1、ICS 65.020.20B 38 DB14山 西 省 地 方 标 准 DB14/T 20162020党参组培苗生产技术规程 2020 -03- 31发布 2020- 06-01实施山西省市场监督管理局 发 布 DB14/T 20162020 I 目 次前言 . II1 范围 .12 规范性引用文件 .13 术语和定义 .14 设施设备 .15 生产流程 .16 环境消毒 .17 组培苗生产 .2 8 炼苗及移栽 .39 生产档案 .4附录 A（资料性附录） 培养基配制 .5附录 B（资料性附录） MS 培养基配方 .6 DB14/T 20162020 II 前 言本标准按照 GB/T 1.1
2、-2009 给出的规则起草。本标准由山西省农业农村厅提出并监督实施。本标准由山西省农业标准化委员会归口。本标准起草单位：山西省医药与生命科学研究院、平顺县水果蚕桑开发服务中心。本标准主要起草人：李香串、吕鼎豪、王金金、张豆豆、康敏、李晓敏、曲继旭、张文静、董晓丽、刘辉见、陈素萍、秦金山、王金娥。 DB14/T 20162020 1 党参组培苗生产技术规程1 范围 本标准规定了党参组培苗生产的术语和定义、设施设备、生产流程、环境消毒、组培苗生产、炼苗及移栽、生产档案。 本标准适用于党参组培苗的生产。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适
3、用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 29375 马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程GB 50073 洁净厂房设计规范3 术语和定义 下列术语和定义适合于本文件。3.1 党参组培苗以桔梗科党参属植物党参 Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. 的上胚轴为外植体，通过植物组织培养技术获得的种苗。 4 设施设备4.1 生产环境设施和卫生应符合 GB/T 29375、 GB 50073 的规定。4.2 应有完善的组培、炼苗设施设备。5 生产流程 选种 消毒 育苗 愈伤组织培养 继代培养 分化培养 生根培养 炼苗 移栽6
4、 环境消毒6.1 接种室、培养室应保持卫生，定期消毒，每周至少消毒 1 次。按照 40 % 甲醛和高锰酸钾 2:1 的 比例，将 10 ml 40 % 的甲醛溶液倒入高锰酸钾含量为 5 g 的容器内，进行密闭熏蒸， 1 d 后通风。 DB14/T 20162020 2 6.2 每次使用超净工作台前，应提前 20 min 打开紫外灯。接种时关闭紫外灯打开风机，超净工作台面及内壁用 75 % 乙醇擦拭消毒。6.3 操作使用的所有工具，应提前灭菌。镊子、剪刀、解剖刀等工具，每次使用前接触植物材料的部分应灼烧消毒或插入紫外消毒器，避免交叉污染。6.4 发现污染及时清除 。7 组培苗生产7.1 选种选择
5、粒大饱满成熟的党参种子。7.2 消毒 用自来水流动冲洗种子表面尘埃，再用饱和漂白粉水溶液漂洗 15 min。在超净工作台中，将漂洗后的种子放入 10 % 次氯酸钠溶液中浸泡消毒 15 min 20 min，无菌水冲洗 3 次，再用无菌滤纸吸干种子表面水分。7.3 育苗7.3.1 接种在无菌条件下将消毒后的种子接种于 MS+水解乳蛋白 500 g/L 培养基上，培养基配制见附录A 。7.3.2 培养在 25 30 ，光照强度 2 000 lx，光照时间 8 h/d 10 h/d 的无菌条件下培养 10 d 获得幼苗。7.4 愈伤组织培养 7.4.1 接种在无菌条件下将种子出芽后的上胚轴切成 0.
