1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中毒死蜱等 五种有机 磷农药 检验 快速溶剂萃取 气相色谱 和 气 相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for five organophosphorus pesticides including chlorpyrifos in biological samples Accelerated solvent extraction GC and GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/
2、T I 前 言 本标准按照 GB/T1.1 2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1） 提出并 归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心 、 上海市公安局 、 司法鉴定科学研究院 、 黑龙江省公安厅。 本标准主要起草人 ： 杜鸿雁、栾玉静、张蕾萍、董颖、王瑞花 、于忠山、何毅、王芳琳、张玉荣、 刘伟、沈敏、张吉林。 GA/T 1 法庭科学 生 物 检材 中 毒死蜱等 五种有机磷农药 检验 快速溶剂萃取 气相色谱 和 气相色谱 -质谱
3、法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物 检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中 毒死蜱、甲基对硫磷、对硫 磷、甲拌磷 和 乐果 的 快速溶剂萃取 气相色谱 （ GC） 定量检验方法 和 气相色谱 -质谱 （ GC-MS） 定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物 检材 中 毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷、乐果 的 快速溶剂萃取气 相色谱（ GC） 法 定量分析 和 快速溶剂萃取 气相色谱 气相色谱 -质谱 （ GC-MS） 法 定性定量分析 。 其他可 疑 样品 中 毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷、乐果 的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引 用文件 下列文件
4、对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件 。 4 原理 以空白样品和 添加 样品 作对照，按平行操作的要求， 用快速溶剂萃取仪（ ASE） 对生物检材进行提 取、净化及 浓缩 ， 采 用 气相色谱 -质谱法定性 定量 ， 气相色谱 法 定量 ，以保留时间 、 质谱 特征离子碎片 峰和 离子 丰度 比 作为定性判断依据； 以 峰面积 为依据
5、 ， 采 用外标法 进行 定量 分析 。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规 定的三级水。 在分析中使用的 试剂 均为分析纯 ，试剂 包括： a) 乙酸乙酯； b) 丙酮； c) 二氯甲烷； d) 甲醇； e) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液 :根据毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷和乐果标准物质的纯 度，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷和乐果标准物质溶 液，置于冰箱中冷冻保存。有 效期 12 个月。或采用市售标准溶液 ； GA/T 2 2） 0.1mg/mL 混合标准工作溶液： 移取 1.0mg/m
6、L 的 毒死蜱、甲基对硫磷、对 硫磷、甲拌磷和 乐果 标准物质溶液各 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存， 有效期 6 个月。实验中所用其它浓度的混合标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用 甲醇稀释得到 。 注： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料 包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 颗粒状硅藻土； d) 中性三氧化二铝（ 100m 200m ）：市售试剂在 350下加热 15h，冷却后备用 。 6 仪器 和设备 仪器 和设备包括 ： a) 气相色谱 -质谱仪 ： 配有电子轰击源（ EI）； b) 气相
7、 色谱 仪：配有火焰光度检测器 （ FPD） ； c) 快速溶剂萃取仪：配 有 10mL 萃取池 ； d) 电子 天平 ； e) 浓缩 器 ； f) 离心机。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 快速溶剂萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 3.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 3.0g于 具盖离心 管中 ， 加 2g硅藻土搅拌均匀 ， 转移 至 底部装有 2g中性三氧化二铝的萃取池中，按照 7.1.2.1.1条件进行操 作。萃取完毕后 ， 转移 萃取液 至 试管中 ， 8000r/min离心 5min，取 有机相 ， 置于浓缩器上 40浓
8、缩至干， 残留物用甲醇 100L溶解，作为检 材样品提取 液供 仪器 分析。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份，一份作为空白样品，一 份添加 毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷和乐果 标准物质，作为添加样品 （添加样品浓度为 0.5g /mL） ， 与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.1.2 仪器 检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 快速溶剂萃取 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际 情况 进行调整 : GA/T 3 a) 系统压力： 1500psi； b) 萃取
9、池 温度： 100； c) 静态萃取时间： 5min； d) 静态萃取次数： 2 次； e) 溶剂冲洗体积 ： 萃取池体 积的 60%； f) 氮气吹扫时间： 90s； g) 萃取溶剂体积比：乙酸乙酯 /丙酮 混合溶剂 (体积比 1:1)或二氯甲烷 /丙酮 混合溶剂 (体积比 1:1)。 7.1.2.1.2 气相色谱 -质谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际 情况 进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS 柱 （ 30mm0.25mm0.25m）或等效色谱柱； 注： DB-5MS 柱 是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示
10、对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 80保持 2min，以 30/min 速 率升至 280，保持 15min； c) 进样口温度： 280； d) 载气：高纯 氦 ； e) 柱流速 ： 1.0mL/min； f) 进样方式：分流进样，分流比： 10:1； g) 离子源温度： 200； h) 扫描方式： 全扫描（ SCAN），质量扫描范围 40amu550amu； i) 溶剂延迟： 3min。 j) 质谱特征离子碎片峰见表 1。 表 1 检测目标物的 质谱特征离子碎片峰 检测目标物名称 质谱特征 离子碎片 峰 甲拌磷 m/z 75*、
