1、ICS 11.220 B 41 DB37 山东省 地方标准 DB 37/T 3610 2019 恩诺沙星注射液中乙酰甲喹、水杨酸的测定 高效液相色谱法 Determination maquindox and salicylic acid in enrofloxacin injection by high performance liquid chromatography 2019 - 07 - 23发布 2019 - 08 - 23实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 3610 2019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4
2、试剂或材料 . 1 5 仪器设备 . 1 6 测定步骤 . 1 6.1 供试品溶液的制备 . 2 6.2 对照品溶液的制备 . 2 6.3 仪器参考条件 . 2 6.4 测定 . 2 7 试验数据处理 . 2 8 检测方法的灵敏度、准确度和精密度 . 3 9 图谱 . 3 DB37/T 3610 2019 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由山东省市场监督管理局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草 单位：山东省兽药质量检验所。 本标准主要起草人：李有志、薄永恒、冯涛、陈玲、徐红玮、张琦、刘霄飞、刘道中。 DB37/T
3、 3610 2019 1 恩诺沙星注射液中乙酰甲喹、水杨酸的测定高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了恩诺沙星注射液中乙酰甲喹、水杨酸的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于恩诺沙星注射液中乙酰甲喹、水杨酸的测定。 本方法乙酰甲喹检出限为 0.25 mg/mL、水杨酸检出限为 0.5 mg/mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新 版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 恩诺沙星注射液中乙酰甲喹、水杨酸经稀释后用高效液相色谱分离
4、，二极管阵列检测器检测，保留 时间和紫外光谱对照定性，外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯；水符合 GB/T 6682一级水的规定。 4.1 乙腈（ C2H3N）：色谱纯。 4.2 三乙胺（ C6H15N）：优级纯。 4.3 甲醇（ CH3OH）：色谱纯。 4.4 磷酸（ H3PO4）：含量 85 %。 4.5 乙酰甲喹（ C11H10N2O3）、水杨酸（ C7H6O3）对照品：纯度 98 %。 4.6 0.025 mol/L磷酸溶液：量取磷酸溶液（ 4.4） 1.70 mL（准确至 0.01 mL），置 1 000 mL容量瓶 中，加水 900 mL，用三乙胺调节
5、pH值至 3.0，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。 4.7 流动相（ 0.025 mol/L磷酸溶液 +乙腈 =85+15）：取 0.025 moL/L磷酸溶液 850 mL（ 4.6）加入乙 腈（ 4.1） 150 mL，摇匀，过 0.22 m有机微孔滤膜。现用现配。 4.8 有机微孔滤膜： 0.22 m。 5 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器。 5.2 分析天平：感量 0.000 01 g。 6 测定步骤 DB37/T 3610 2019 2 6.1 供试品溶液的制备 量取恩诺沙星注射液 1.0 mL，置 50 mL容量瓶中，加甲醇（ 4.3）稀释至刻度，摇匀，精密量取 5
6、 mL 置 50 mL容量瓶中，用流动相（ 4.7）稀释至刻度，摇匀，即得。 6.2 对照品溶液的制备 称乙酰甲喹、水杨酸对照品（ 4.5） 50 mg（准确至 0.01 mg），置 50 mL容量瓶中，加甲醇（ 4.3） 稀释至刻度，摇匀，精密量取 1 mL置 100 mL容量瓶中，用流动相（ 4.7）稀释至刻度，摇匀，即得， 4 保存。 6.3 仪器参考条件 6.3.1 高效液相色谱参考条件 色谱柱： C18色谱柱， 4.6 mm 250 mm， 5 m，或性能相当者； 流动相： 0.025 mol/L磷酸溶液 +乙腈 =85+15（ 4.7）； 流速： 1.0 mL/min； 进样量：
