1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1594 2019 代替 SN/T 15942005 出口茶叶及代用茶中噻嗪酮残留量的测定 Determination of buprofezin residue in tea and herbal tea for export 2019-12-27发布 2020-07-01 实施 ICS 67.050 C 53 中华人民共和国海关总署发 布 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 1594 2019 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准代替 SN/T 15942005进出口茶叶
2、中噻嗪酮残留量检验方法 气相色谱法。 本标准与 SN/T 15942005 的主要差异如下： 修改标准名称； 扩大标准适用范围； 修改气相色谱法前处理及仪器条件； 增加液相色谱 - 质谱 / 质谱法。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国杭州海关。 本标准主要起草人： 朱晓雨，黄超群，崔晓美，楼成杰，吴娟，陈丽，蒋沁婷，方群。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T 15942005。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 1 SN/T 1594 2019 出口茶叶
3、及代用茶中噻嗪酮残留量的测定 1 范围 本标准规定了出口茶叶及代用茶中噻嗪酮残留量测定的液相色谱 - 质谱 / 质谱和气相色谱检测 方法。 本标准适用于出口绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶、牛蒡茶、菊花茶、杜仲茶和麦茶中噻嗪酮残 留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于 本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 第一法 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 3方法提要 试样中噻嗪酮经丙酮、水提取，用正己烷抽提，经弗罗里硅土柱净化后，液相色谱 - 质
4、谱 / 质 谱法测定，外标法定量。 4试剂和材料 除特殊注明外，所用试剂均为色谱纯，所用水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1丙酮。 4.2正己烷。 4.3无水乙醚。 4.4甲醇。 4.5氯化钠：分析纯。 4.6乙酸铵。 4.7甲酸。 4.8正己烷 - 乙醚（6+4， V/V）：取 600 mL 正己烷和 400 mL 无水乙醚混合均匀。 4.9乙酸铵 - 甲酸混合溶液：准确称取 0.38 g 乙酸铵用水溶解，加入 1.0 mL 甲酸，用水定容至 1 000 mL。 4.10标准物质：噻嗪酮，C 16 H 23 N 3 OS，CAS 登录号 69327-76-0，纯度大于 99.
5、0%。 4.11标准储备液：准确称取适量标准物质（4.10），用甲醇溶解并定容，配制成溶液浓度为 200 g/mL 的标准储备液，于 0 4 储存，有效期 6 个月。 4.12标准中间液：准确移取标准储备液（4.11）0.50 mL，用甲醇稀释并定容至 10 mL，配制成溶 液浓度为 10 g/mL 的标准中间液。准确移取 10 g/mL 的标准中间液 1.0 mL，用甲醇稀释并定容至 10 mL，配制成溶液浓度为 1.0 g/mL 的标准中间液。 以正式出版文本为准 2 SN/T 1594 2019 4.13标准工作液：准确移取 1.0 g/mL 的标准中间液（4.12）1.0 mL，用甲醇
6、稀释并定容至 50 mL， 配制成溶液浓度为 20 ng/mL 的标准工作液。分别准确移取 20 ng/mL 的标准工作液 0.25 mL、0.50 mL、 1.0 mL、2.5 mL 和 5.0 mL，用甲醇稀释并定容至 10 mL，配制成溶液浓度为 0.50ng/mL、1.0ng/mL、 2.0ng/mL、5.0ng/mL 和 10 ng/mL 的标准工作液，于 0 4 储存，有效期 3 个月。 4.14弗罗里硅土固相萃取柱：1 g 或相当者，使用前用 5 mL 正己烷预洗。 4.15微孔滤膜： 0.45 m，有机相。 5仪器和设备 5.1液相色谱 - 质谱 / 质谱仪：配有电喷雾离子源。
7、 5.2分析天平：感量 0.000 1 g 和 0.01 g。 5.3涡旋混合器。 5.4均质器。 5.5离心机：最大转速 4 000 r/min。 5.6旋转蒸发仪。 5.7固相萃取仪。 6试样制备与保存 6.1试样制备 取代表性样品约 500 g，用粉碎机粉碎并通过 2.0 mm 圆孔筛，混匀，装入洁净的盛样容器中， 密封并标明标记。 6.2试样保存 试样于室温下保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7测定步骤 7.1提取 准确称取 2 g 试样（精确至 0.01 g），置于 50 mL 塑料离心管中，加入 10 mL 水，浸泡 2 h，再 加入 20 mL
8、 丙酮，在均质器中均质 2 min，加入 4 g 氯化钠，再加入 15 mL 正己烷，涡旋提取 1 min， 以 4 000 r/min 离心 5 min，将上清液收集于浓缩瓶中，残渣再加入 15 mL 正己烷，重复上述操作， 合并提取液，在 45 以下水浴减压浓缩至近干，待净化。 7.2净化 准确移取 10 mL 正己烷溶解残渣。取 1.0 mL 转移至弗罗里硅土固相萃取柱（4.14）内。再用 10 mL 正己烷 - 乙醚混合溶液（4.8）洗脱，收集全部洗脱液，45 以下水浴减压浓缩至干，加入 2.0 mL 甲醇溶解定容，经滤膜过滤，供液相色谱 - 质谱 / 质谱仪测定。 7.3测定 7.3
9、.1液相色谱 - 质谱 / 质谱条件 液相色谱 - 质谱 / 质谱条件如下： 以正式出版文本为准 3 SN/T 1594 2019 a）色谱柱： C 18 ， 100 mm2.1mm（内径），3.5 m，或相当者； b）流动相：乙酸铵 - 甲酸混合溶液（4.9）和甲醇，梯度洗脱程序见表 1 ； 表 1液相色谱 - 质谱 / 质谱法梯度洗脱程序 时间 /min 乙酸铵 - 甲酸混合溶液 / % 甲醇 /% 0.00 70 30 3.00 70 30 4.00 20 80 11.00 20 80 12.00 70 30 15.00 70 30 7.3.2定量测定 按 7.3.1 仪器条件测定标准工
10、作溶液和样液，以外标曲线法计算样液中的噻嗪酮含量。如果样 液中噻嗪酮的含量超出标准曲线范围，应用甲醇稀释后再进行分析。在上述条件下，噻嗪酮的参考 保留时间约为 10.0 min。标准溶液多反应监测色谱图参见附录 B 中图 B.1。 7.3.3定性测定 在上述液相色谱 - 质谱 / 质谱条件下，如果样液与标准工作液中待测物质色谱峰相对保留时间 偏差在 2.5范围内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对 丰度允许误差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。 表 2 相对离子丰度最大容许误差 相对离子丰度（基峰）% 50 2050 1020 10 最大容
