 6.3.2。 6.5 培养条件 外植体 初代 培养、继代 培养 、生根培养各阶段 的 接种材料均放 至 培养室培养，培养条件为，温度： （ 252） ，光照强度： 1500 Lx 2000 Lx，光 /暗 周期： 14 h 16 h / 8 h 10 h，生根阶段可适当增 加光照强度（至 5000 Lx）。 6.6 试管 苗移栽 6.6.1 温室过渡移栽 按 DB13/T 2596执行。 6.6.2 大田移栽 6.6.2.1 选择排灌方便、光照良好、地势平坦、土质疏松肥沃、 2 年内非重茬的地块。 6.6.2.2 将温室 过渡移栽 2 个 多 月 的健壮组培苗 带 基质 土坨移栽至田间 ，栽
10、植时幼苗当 年的短缩茎顶 部要与表土平齐。 6.7 草莓 无病毒苗培育 脱毒方法及病毒检测方法按 NY/T 3032执行 。经病毒检测确认脱除了病毒的材料进行组织培养 繁 殖 可 按照本标准 6.1 6.6执行。 7 组培 种 苗质量 要求 每株具有 4片 以上叶 片，短缩 茎粗 0.5 cm以上 ； 6 cm以上 的不定 根不少于 6条 ； 无病虫危害 症状，无 机械损伤。 DB13/T 2867 2018 4 附 录 A （ 规范 性附录） MS 基本培养基配方 表 A.1 MS 培养基成分及母液配制表 母液种类及倍数 试剂 配方规定量 （ mg/L） 配制 1L 母液 用 量 （ g）
11、大量元素 50 KNO3 1900 95 NH4NO3 1650 82.5 MgSO47H2O 370 18.5 KH2PO4 170 8.5 钙 元素 50 CaCl22H2O 440 22 铁元素 100 Na2EDTA2H2O 37.3 3.73 FeSO47H2O 27.8 2.78 有机物 100 VB1 0.1 0.01 VB6 0.5 0.05 烟酸 0.5 0.05 甘氨酸 2 0.2 肌醇 100 10 微量元素 -1 200 MnSO44H2O 22.3 4.46 ZnSO47H2O 8.6 1.72 H3BO3 6.2 1.24 KI 0.83 0.166 微量元素 -2
12、 500 Na2MoO42H2O 0.25 0.125 CuSO45H2O 0.025 0.0125 CoCl26H2O 0.025 0.0125 DB13/T 2867 2018 5 附 录 B （资料性附录） 组培室消毒灭菌工作细则 B.1 接种室消毒灭菌工作细则 B.1.1 按照每 15 m2配置 1 根 30 w 紫外灯的标准，每天用紫外灯照射杀菌 1 h，每周 用 臭氧 发生器 消 毒 2 3 次 ，臭氧浓度应 20 mg / m3，作用时间应 30 min（按 GB 28232 执行）。 杀菌时切勿进 入，注意安全。 其余按 DB13/T 2596执行。 B.2 培养室消毒灭菌工作细则 B.2.1 每周分别用紫外灯照射杀菌 1 h，每月 臭氧消毒 1 次 （具体要求同 B.1.1）；或使用空气净化 器，注意及时更换滤芯。 其余按 DB13/T 2596执行。 B.3 培养基制备室、洗涤室、灭菌室、工作区域走廊消毒灭菌工作细则 按 DB13/T 2596执行 。 _
