1、 ICS 11.020 C 50 DB61 陕西省地方标准 DB 61/ T 1001.52015 保健用品微生物限度检查 第 5 部分： 霉菌和酵母菌数测定 Microbial limit examination for healthcare supplies Part 5： Tests for mycete and saccharomycete 2015-12-29 发布 2016-03-01 实施 陕西省质量技术监督局 发布 DB61/T 1001.52015 I 目 次 前言 . . II 1 范围 . . 1 2 规范性引 用文件 . . 1 3 设备和材料 . . 1 4 培养基和
2、试剂 . . 1 5 操作步骤 . . 2 6 结果和报告 . . 2 DB61/T 1001.52015 II 前 言 DB61/T 1001保健用品微生物限度检查分为以下5个部分： 第1部分：总则； 第2部分：菌落总数测定； 第3部分：铜绿假单胞菌检验； 第4部分：金黄色葡萄球菌检验； 第5部分：霉菌和酵母菌数测定。 本部分为DB61/T 1001的第5部分。 DB61/T 998保健用品安全性评价指导原则及试验方法与D B61/T 999保健用品功能学评价指导 原则及试验要求、DB61/T 1000保健用品产品标准编写规范、DB61/T 1001保健用品微生物限度 检查共同构成了陕西省保
3、健用品系列地方标准。 下面列出了这些地方标准的结构： a) DB61/T 998保健用品安全性评价指导原则及试验方法分为以下 6 个部分： 1) 第 1 部分：安全性评价指导原则； 2) 第 2 部分：皮肤急性毒性试验； 3) 第 3 部分：皮肤长期毒性试验； 4) 第 4 部分：皮肤刺激性试验； 5) 第 5 部分：皮肤过敏性试验； 6) 第 6 部分：眼部刺激性试验。 b) DB61/T 999保健用品功能学评价指导原则及试验要求分为以下 16 个部分： 1) 第 1 部分：总则； 2) 第 2 部分：改善微循环类功能学评价动物试验； 3) 第 3 部分：改善微循环类功能学评价人体试验；
4、4) 第 4 部分：乳房保健类功能学评价动物试验； 5) 第 5 部分：乳房保健类功能学评价人体试验； 6) 第 6 部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价动物试验； 7) 第 7 部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价人体试验； 8) 第 8 部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价动物试验； 9) 第 9 部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价人体试验； 10) 第 10 部分：皮肤瘙痒类功能学评价动物试验； 11) 第 11 部分：皮肤瘙痒类功能学评价人体试验； 12) 第 12 部分：妇女卫生保健类功能学评价动物试验； 13) 第 13 部分：妇女卫生保健类功能学评价人体试验； 14) 第
5、14 部分：眼部保健类功能学评价人体试验； 15) 第 15 部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价动物试验； 16) 第 16 部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价人体试验。 c) DB61/T 1000保健用品产品标准编写规范分为以下 8 个部分： 1) 第 1 部分：总则； 2) 第 2 部分：保健贴类产品标准编写规范； DB61/T 1001.52015 III 3) 第 3 部分：眼贴类产品标准编写规范； 4) 第 4 部分：含药芯类产品标准编写规范； 5) 第 5 部分：喷涂类产品标准编写规范； 6) 第 6 部分：清洗液类产品标准编写规范； 7) 第 7 部分：器具类产品标
6、准编写规范； 8) 第 8 部分：功能服装类产品标准编写规范。 本部分根据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本部分由陕西省食品药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：陕西省食品药品监督管理局、陕西省质量技术监督局。 本部分主要起草人：杨晓莉、乔蓉霞、李伟、张扬。 本部分由陕西省食品药品监督管理局负责解释。 本部分首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西省食品药品监督管理局 电话：029-62288000 地址：西安市高新六路56号 邮编：710065 DB61/T 1001.52015 1 保健用品微生物限度检查 第 5 部分：霉菌和酵母菌数测定 1 范围 DB61/T 1001的
7、本部分规定了保健用品中霉菌和酵母菌数的测定方法。 本部分适用于陕西省保健用品中霉菌和酵母菌数的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB61/T 1001.1-2015 保健用品微生物限度检查 第 1 部分:总则 3 设备和材料 对保健用品进行霉菌和酵母菌数的测定时，除应具备微生物实验室常规灭菌和培养设备外，其他设 备和材料应符合以下规定的要求： a) 霉菌培养箱：温度应控制在 28 1； b) 恒温水浴箱：温度应控制在 46 1； c) 冰箱
8、：温度应控制在 25； d) 高压灭菌锅； e) 电子天平：感量为 0.1g； f) 电磁炉； g) 振荡器或均质器； h) 灭菌吸管：容量为 1mL（具 0.01mL 刻度）、10 mL（具 0.1mL 刻度）； i) 丝口瓶或锥形瓶：容量为 250mL、500mL； j) 灭菌培养皿：直径为 90mm； k) pH 计或精密 pH 试纸； l) 放大镜或/和菌落计数器。 4 培养基和试剂 4.1 无菌生理盐水 无菌生理盐水应符合 DB61/T 1001. 1-2015 中 3.6.3 规定的要求。 4.2 孟加拉红培养基 4.2.1 孟加拉红培养基制备材料的种类和量应符合以下要求： a)
9、蛋白胨：5g； b) 葡萄糖：10g； c) 磷酸二氢钾：1g； DB61/T 1001.52015 2 d) 硫酸镁（无水）：0.5g； e) 琼脂：20g； f) 孟加拉红：0.033g； g) 氯霉素：0.1g； h) 蒸馏水：1000mL。 4.2.2 孟加拉红培养基的制备方法应为：将上述各成份（不包含氯霉素）加入蒸馏水中，加热溶化，补 足蒸馏水至 1000mL，分装后，121灭菌 20min。倾注于平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。 5 操作步骤 5.1 样品的稀释 5.1.1 应按照 DB61/T 1001.1-201 5 中 4.4 的规定制备 1:10 样品匀液。 5.