11、许误差 % 20 25 30 50 7.4空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 8结果计算和表述 用色谱数据处理机或按公式（1）计算试样中噻嗪酮的残留量： 1 000 1 000 cV X m = （1） 式中： X 试样中噻嗪酮的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c 从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 以正式出版文本为准 4 SN/T 1594 2019 m 最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）； 计算结果应扣除空白值。 9定量限和回收率 9.1定量限 本方法对于绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶、
12、牛蒡茶、菊花茶、杜仲茶和麦茶中噻嗪酮的定量限 均为 0.005 mg/kg。 9.2回收率 本方法的添加水平和回收率数据见表 3。 表 3 茶叶中噻嗪酮添加水平及回收率数据 添加水平 mg/kg 回收率范围 /% 绿茶 红茶 普洱茶 乌龙茶 牛蒡茶 菊花茶 杜仲茶 麦茶 0.005 84104 7486 92106 76102 86104 90104 8698 84106 0.01 7689 7397 82108 86101 7292 82101 8297 7098 0.05 8094 92102 80104 84110 7694 88104 80108 88104 0.20 91102 86
13、107 8899 83105 90104 83103 8490 92107 30 8096 7491 84100 8596 7492 7690 92104 7798 第二法 气相色谱法 10方法提要 试样中噻嗪酮经丙酮、水提取，用正己烷抽提，经弗罗里硅土柱净化后，用配有氮磷检测器的 气相色谱仪测定，外标法定量。 11试剂和材料 除特殊注明外，所用试剂均为色谱纯，所用水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 11.1丙酮。 11.2正己烷。 11.3无水乙醚。 11.4氯化钠：分析纯； 11.5正己烷 - 乙醚（7+3， V/V）：取 700 mL 正己烷和 300 mL 无水乙醚混合均匀。
14、 11.6标准物质：噻嗪酮，C 16 H 23 N 3 OS，CAS 登录号 69327-76-0，纯度大于 99.0%。 11.7标准储备液：准确称取适量标准物质（11.6），用正己烷溶解并定容，配制成溶液浓度为 200 g/mL 的标准储备液，于 0 4 储存，有效期 6 个月。 11.8标准中间液：准确移取标准储备液（11.7）0.50 mL，用正己烷稀释并定容至 10 mL，配制成 以正式出版文本为准 5 SN/T 1594 2019 溶液浓度为 10 g/mL 的标准中间液。 11.9标准工作液：准确移取标准中间液（11.8）1.0 mL，用正己烷稀释并定容至 50 mL，配制成 溶
15、液浓度为 0.20 g/mL 的标准工作液。分别准确移取 0.20 g/mL 的标准工作液 0.50 mL、1.0 mL、 2.5 mL和5.0 mL，用正己烷稀释并定容至10 mL，配制成溶液浓度为0.010 g/mL、0.020 g/mL、 0.050g/mL 和 0.10 g/mL 的标准工作液，于 0 4 储存，有效期 3 个月。 11.10弗罗里硅土固相萃取柱：5 g 或相当者，使用前用 10 mL 正己烷预洗。 12仪器和设备 除特殊注明外，所用仪器和设备同 5.2 5.7。 12.1气相色谱仪：配有氮磷检测器。 13试样制备与保存 试样制备与保存同 6.1 和 6.2。 14测定
16、步骤 14.1提取 提取同 7.1。 14.2净化 用 2 mL 正己烷溶解残渣，将溶液转移至弗罗里硅土柱（11.10）内，再用 2 mL 正己烷洗涤残 渣合并上柱。用 20 mL 正己烷 - 乙醚混合溶液（11.5）洗脱，收集全部洗脱液，45 以下水浴减 压浓缩至干，加入 2.0 mL 正己烷溶解，供气相色谱仪测定。 14.3测定 14.3.1气相色谱条件 气相色谱条件如下： a）色谱柱：SPB-50，30 m0.25 mm0.25 m，或相当者； b）柱温：60 保持 1 min，以 15 /min 的速率升温至 150 ，保持 1 min，随后以 10 /min 的速率升温至 280 ，
17、保持 15 min ； c）进样口温度：250 ； d）载气和尾吹气：氮气，纯度 99.999%，流量 3.0 mL/min ；尾吹气流量 10 mL/min ；空气 流量 60 mL/min ；氢气流量 3.0 mL/min ； e）进样量：2 L； f）进样方式：不分流进样； g）检测器温度：325 ； h）开阀时间：0.75 min ； i）检测器铷珠的电压和灵敏度应调整至最佳状态，为保护铷珠，进样 5 min 内关闭检测器。 以正式出版文本为准 6 SN/T 1594 2019 14.3.2色谱测定 按 14.3.1 仪器条件测定标准工作溶液和样液，以外标曲线法计算样液中的噻嗪酮含量。
18、如果样 液中噻嗪酮的含量超出标准曲线范围，应用正己烷稀释后再进行分析。在上述条件下，噻嗪酮的参 考保留时间约为 21.2 min。标准溶液色谱图参见附录 B 中图 B.2。 14.4空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 15结果计算和表述 同 8。 16定量限和回收率 16.1定量限 本方法对于绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶、牛蒡茶、菊花茶、杜仲茶和麦茶中噻嗪酮的定量限 均为 0.01 mg/kg。 16.2回收率 本方法的添加水平和回收率数据见表 4。 表 4 茶叶中噻嗪酮添加水平及回收率数据 添加水平 mg/kg 回收率范围 /% 绿茶 红茶 普洱茶 乌龙茶 牛蒡茶 菊花茶 杜仲茶
19、麦茶 0.01 7290 7493 81100 8697 8695 83101 83100 8398 0.05 8694 86104 8498 92110 80108 8698 88104 8098 0.20 90104 86101 90103 83106 82100 89107 92105 89106 30 7291 8995 91103 8598 87101 7796 7396 8797 以正式出版文本为准 7 SN/T 1594 2019 附 录 A （资料性附录） a 液相色谱 - 质谱 / 质谱法仪器参数与监测离子 1） A.1 液相色谱 - 质谱 / 质谱法仪器参数如下： a）电喷
