1、 ICS 65.020.20 B 36 DB52 贵州省地方标准 DB52/T 14052019 白水生姜脱毒试管苗及原原种生产 技术规程 Technique Regulations for In vitro Virus-free Plantlet and Stock Plant Production ofB aishui Ginger 2019 - 04 - 30 发布 2019 - 11 - 01 实施 贵州省市场监督管理局 发布 DB52/T 14052019 I 目 次 前言 . . II 1 范围 . . 1 2 规范性引用文件 . . 1 3 术语和定义 . . 1 4 脱毒苗培育
2、 . . 1 5 脱毒原原种培育 . . 3 6 质量要求 . . 3 7 收获与贮藏 . . 4 DB52/T 14052019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009标准化工作导则 第一部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 本标准由安顺市农业科学院提出。 本标准由贵州省农业委员会归口。 本标准起草单位：安顺市农业科学院。 本标准主要起草人：吴家丽、牛力立、李用奇、冷云星、赵佐敏、宋生懿、陈红艳、敖艳飞、钟思 玲、严云刚、张领、宋贞富、安星、郭海燕、金超、樊祖立、肖祎。 DB52/T 14052019 1 白水生姜脱毒试管苗及原原种生产技术规程 1 范围 本标准规定了白水生姜脱毒
3、试管苗培育、脱毒原原种培育、收获与贮藏。 本标准适用于白水生姜脱毒试管苗及原原种生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 15618 土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准（试行） NY/T 404 脱毒生姜种姜苗病毒检测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 脱毒苗 In vitro virus-free plantlet 应用茎尖组织培养技术获得、经检测确认不带烟草花叶病毒（TMV
4、）、黄瓜花叶病毒（CMV）的试管 苗。 3.2 原原种（G1） Stock cultivar 用脱毒苗在防虫网室等隔离条件下生产出的符合质量标准的种姜。 4 脱毒苗培育 4.1 茎尖分生组织热处理 精选块大肉厚、皮色黄亮光滑、芽眼饱满、无病虫危害和机械损伤的健壮姜块，在自来水下洗净泥 土，用0.1的高锰酸钾处理15 min，再用0.5%浓度的多菌灵（80%可湿性粉剂）浸泡2 h后捞出晾干，置 于高温灭菌后的湿润珍珠岩中28 催芽，空气相对湿度在80%85%。姜芽萌动3 mm左右后，置于40 45 （8 h/d）温度下热处理30 d。 DB52/T 14052019 2 4.2 脱毒苗离体诱导
5、4.2.1 外植体采集与灭菌 于培养箱中切取热处理后约2 cm长的幼芽，在自来水下冲洗干净后晾干，在超净工作台上用75%酒 精灭菌30 s，再用10%次氯酸钠（NaClO）对幼芽处理15 min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干水分备用。 4.2.2 外植体接种及植株再生 将灭菌后的幼芽于体视显微镜下剥取0.1 mm0.3 mm茎尖分生组织，接种于MS+2.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA培养基上，诱导再生植株。 4.2.3 再生植株病毒检测 对获得的再生植株，经有资质的病毒检测单位进行烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒检测，确认无毒后 再继代扩繁及生根培养。 4.3 脱毒苗继代扩繁 将