11、m/z 260、 m/z 121 乐果 m/z 87*、 m/z 125、 m/z 229 甲基对硫磷 m/z 109*、 m/z 263、 m/z 125 毒死蜱 m/z 351*、 m/z 314、 m/z 286 对硫磷 m/z 291*、 m/z 263、 m/z 139 注 ： *为定量离子 。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液 及 标准工作溶液，按 7.1.2.1 的 分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 3.0mL， 或称取铰碎的 肝脏等 固体检材样品 1.0g 3.0g两份 ， 按 7.1.1进
12、行操作。 另取等量 相似 基质的空白样品 三 份， 其中 两份分别添加 毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷、乐 果 标准 物质 作为添加样品 （ 添加样品中目标物 含量应为检材 样品 中目标物含量的 (100 50)%），另一份 作为空白样品，与检材 样品平行 操作 ， 得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 GA/T 4 7.2.2 仪器 检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 快速 溶剂萃取条件 按 7.1.2.1.1规定的条件分析。 7.2.2.1.2 气相色谱 -质谱条件 按 7.1.2.1.2规定的条件分析。 7.2.2.1.3 气相色谱条件 以下为参考条件，可
13、根据不同品牌仪器和不同样品 等 实际情况进行调整： a) 检测器：火焰光度检测器（ FPD）； b) 色谱柱： DB-5柱（ 30mm 0.25mm 0.25m）或等效色谱柱； 注： DB-5柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 80保持 1min，以 8 /min速率升至 280，保持 1min； d) 进样口温度： 280； e) 检测器温度： 300； f) 载气：高纯氮； g) 柱流速： 1.0mL/min； h) 进样方式：分流进样，分流比：
14、 10:1。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液 及 标准工作溶液，按 7.1.2.1的 分析条件每个 样品进样分析 2 3次。 若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.2.3 计算 7.2.2.3.1 计算 含量 记录各样品提取液平行进样 2 3 次 的 目标物保留时间和峰面积值 （用 定量离子 的峰面积进行计 算） ，按公式（ 1）计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； M
15、添 添加样品中 目标物 添加量，单位为微克 （ g ） ； V 样 检材 样品 的 定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平 均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（ 2）计算相对相差： GA/T 5 %10021 = X XXRD . (2) 式中： RD相对相差 ， 用百分比 （ %）表示 ； X1、 X2两个检材 样品 平行定量测定的含量数值； X 两个检材 样品
16、平行定量测定含量的平均值。 8.1 结果 评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳 性结果 评价 在相同条件下进行 样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液 一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 2 规定的范围，空白样品无干扰， 则可判断检材样品中检出目标物。 相关实验数据和谱图 参见附录 A。 表 2 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许 相对偏差 10 15 20% 50%
17、 8.1.2 阴 性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱 峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.1 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验。 GA/T 6 附 录 A （资料性附录） 相关 实验数据和 图谱 A.1 五种有机磷农药血液中回收率和检出限 五 种有机磷农药在血液中的回收率见表 A.1， 本 方法检出限 为 100ng/ mL（ g） 。 表 A.1 5 种 有 机磷农药
18、在血液中的回收 率 有机磷农药名称 操作方法 回收率 毒死蜱 1mL 血液添加 1g ， 乙酸乙酯 丙酮 1 1 提取 1mL 血液添加 1g ， 二氯甲烷 丙酮 1 1 提取 95.7% 88.7% 甲基对硫磷 1mL 血液添加 1g ， 乙酸乙酯 丙酮 1 1 提取 1mL 血液添加 1g ， 二氯甲烷 丙酮 1 1 提取 82.8% 79.7% 对硫磷 1mL 血液添加 1g ， 乙酸乙酯 丙酮 1 1 提取 1mL 血液添加 1g ， 二氯甲烷 丙酮 1 1 提取 79.4% 76.3% 甲拌磷 1mL 血液添加 1g ， 乙酸乙酯 丙 酮 1 1 提取 1mL 血液添加 1g ， 二
19、氯甲烷 丙酮 1 1 提取 87.3% 85.7% 乐果 1mL 血液添加 1g ， 乙酸乙酯 丙酮 1 1 提取 1mL 血液添加 1g ， 二氯甲烷 丙酮 1 1 提取 78.0% 74.2% A.2 五种有机磷农药总离子流 图 。 五 种有机磷农药的总离子流图见图 A.1。 图 A.1 五 种有机磷农药的总离子流图 A.3 五种有机磷农药 的 质谱图 五 种有机磷农药质谱图见图 A.2 A.6。 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 450
20、.0 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 (x10,000) 75 47 12197 260231129 153 203175 图 A.2 甲拌磷 质谱图 GA/T 7 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 450.0 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 (x10,000) 87 47 63 125 104 229157 图 A.3 乐果 质谱图 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 20
21、0.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 450.0 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 (x10,000) 109 125 7947 263 93 200 246155 216172 图 A.4 甲基对硫磷 质谱图 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 (x10,000) 97 197 314 258 65 208 286125 10947 169 244 图 A.5 毒死蜱 质谱图 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 450.0 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 (x10,000) 97 109 139 291 65 155 45 186 235 263172 图 A.6 对硫磷 质谱图 _