20、雾电压：3 500 V ； b）离子源温度：300 ； c）鞘气压力：50 Arb ； d）辅助气压力：20 Arb ； e）毛细管温度：270 ； f）碰撞气压力：1.5 mTorr ； g）鞘气、辅助气均为高纯氮气；碰撞气为高纯氩气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到 检测要求； h）监测离子对信息、碰撞能量等参数见表 A.1。 表 A.1 多反应监测离子对和碰撞能量 化合物 母离子 m/z 子离子 m/z 碰撞能量（V） 噻嗪酮 306.0 201.1* 10 106.0 32 注：带 * 为定量离子 1）非商业性声明：附录 A 所列参考质谱条件是在 TSQ Quantum ULTRA
21、AM 液质联用仪上完成，此处列出试验 用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。 以正式出版文本为准 8 SN/T 1594 2019 附 录 B （资料性附录） 气相色谱法和液相色谱 - 质谱 / 质谱法标准溶液色谱图 图 B.1 噻嗪酮标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图（0.50 ng/mL） 图 B.2 噻嗪酮标准溶液的气相色谱图（0.01 g/mL） 以正式出版文本为准 9 SN/T 1594 2019 Foreword This standard was drafted in accordance with the GB/T 1.1200
22、9. This standard is the revision of SN/T 15942005Inspection of buprofezin residue in tea for import and export-Gas chromatographic method. The differences between this standard and SN/T 1594-2005 are as follows ： Changed the name of standard ； Extended the scope ； Amended the pretreatment and instru
23、ment condition of GC method ； Added LC-MS/MS method. Please pay attention that some contents in this standard may refer to patents. The institution doesnnullt take on the responsibility to identify these patents. This standard is proposed by and is under the charge of General Administration of Custo
24、ms of the Peoplenulls Republic of China. This standard was drafted by Hangzhou Customs District of the Peoplenulls Republic of China. The main drafters of this standard are Zhu Xiaoyu， Huang Chaoqun， Cui Xiaomei， Lou Chengjie， Wu Juan， Chen Li， Jiang Qinting， Fang Qun. This standard replaces the sta
25、ndard previous published as ： SN/T 15942005. 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 11 SN/T 1594 2019 Determination of buprofezin residue in tea and herbal tea for export 1 Scope This standard specifies the determination of buprofezin residue in tea and herbal tea by liquid chromatography- tandem mass spectrum and gas
26、 chromatography. This standard is applicable to the determination of buprofezin in green tea， black tea， pu nuller tea， oolong tea， burdock tea， chrysanthemum tea， eucommiae tea and barley tea for export. 2 Normative references The following normative documents contain provisions which， through refe
27、rence in this text， constitute provisions of this standard. For dated references， subsequent amendments to， or revisions of any of these publications do not apply. However parties to agreements based on this standard are encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions
28、of the normative documents indicated below. For undated references， the latest edition of the normative document referred to applies. GB/T 6682 Water for analytical laboratory usespecification and test methods Method LC-MS/MS Method 3 Principle The test samples are extracted with water-acetone. The
29、extract is partitioned with hexane， cleaned up by florisil solid phase and detected by liquid chromatography-tandem mass spectrometry using external standard method. 4 Reagents and materials Unless otherwise specified， all the reagents used should be chromatographic pure， “water” is distilled water.
