1、ICS 65.020.20 B 05 备案号： DB42 湖北省 地方标准 DB42/T 1257 2017 蓝莓组织培养育苗技术规程 Technical regulations for in vitro propagation of blueberry (报批稿 ) 2017 -04-12发布 2017-06-01实施 湖北省质量技术监督局 发布 DB42/T 1257 2017 I 目 次 前言 . 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 外植体的采集与处理 . 1 4.1 母株的选择 . 1 4.2 外植体采 集 . 1 4.3 外植体的标记与运输 .
2、2 4.4 外植体消毒 . 2 5 蓝莓组织培养 . 2 5.1 初代培养 . 2 5.2 继代培养 . 2 5.3 壮苗培养 . 2 6 生根培养 . 3 6.1 生根设施 . 3 6.2 生根基质 . 3 6.3 扦插时间 . 3 6.4 扦插炼苗 . 3 6.5 扦插 . 3 7 扦插后的管理 . 3 7.1 温度 . 3 7.2 光照 . 3 7.3 湿度 . 3 7.4 施肥 . 3 7.5 病虫害防治 . 3 8 移栽 . 3 9 出圃 . 4 10 包装、标志、运输和贮存 . 4 10.1 包装 . 4 10.2 标志 . 4 10.3 运输 . 4 10.4 贮存 . 4 附录
3、 A（资料性附录） 蓝莓茎段组织培养的培养基配方 . 5 DB42/T 1257 2017 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009 标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构与编写 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖北省农业科学院提出。 本标准由 湖北省农业科学院归口 管理 。 本标准起草单位：湖北省农业科学院果树茶叶研究所、湖北省鑫民生态农业开发有限公司 。 本标准起草人：秦仲麒、 涂俊凡、 李先明、杨夫臣、伍涛、朱红艳、刘政、 叶小伍 。 DB42/T 1257 2017 1 蓝莓组织培养育苗技术规程 1
4、 范围 本标准规 定了蓝莓组织培养育苗外植体的采集与 处理 、 蓝莓组织培养 、 生根培养 、 扦插后的管理 、 移栽 、 出圃 以 及包装、 标志 、 运输 和 贮存 。 本标准适用于湖北省蓝莓 主栽品种 组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（ 所有部分 ） 农药合理使用准则 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 蓝莓组培苗 buleberry tissue
5、cultured plantlets 利用蓝莓芽或带芽茎段作为外植体，采用组织培养技术生产的苗木。 3.2 蓝莓外植体 blueberry explants 用于蓝莓无菌培养 的器官或组织，如一年生嫩枝。 3.3 壮苗培养 strong seedling culture 将增殖的蓝莓丛芽剪成单芽茎段接种到壮苗培养基中 培养 使其长高长粗。 4 外植体的采集 与处理 4.1 母株的选择 选取生长 健壮 和无病虫害的蓝莓作为外植体采集的母株。 4.2 外植体采集 4.2.1 采集时间 4 月 -7 月份晴天 午后或叶片表面露水干后 采集 外植体。 4.2.2 采集方法 DB42/T 1257 20
6、17 2 剪取生长健壮且无病虫害的当年生嫩枝，去掉叶片并 留 1 mm 2 mm叶柄 。 4.3 外植体的标记与运输 采集外植体时，应对每个母株的外植体加标签，标明母株名称、采集地点及采集时间等。采集的外 植体宜当天进行消毒处理。若需要长途运输或储藏 2 d 3 d，宜用保湿材料包扎。 4.4 外植体消毒 用洗洁精将外植体清洗干净，流水冲洗 10 min 20 min。在超净台上，将外植体剪成 4 cm 5 cm的 茎段，用 75%酒精 浸泡 处理 10 s 30 s，无菌水冲洗 3次，再用 0.1% 砷汞 溶液 消毒 6 min 8 min，无菌水 冲洗 5次，无菌滤纸吸干水分。 5 蓝莓组
7、织培养 5.1 初代培养 5.1.1 接种与转接 用无菌的手术刀和镊子将嫩枝均匀分割成 0.5 cm 0.8 cm的小段，接种于无菌的诱导培养基上。首 次接种 5 d 7 d应将外植体转 接到新鲜的初代培养基上， 35 d 45 d嫩芽长出后继代增殖培养。 5.1.2 培养条件 25 2 。黑暗培养 7 d后，转入光照培养。 光照 时间 每天 12 h 16 h， 同一培养层内底部光照强度 20molm-2s -1 40molm-2s -1。 5.2 继代培养 5.2.1 转接 将培养材料 及时 转接到新鲜的增殖培养基中 ， 把 嫩茎剪成 1cm 左右的茎段，插入新鲜的增殖培养基 中。污染、玻