10、1.2 应取 1mL 的 1:10 样品匀液注入含有 9mL 无菌生理盐水的试管中，振摇试管或用吸管反复吹打使 其混合均匀，制成 1:100 样品匀液。 5.1.3 应按照 5.1.2 的规定，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增 1 个稀释剂，换用 1 次 1mL 无菌吸 管。 5.1.4 应根据对样品污染状况的估计， 选择 2 个或 3 个适宜稀释度的样品匀液 （液体样品可包括原液） ， 在进行 10 倍递增稀释时，每个稀释剂分别吸取 1mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度至少做两个平 皿。同时，应分别吸取 1mL 稀释液加入两个平皿内作空白对照。 5.1.5 应及时向平皿倾注 15m
11、L20mL 冷却至 46的孟加拉红琼脂培养基（可将其置于 46 1恒温 水浴箱中保温），转动平皿使其混合均匀。 5.2 培养 应在培养基凝固后，将平板倒置，在 28 1条件下培养 5d，观察并记录。 5.3 菌落计数 应以肉眼观察菌落数，必要时可用放大镜。应根据菌落形态，分别记录各稀释倍数和相应的霉菌和 酵母菌数；菌落计数应以菌落形成单位（colony-forming units，即 CFU）表示。 6 结果和报告 6.1 结果计算 6.1.1 应先计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。 6.1.2 应选取平均菌落数在 10CFU150CFU 之间的平皿，作为霉菌与酵母菌
12、计数范围。 6.1.3 若只有一个稀释度的平均菌落数在 10CFU150CFU 之间， 则应按该稀释度的平均菌落数乘以稀释 倍数计算。 6.1.4 若两个稀释度的平均菌落数均在 10CFU150CFU 之间，则应求出两菌落总数的比值：若比值小于 等于 2，则应计算两个稀释度下平均菌落数的平均值；若比值大于 2，则应计算稀释度较低平皿的平均 菌落数。 6.1.5 若所有平板上的菌落数均大于 150CFU，则应按最高稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 6.1.6 若所有平板上的菌落数均小于 10CFU，则应按最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 DB61/T 1001.52015 3 6.1
13、.7 当所有稀释度的平均菌落数均不在 10CFU150CFU 之间时， 若其中一个稀释度下的平均菌落数大 于 150CFU，而相邻稀释度下的平均菌落数小于 10CFU，则应以更接近 10CFU 或 150CFU 的平均菌落数乘 以相应的稀释倍数计算。 6.1.8 若所有稀释度下的平板均无菌落生长，则以1 乘以最低稀释倍数计算。 6.2 结果报告 6.2.1 若菌落数小于 100CFU，则应按 “ 四舍五入 ” 原则修约，以整数报告结果。 6.2.2 若菌落数大于等于 100CFU，则应按 “ 四舍五入 ” 原则修约，保留 2 位有效数字；也可用 10 的指 数形式来表示，并按 “ 四舍五入 ” 原则修约，保留 2 位有效数字。 6.2.3 若所有平板上均为蔓延菌落而无法计数，则应报告菌落蔓延。 6.2.4 若空白对照平板上有菌落生长，则应判定此次检测结果无效。 6.2.5 应以 CFU/g、毫升（mL）或平方厘米（cm 2 ）为单位报告结果。 6.2.6 若检测结果超过本标准规定的要求，则应选取同批次未开封样品再连续检测两次，并以三次检测 结果的平均值报告结果。 _