6、1 cm 0.3 cm 的小段，接种于 MS+2,4-D 1.5 mg/L+玉米素 1.0 mg/L 培养基上，培养基配制见附录 A。7.4.2 培养在 25 30 的无菌条件下暗培养 10 d 15 d，可诱导出愈伤组织。7.5 继代培养7.5.1 接种在无菌条件下将分取后的愈伤组织接种于 MS+2,4-D 1.5 mg/L+玉米素 1.0 mg/L 培养基上，培养基配制见附录 A。 7.5.2 培养在 25 30 的无菌条件下暗培养。继代周期为 30 d35 d，连续继代繁殖应控制在 10 代以内。7.6 分化培养 DB14/T 20162020 3 7.6.1 接种在无菌条件下选择生长健
7、康的愈伤组织，接种于 MS+KT 0.5 mg/L+玉米素 0.5 mg/L + NAA 0.1mg/L+ IAA0.1 mg/L 培养基上，培养基配制见附录 A。7.6.2 培养在 25 30 ，光照强度 2 000 lx ，光照时间 8 h/d 10 h/d 的无菌条件下培养 15 d 20 d 后获得不定芽。7.7 生根培养7.7.1 接种在无菌条件下，挑选生长健壮的单芽接种于 1/2 MS+IBA 0.1 mg/L 培养基上，培养基配制见附录 A。 7.7.2 培养在 25 30 ，光照强度 2 000 lx，光照时间 8 h/d10 h/d 的无菌条件下培养 15 d，获得具根、茎、
8、叶的组培苗。8 炼苗及移栽8.1 炼苗8.1.1 封口炼苗每年 4月 5月期间，当组培苗根系长度 3.0 cm 时，将瓶苗移至炼苗棚，封口炼苗 5 d 10 d。8.1.2 开口炼苗 拧开培养瓶瓶盖炼苗 1 d 2 d，期间应注意防雨水。8.2 基质选择微生物少、透气性好、保水能力较强的育苗土为基质，移栽前用多菌灵消毒，按照农药标签使用。8.3 移栽取出组培苗，在清水中洗净根部培养基，晾干后移栽至浇透水的育苗基质中。8.4 管理组培苗移栽后 5 d 10 d ，按照农药标签配制甲基托布津溶液，喷雾 2 次 3 次。移栽 15 d 后，根据小苗长势，降低棚内温度，减少喷水次数，使小苗适应外部环境
9、。定期检查，及时剔除死苗、病株。 8.5 出圃根长 15 cm，根直径 3 mm，生长健壮，外观形态正常，未发生检疫病虫害的种苗可以出圃。9 生产档案 DB14/T 20162020 4 组培苗生产过程要进行详细的记录，建立党参组培育苗生产档案。 DB14/T 20162020 5 AA附 录 A（资料性附录） 培养基配制A.1 MS培养基母液配制MS培养基母液的标准成分配制见附录 B。配制好的母液应于 4 条件下避光保存，保存期不超过 60 d，发现沉淀或浑浊时应立即停止使用。母液容器上应标注名称、浓度、配制日期和配制人。A.2 植物生长调节剂母液配制 一般将植物生长调节剂配制成浓度 1 m
10、g/ml 的母液，于 4 条件下避光保存，保存期不超过 60 d，发现沉淀或浑浊时应立即停止使用。母液容器上应标注名称、浓度、配制日期和配制人。A.3 培养基制备根据培养基制备量，依次量取适量母液混匀，再加入植物生长调节剂和蔗糖，待糖溶解后加入琼脂，最后加水定容，加热使琼脂溶解，并用 0.1 mol/L 的 HCl 或 0.1 mol/L 的 NaOH 调节 PH值至 5.8。分装于试管或三角瓶等容器中，每瓶 10 ml30 ml，用封口膜或瓶盖封口，于 121 条件下高压蒸汽灭菌 20 min，灭菌后置于超净工作台上待用。 DB14/T 20162020 6 BB附 录 B（资料性附录） M
11、S培养基配方表 B.1 MS培养基母液成分一览表母液种类 成分 规定量 mg 扩大倍数 称取量 mg 母液体积 mL 配 1L 培养基吸收量mL编号 种类 1 大量元素 KNO3 1 900 10 19 000 1 000 100NH4NO3 1 650 16 500MgSO47H2O 370 3 700KH2PO4 170 1 700CaCl22H2O 440 10 4 400 1 000 1002 微量元素 MnSO44H2O 22.3 100 2 230 1 000 10ZnSO47H2O 8.60 860H3BO3 6.20 620KI 0.83 83NaMoO 42H2O 0.25 25CuSO45H2O 0.025 2.5CoCl26H2O 0.025 2.53 铁盐 Na2-EDTA 37.30 100 3 730 1 000 10FeSO47H2O 27.80 2 7804 有机元素 甘氨酸 2.00 50 100 500 10盐酸硫胺素 0.10 5盐酸吡哆醇 0.50 25烟酸 0.50 25肌醇 100 5 000注：1LMS 培养基添加蔗糖 30 g，琼脂 7 g。 _