6、检测无病毒、长势好的壮苗接种于MS+2.5 mg/L3.0 mg/L 6-BA +0.03 mg/L NAA培养基上增殖培 养。 4.4 脱毒试管苗生根培养 选取株高2 cm3 cm、长势壮的再生脱毒植株，接种于MS+0.1 mg/L NAA +0.5 mg/L IBA培养基上诱 导生根。 4.5 培养条件 以上培养条件为：培养室温度251 ，光照强度2000 LX，光照时间12 h/d16 h/d。 4.6 网室要求 4.6.1 环境要求 4.6.1.1 应选择周边 500 m 内无生姜种植、具有无检疫性病害的地块，建设网室进行原原种（G1）种 姜生产。 4.6.1.2 应建设在气候适宜、天
7、然隔离条件好的区域。 4.6.1.3 周围无污染源，没有易引诱蚜虫的作物。 4.6.1.4 所处地势有利于灌溉和排水。土壤质量应符合 GB 15618 要求；水源充足，能满足生产灌溉要 求，水质符合 GB 5084 要求。 4.6.2 基础设施要求 4.6.2.1 网室要求具有通风、 良好的光照条件， 有防雨和防虫设施。 网室的通风口要装有孔径 0.247 mm （60 目）的防虫网纱。 4.6.2. 2 网室进门处修建一个缓冲间，应随时消毒灭菌。缓冲间应设置消毒设施，可用生石灰或其他 消毒剂消毒。 DB52/T 14052019 3 4.6.3 消毒要求 4.6.3.1 网室及其内部设施应定
8、期消毒。可用硫磺熏蒸、50% 多菌灵可湿性粉剂 800 倍液喷洒或 0.1% 高锰酸钾消毒。防虫网室可用 50%多菌灵可湿性粉剂 800 倍液喷洒。 4.6.3.2 应对所用工具（剪刀、刀片、培养皿等）高温灭菌或 0.5% 高锰酸钾浸泡。 4.6.3.3 工作人员应穿洁净的工作服、用肥皂洗手，工作场所禁止吸烟。 5 脱毒原原种培育 5.1 基质配制及灭菌 根据条件单独应用蛭石或珍珠岩或1份松针土+1份疏松营养土作为基质。于移栽前一个月用1%甲醛 对有防虫网的塑料大棚和基质熏蒸消毒。在苗床上铺一层20 cm 左右的基质。浇透水，待含水量达到 60%70% 时，准备栽苗。 5.2 炼苗 移栽前一周
9、将具备2 cm长、10条根、生长健壮、株高4 cm以上的脱毒苗连同培养瓶移出培养室，于 隔离条件下，温度25 左右的散射光下炼苗5 d7 d。 5.3 移栽 3月下旬至4月下旬地温回升后，在网室塑料大棚，选取炼苗后符合标准的脱毒苗，用消毒镊子轻轻 夹出，洗去根部培养基，按12 cm15 cm20 cm的株行距移栽至大棚中，移栽时使根系与基质充分接触， 及时浇足定根水，加盖小拱棚和遮阳网保温、保湿和遮荫。 5.4 幼苗管理 5.4.1 光照管理 此期遇晴天强光天气及时加盖遮阳网，避免中午强光直射；阴天中午应及时揭开网室和拱棚膜两头 进行通风透气，至试管苗移栽后30 d左右逐步撤除遮阳网。 5.4
10、.2 肥水管理 缓苗后，幼苗长出新根，保持基质湿度70%80%，根据幼苗生长势追施撒可富水溶肥4次5次或喷 施营养液。不定期浇水，结合中耕除草，培土2次3次。 5.4.3 温湿度管理 温、湿度应根据不同生育阶段的需要采取覆盖遮阳网、保温、通风等措施进行调节。 5.4.4 病虫害防控 生产过程中应全程进行病虫草害防治，及时清除网室大棚内外杂草，缓苗后7 d10 d喷一次杀虫杀 菌剂。 6 质量要求 按NY/T 404 规定方法执行。 DB52/T 14052019 4 7 收获与贮藏 7.1 收获前 15 d 内停止浇水。 7.2 霜降前或霜降后 10 d 左右，地上部茎叶开始枯黄时选晴天收获。 7.3 收获后将茎叶掰去，运回室内或地窖贮藏后熟。各地可根据当地传统经验采用适宜的贮藏方法。 贮藏时要轻拿轻放，以免碰伤，影响质量。适宜贮藏温度为 11 13 ，相对湿度 90% 左右。 _ DB52/T 1405-2019