30、 4.1 Acetone. 4.2 Hexane. 4.3 Diethyl ether. 4.4 Methanol. 4.5 Sodium chloride ： analytical grade. 4.6 Ammonium acetate. 4.7 Formic acid. 4.8 Hexane-diethyl ether （6+4，V/V）： Volume 600 mL hexane， then add 400 mL diethyl ether， mix them. 4.9 Ammonium acetate-formic acid mixed solution ： Accurately we
31、igh 0.38 g，of ammonium acetate， dissolved with water， then added 1.0 mL of formic acid and diluted to 1000 mL with water. 以正式出版文本为准 12 SN/T 1594 2019 4.10 Standard ： Buprofezin， C 16 H 23 N 3 OS， CAS NO.69327-76-0， Purity 99.0%. 4.11 Standard stock solution ： Accurately weigh appropriate standard（4.
32、10）， dissolved with methanol， the concentration of solution is 200 g/mL. Stored under 04 and stable for 6 months. 4.12 Standard intermediate solution ： Accurately transfer 0.50 mL of standard stock solution， diluted to 10 mL with methanol. The concentration of solution is 10 g/mL. Then accurately tr
33、ansfer 1.0 mL of this solution， diluted to 10 mL with methanol. The concentration of standard intermediate solution is 1.0 g/mL. 4.13 Standard work solution： Accurately transfer 1.0 mL of standard intermediate solution， diluted to 50 mL with methanol. The concentration of standard work solution is 2
34、0 ng/mL. Accurately transfer 0.25 mL， 0.50 mL， 1.0 mL， 2.5 mL and 5.0 mL of the solution which concentration is 20 ng/mL， diluted to 10 mL with methanol. The concentrations of standard work solutions are 0.50 ng/mL， 1.0 ng/mL， 2.0 ng/mL， 5.0 ng/mL and 10 ng/mL. Stored under 0 4 and stable for 3 mont
35、hs. 4.14 Florisil SPE column ： 1 g， preconditioned with 5 mL of hexane before use. 4.15 Millipore filter ： 0.45 m ， organic phase. 5 Apparatus and equipment 5.1 Liquid chromatography tandem mass spectrometry， equipped with ESI. 5.2 Electronic balance ： accurate to 0.000 1 g and 0.01 g. 5.3 Vortex mi
36、xer. 5.4 Homogenizer. 5.5 Centrifuge（4 000 r/min）. 5.6 Rotary vacuum evaporator. 5.7 Solid Phase Extraction System. 6 Preparation and storage of test sample 6.1 Preparation of test sample Take approximately 500 g of representative sample， smashed thoroughly by a chopper， passed through a 2.0 mm siev
37、e， and put into clean containers， which is sealed and labeled. 6.2 Storage of test sample Test samples should be stored at room temperature. In course of sampling and sample preparation， attention must be taken to avoid contamination or any factors which may cause the change of residue content. 7 Pr
38、ocedure 7.1 Extraction Weigh 2 g （accurate to 0.01 g） of the test sample into a 50 mL polypropylene tube， 10 mL of water was added. The sampled was soaked for 2 h. Then 20 mL of acetone was added. After homogenized for 2 minutes， 4 g sodium chloride and 15 mL of hexane were added. the sample was mix
39、ed for 1 minute and centrifuged at 4 000 r/min for 5 minutes. The upper solution was transferred into a concentrate bottle， the residual was extracted with 15 mL of hexane again， the solution was transferred into the same concentrate bottle and condensed to nearly dry， waiting for cleaning-up. 以正式出版