8、璃化的增殖苗均应废弃，其中污染苗应杀菌后再废弃。 5.2.2 培养条件 25 2 。光照 时间 每天 12 h 16 h， 光照强度 20molm-2s -1 40molm-2s -1。 5.2.3 培养周期 培养周期为 40 d 60 d。 5.2.4 增殖材料更新 增殖 材料出现退化， 生长速度慢、苗瘦弱时，应重新采集外植体更新繁殖材料。 5.3 壮苗培养 将继代苗剪成 1.0 cm 1.5 cm茎段，转接到壮苗培养基中。温度 20 30 ，光照强度 30molm-2s -1 40molm-2s -1。培养 50 d 80 d后的 无根试管苗 用于扦插生根。 DB42/T 1257 201
9、7 3 6 生根 培养 6.1 生根设施 具备遮阴、 喷雾及调温的温室或塑料大棚。 6.2 生根基质 为苔藓或草炭与珍珠岩 (体积比为 1:1)的混合物。基质用 0.5 g/L多菌 灵（ 80%可湿性粉剂）溶液或 0.1% 0.2%的高锰酸钾处理， pH 调至 4.5 5.0。苔藓浸泡 后的湿度为紧握有少量水滴出 。 6.3 扦插 时间 扦插 季节宜为春季或深秋。 6.4 扦插 炼苗 扦插 前，将培养瓶苗放在覆盖单层遮阳网的温室，闭瓶炼苗 3 d 7 d， 后再 开口炼苗 1 d 2 d。 6.5 扦插 炼苗结束后，轻轻从培养基中取同种类及浓度生根剂溶液中浸蘸 20 s捞出。穴盘经 0.5 g
10、/L多菌灵 （ 80%可湿性粉剂）溶液喷洒灭菌待用。戴无菌手套将蓝莓芽苗用无菌苔藓包裹后扦插到灭好菌的穴盘 中。 7 扦插 后的管理 7.1 温度 温度保持 15 -30 。温度过低通过空调或地热加热，温度过高通过遮阴、喷雾或 通风系统 降温。 7.2 光照 移植 1个月内，光强控制在 30molm-2s -1 50molm-2s -1。 1个月后光强逐渐增加到 40molm-2s -1 100molm-2s -1。 7.3 湿度 通过喷雾保持小拱棚内空气相对湿度 95%以上，一个月后保持湿度 60% 70%。 扦插后立即 扣小拱 棚保湿，常通风换气。 7.4 施肥 组培苗生根 后每 2周喷施
11、磷酸二氢钾 溶液，稀释浓度 3000倍 。 7.5 病虫害防治 病虫害防 治 除 按照 GB/T 8321（所有部分） 执行 外，还 应符合 农业部现行 有关 农药公告的规定 。 8 移栽 DB42/T 1257 2017 4 扦插 3个月后， 移栽前 控水和增加光照强度培养 7 d 10 d。 移栽 基质为草炭 、 园土 、 河沙 （体积比 为 4： 4： 2） 或草炭 、 园土 、 珍珠岩 （体积比为 4： 4： 2） 的混合土 ， pH5.5。基质 用 0.5g/L的多菌灵（ 80% 可湿性粉剂）溶液喷透备用 。 选择生长健壮 、 无病虫害的生根苗移栽 。 移栽后微喷灌喷 透 水 ， 外
12、罩遮阳网 ， 促成缓苗 。 根据蓝莓 的基芽萌发及枝条生长情况，一般每隔 2周 喷 施 1次 2000-3000倍 磷酸二氢钾 或 复合肥 。 肥料购买 、 贮存 及处理等按照 NY/T 394 的规定执行 。 9 出圃 二年生苗高 40 cm以上，有 3 5个分枝，叶浓绿，具有完整而发达的根系 ， 无检疫性病虫害 。 10 包装、标志 、 运输 和贮存 10.1 包装 组培 苗需整齐摆放在车厢内，防止压折组培苗主干及枝条。 10.2 标志 组培苗应按品种、规格、数量、 育苗 单位 、出 厂 （圃） 日期等做好标记 ， 并备注目的地、联系人 、 注意事项。 10.3 运输 组培苗 用厢式货车运
13、输 ， 并保持通风透气 ；运输途中 避免日晒、雨淋 ； 装车时小心轻放 。 10.4 贮存 组培苗应在当日装运，到达目的地后立即卸车，并置于荫棚或阴凉处，及早定植。若有特殊情况无 法及时定植，应 注意浇水保持组培 苗 湿润。 DB42/T 1257 2017 5 附 录 A （资料性附录） 蓝莓 组织培养 育苗 的 培养基配方 表 A.1 所示了蓝莓组织培养育苗的培养基配方的内容。 表 A.1育苗培养基配方 单位为毫克 每升 成分 诱导培养基 继代培养基 壮苗培养基 大量元素 NH4NO3 400 400 400 MgSO4.7H2O 370 370 370 CaCl2.2H2O 96 96
14、96 Ca(NO3)2.4H2O 556 556 556 KH2PO4 170 170 170 K2SO4 990 990 990 微量元素 H3BO3 6.2 6.2 6.2 MnSO4.H2O 22.3 22.3 22.3 ZnSO4.7H2O 8.6 8.6 8.6 Na2MoO4.2H2O 0.25 0.25 0.25 CuSO4.5H2O 0.25 0.25 0.25 有机 物 盐酸硫胺素 (VB1) 0.5 1.0 0.5 1.0 0.5 1.0 烟酸 (VB3) 0.5 0.5 0.5 盐酸吡哆醇 (VB6) 0.25 0.5 0.25 0.5 0.25 0.5 甘胺酸 2.0 2.0 2.0 蔗糖 30000 30000 30000 肌醇 肌醇 100 100 100 铁盐 FeSO4.7H2O 27.8 27.8 27.8 Na2.EDTA 37.3 37.3 37.3 介质 琼脂 7000 7000 7000 激素 ZT 1.0 5.0 1.0 5.0 0.5 1.0 IBA / 0.05 0.2 / pH 值 5.2 5.4 5.2 5.4 5.2 5.4 _