7、10 L； 柱温： 25 。 6.3.2 二极管阵列检测器参考条件 定性采集波长范围： 200 nm 400 nm； 定量波长： 232 nm。 6.4 测定 6.4.1 定性测定 通过样品溶液色谱图的保留时间与相应对照品溶液的保留时间以及色谱峰的紫外光谱相对照定性。 样品溶液与对照品溶液保留时间的相对偏差不大于 2.5 %；样品溶液色谱峰的紫外光谱与对照溶液色谱 峰的紫外光谱一致，则可判断样品 中存在乙酰甲喹、水杨酸。 6.4.2 定量测定 取供试品溶液和对照品溶液各 10 L注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，记录 232 nm 波长处的色谱图，外标法定量。 7 试验数据处理 供试品
8、溶液中乙酰甲喹或水杨酸浓度按（ 1）进行计算： = S X X SC AC A . (1) 式中： CX 供试品溶液中乙酰甲喹或水杨酸浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； CS 对照品溶液中乙酰甲喹或水杨酸浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； AX 供试品溶液中乙酰甲喹或水杨酸峰面积； AS 对照品溶液中乙酰甲喹或水杨酸面积。 DB37/T 3610 2019 3 试样中乙酰甲喹或水杨酸的含量按（ 2）进行计算： 500000= 1XCX V . (2) 式中： X 试样中乙酰甲喹或水杨酸的含量，单位为毫克每毫升（ mg/mL）； CX 供试品溶液中乙酰甲喹或水杨酸浓度，单位为微克每毫升（
9、 g/mL）； V 供试品取样量，单位为毫升（ mL）。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 8 检测方法的灵敏度、准确度和精密度 本方法乙酰甲喹检出限为 0.25 mg/mL、水杨酸检出限为 0.5 mg/mL，回收率在 95 % 105 %之间，在 重复性条件下两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 5 %。 9 图谱 恩诺沙星注射液中添加乙酰甲喹（ 20 g/mL）、水杨酸（ 10 g/mL）的液相色谱图见图 1。 乙酰甲喹 - 7 .3 56 8.6 57 水杨酸 - 1 6. 36 7 AU 0 . 0 0 0 0 . 0 1 0 0 . 0 2 0
10、0 . 0 3 0 0 . 0 4 0 0 . 0 5 0 0 . 0 6 0 0 . 0 7 0 分钟 0 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 0 7 . 5 0 8 . 0 0 8 . 5 0 9 . 0 0 9 . 5 0 1 0 . 0 0 1 0 . 5 0 1 1 . 0 0 1 1 . 5 0 1 2 . 0 0 1 2 . 5 0 1 3 . 0 0 1 3 . 5 0 1 4 . 0
11、 0 1 4 . 5 0 1 5 . 0 0 1 5 . 5 0 1 6 . 0 0 1 6 . 5 0 1 7 . 0 0 1 7 . 5 0 1 8 . 0 0 1 8 . 5 0 1 9 . 0 0 1 9 . 5 0 2 0 . 0 0 图 1 恩诺沙星注射液中添加乙酰甲喹（ 20 g/mL）、水杨酸（ 10 g/mL）的液相色谱图 恩诺沙星注射液空白色谱图见图 2。 8. 73 7 AU 0 . 0 0 0 0 . 0 1 0 0 . 0 2 0 0 . 0 3 0 0 . 0 4 0 0 . 0 5 0 0 . 0 6 0 0 . 0 7 0 分钟 0 . 0 0 0 . 5 0
12、1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 0 7 . 5 0 8 . 0 0 8 . 5 0 9 . 0 0 9 . 5 0 1 0 . 0 0 1 0 . 5 0 1 1 . 0 0 1 1 . 5 0 1 2 . 0 0 1 2 . 5 0 1 3 . 0 0 1 3 . 5 0 1 4 . 0 0 1 4 . 5 0 1 5 . 0 0 1 5 . 5 0 1 6 . 0 0 1 6 . 5 0 1 7 . 0 0 1 7 . 5 0 1 8 . 0 0 1 8 . 5 0 1 9 . 0 0 1 9 . 5 0 2 0 . 0 0 图 2 恩诺沙星注射液空白色谱图 _