40、文本为准 13 SN/T 1594 2019 7.2 Cleaning-up Add 10 mL of hexane to dissolve the residual. 1.0 mL of the solution was transfered to a florisil column （4.14） . After sample loading， buprofezin was eluted by 10 mL of hexane-diethyl ether （4.8）. The eluate was evaporated and redissolved with 2.0 mL of methan
41、ol for determination by LC-MS/MS. 7.3 Determination 7.3.1 LC-MS/MS operating condition LC-MS/MS operating condition is as follows ： a）Column ： C18， 100 mm 2.1 mm （i.d）， 3.5 m， or the equivalent ； b）Mobile phase ： Ammonium acetate-formic acid mixed solution and methanol， for gradient elute condition，
42、 see Table 1 ； Table 1 Gradient elute condition Time/min Ammonium acetate-formic acid mixed solution/% Methanol/% 0.00 70 30 3.00 70 30 4.00 20 80 11.00 20 80 12.00 70 30 15.00 70 30 c）Column temperature ： 20 ； d）Flow ： 0.25 mL/min ； e）Injection volumn ：10 L； f）ion source ： ESI ； g）Scan mode ： posit
43、ive ； h）Detect mode ： Multiple reaction monitoring（MRM）； i）Ion-pairs are listed in Table A.1 in Appendix A. 7.3.2 Quantitation determination Analyze standard working standard solutions and samples with external standard method by LC-MS/MS， using conditions established in section 7.3.1. If the concen
44、tration of buprofezin exceeds the linear range of the calibration curve， the final solution should be diluted with methanol and reanalyzed. Under the above conditions， the retention time of chromatographic peak of buprofezin is about 10.0 min. For the MRM chromatogram refer to Fig.B.1 in Appendix B.
45、 7.3.3 Qualification confirmation The relative intensities of the detected ions， expressed as a percentage of the intensity of the most intense ion or transition， shall correspond to those of the calibration standard， either from calibration standard solutions or from spiked samples， at comparable c
46、oncentrations， measured under the same conditions， 以正式出版文本为准 14 SN/T 1594 2019 within the following tolerances ： Table 2 Maximum allowance of relative ion abundance Relative intensity （base peak）% 50 2050 1020 10 Maximum permitted tolerances % 20 25 30 50 7.4 Blank test The operation of the blank te
47、st is the same as that described in the method of determination， but with omission of sample addition. 8 Calculation and expression of the result Calculate the content of ethoxyquin in the test sample according to the following formula ： 1 000 1 000 cV X m = （1） Where ： X the content of buprofezin i
48、n the test sample， mg/kg ； c the concentration of buprofezin in sample solution calculated by standard curve， g/mL ； V the final volume of the sample solution， mL ； m the corresponding mass of the test sample in the final sample solution， g. The calculated result should be deducted from the blank va
49、lue. 9 Limit of quantitation and recovery 9.1 Limit of quantitation The limits of quantitation for buprofezin in green tea， black tea， puer tea， oolong tea， burdock tea， chrysanthemum tea， eucommiae tea and barley tea are 0.005 mg/kg. 9.2 Recovery The spike levels and results of recovery test are listed in Table 3. Table 3 Results of recovery test Spike level mg/kg 回收率范围 /% Green tea Black tea Punuller tea Oolong tea Burdock tea Chrysanthemum tea Eucommiae tea Barley tea 0.005 84104 7486 92106 76102 86104 90104 8698 84106 0.01 7689 7397 82108 86101 7
