1、ICS 11.220 B 41 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3609 2019 恩诺沙星注射液中磺胺类药物的测定 高 效液相色谱法 Determination of sulfonamides in enrofloxacin injection by high performance liquid chromatography 2019 - 07 - 23发布 2019 - 08 - 23实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 3609 2019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4 试剂或材料 . 1 5
2、仪器设备 . 1 6 测定步骤 . 2 6.1 供试品溶液的制备 . 2 6.2 对照品溶液的制备 . 2 6.3 仪器参考条件 . 2 6.4 定性定量测定 . 2 7 数据处理 . 3 8 精密度 . 3 附 录 A （资料性附录） 恩诺沙星注射液中磺胺类药物分辨率图 . 4 附 录 B （资料性附录） 恩诺沙星及各磺胺类药物光谱图 . 5 DB37/T 3609 2019 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由山东省市场监督管理局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。 本标准主要起草人：
3、冯涛、李有志、刘道中、薄永恒、章安源、徐红玮。 DB37/T 3609 2019 1 恩诺沙星注射液中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了恩诺沙星注射液中磺胺类药物的高效液相色谱测定方法。 本标准 适用于恩诺沙星注射液中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧 啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑 、磺胺氯吡嗪钠的测定。 本方法检出限磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹噁啉为 1 g/mL；磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶为 2 g/mL；磺胺甲噁唑为 3 g/mL；磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪钠为 5 g/mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是
4、注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 恩诺沙星注射液中添加的磺胺类药物经稀释后用 HPLC分离，二极管阵列检测器检 测，保留时间和紫 外光谱对照定性，外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯；水符合 GB/T 6682一级水的规定。 4.1 乙腈（ C2H3N）：色谱纯。 4.2 三乙胺（ C6H15N）：分析纯。 4.3 磷酸（ H3PO4）：含量 85 %。 4.4 0.025 mol/L磷酸溶液：称取磷酸溶液（ 4.3） 2.
5、88 g（准确至 0.01 g），置 1 000 mL容量瓶中， 用水溶解并稀释至刻度，摇匀，用三乙胺调节 pH值至 3.0，过 0.45 m微孔滤膜备用。 4.5 稀释液：乙腈 +0.025 mol/L磷酸溶液 =17+83。 4.6 磺胺类药物对 照品：磺胺嘧啶对照品（ C10H10N4O2S），含量 99.5 %；磺胺间甲氧嘧啶对照品（ C11H12N4O3S）， 含量 99.4 %；磺胺二甲嘧啶对照品（ C12H14N4O2S），含量 99.2 %；磺胺氯吡嗪钠对照品（ C10H9ClN4O2S）， 含量 100.0 %；磺胺喹噁啉对照品（ C14H11N4O2S），含量 99.6 %
6、；磺胺甲噁唑对照品（ C10H11N3O3S），含 量 99.8 %；磺胺对甲氧嘧啶对照品（ C11H12N4O3S），含量 100.0 %；恩诺沙星对照品（ C19H22FN3O3），含 量 99.5 %；磺胺噻唑对照品（ C9H9N3O2S2），含量 100.0 %。 4.7 有机微孔滤膜： 0.45 m。 5 仪器设备 DB37/T 3609 2019 2 5.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。 5.2 分析天平：感量 0.000 01 g、 0.01 g。 6 测定步骤 6.1 供试品溶液的制备 精密量取恩诺沙星注射液适量（约相当于恩诺沙星 100 mg），置 100 mL容量瓶
7、中，用稀释液（ 4.6） 定容至刻度，摇匀，精密量取上述溶液 5 mL，置 100 mL容量瓶中，用稀释液（ 4.6）定容至刻度，摇匀， 待上机。 6.2 对照品溶液的制备 称取磺胺类药物对照品各 100 mg（精确至 0.000 01 g），置 100 mL容量瓶内，用稀释液溶解并定容 至刻度，摇匀；精密量取 5 mL，置 100 mL容量瓶中，用稀释液（ 4.6）定容至刻度，摇匀，待上机。 6.3 仪器参考条件 6.3.1 液相色谱条件 色谱柱： C18色谱柱， 4.6 mm 250 mm， 3.5 m，或性能相当者。 流动相： A乙腈、 B 0.025 mol/L磷酸溶液，梯度洗脱，梯度
8、洗脱程序见表 1。 流速： 1.0 mL/min。 进样量： 10 L。 柱温： 30 。 表 1 液相色谱梯度洗脱程序 时间（ min） 流动相 A(%) 流动相 B(%) 0 8 92 15 20 80 22 35 65 23 8 92 28 8 92 6.3.2 二极管阵列检测器参考条件 定性采集波长范围： 200 nm 400 nm。 定量波长： 270 nm。 6.4 定性定量测定 6.4.1 定性测定 通过样品溶液色谱图的保留时间与相应对照品溶液的保留时间以及色谱峰的紫外光谱相对照定性。 样品溶液与对照品溶液保留时间的相对偏差不大于 2.5 %，且为单一物质峰（纯度角小于纯度阈值）
9、； 样品溶液色谱峰的紫外光谱与对照溶液色谱峰的紫外光谱一致（匹配角小于匹配阈值），且最大吸收波 长一致（差异不大于 2 nm）则可判断样品中存 在该磺胺类药物。 DB37/T 3609 2019 3 6.4.2 定量测定 取供试品溶液和对照品溶液各 10 l注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，记录 270 nm 波长处的色谱图，外标法定量。 7 数据处理 试样中各磺胺类药物的含量以质量浓度 CX计，数值以微克每毫升（ g/mL）表示，按公式 (1)计算： = S X X SC AC A . (1) 式中： CX 供试品溶液中磺胺类药物浓度，单位为微克每毫升 ( g/mL)； CS 对照品
10、溶液中磺胺类药物浓度，单位为微克每毫升 ( g/mL)； AX 供试品溶液中磺胺类药物峰面积； AS 对照品溶液中磺胺类药物峰面积。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 8 精密度 本方法回收率在 90 % 110 %之间，相对标准偏差 5 %。 DB37/T 3609 2019 4 A A 附 录 A （资料性附录） 恩诺沙星注射液中磺胺类药物分辨率图 图 A.1 阳性添加色谱图 DB37/T 3609 2019 5 B B 附 录 B （资料性附录） 恩诺沙星及各磺胺类药物光谱图 图 B.1 磺胺嘧啶光谱图 图 B.2 磺胺噻唑光谱图 图 B.3 磺胺二甲嘧啶光谱图 图 B.4 磺胺对甲氧嘧啶光谱图 DB37/T 3609 2019 6 图 B.5 磺胺间甲氧嘧啶光谱图 图 B.6 磺胺甲噁唑光谱图 图 B.7 磺 胺氯吡嗪钠光谱图 图 B.8 磺胺喹噁啉钠光谱图 图 B.9 恩诺沙星光谱图 _
