HJ 1216-2021 水质 浮游植物的测定 0.1 ml计数框-显微镜计数法.pdf

1、中华人民共和国国家生态环境标准 HJ 1216 2021 水质 浮游植物的 测定 0.1 ml 计数框- 显微镜计 数法 Water quality Determination of phytoplankton 0.1 ml chamber Microscope counting method 本电子版 为正式 标 准文本， 由生态 环 境部环境 标准研 究 所审校排 版。 2021-11-29 发布 2022-06-01 实施 生 态 环 境 部 发 布 HJ 12162021 i 目 次 前 言 . ii 1 适 用范 围 . 1 2 规 范性 引用 文件. 1 3 术 语和 定义 . 1

2、 4 方 法原 理 . 1 5 试 剂和 材料 . 2 6 仪 器和 设备 . 2 7 样品 . 2 8 分 析步 骤 . 3 9 结 果计 算与 表示. 5 10 精 密度 . 6 11 质量 保证 和质 量控 制 . 6 12 注 意事 项 . 6 13 废 物处 置 . 7 附录 A （ 规范 性附 录） 随机视 野方 式方 法检 出限 的计算 . 8 附录 B （ 资料 性附 录） 显微镜 视野 面积 的测 量和 计算 . 9 附录 C （ 资料 性附 录） 浮游植 物计 数原 始记 录表 . 12 参考文 献 . 13 HJ 1216 2021 ii 前 言 为贯彻 中 华人 民共

3、和国 环境保 护法 中华 人民 共 和国水 污染 防治 法 ， 防 治 生态环 境污 染， 改善 生态环 境质 量， 规范 水中 浮游植 物的 测定 方法 ，制 定本标 准。 本标准 规定 了测 定地 表水 中浮游 植物 的 0.1 ml 计数 框- 显微镜计 数法 。 本标准 的附 录 A 为规范 性 附录， 附 录 B 和附 录 C 为 资料性 附录 。 本标准 为首 次发 布。 本标准 由生 态环 境部 生态 环境监 测司 、法 规与 标准 司组织 制订 。 本标准 主要 起草 单位 ：云 南省生 态环 境监 测中 心。 本标准 验证 单位 ： 上海 市 环境监 测中 心 、 中 国科

4、学 院水生 生物 研究 所 、 云 南 省生态 环境 厅驻 昆明 市 生态环 境监 测站 、 江 苏省 无锡环 境监 测中 心、 云南 省生态 环境 厅驻 玉溪 市生 态环境 监测 站和 云南 省 生 态 环境厅 驻大 理州 生态 环境 监测站 。 本标准 生态 环境 部 2021 年 11 月 29 日 批准 。 本标准 自 2022 年 6 月 1 日 起实施 。 本标准 由生 态环 境部 解释 。 HJ 12162021 1 水质 浮 游植物的 测定 0.1 ml 计 数框- 显微 镜计数 法 1 适 用范 围 本标准 规定 了测 定水 中浮 游植物 的 0.1 ml 计数框- 显微镜计

5、 数法 。 本标准 适用 于地 表水 中浮 游植物 的密 度测 定。 样 品 浓 缩 50 倍 时 ， 对 角 线 方 式 计 数 方 法 检 出 限 为 9.2 10 3 cells/L ； 行 格 方 式 计 数 方 法 检 出 限 为 3.0 10 3 cells/L ；全片方 式 计数方 法检 出限 为 9.2 10 2 cells/L ；随机视野 方式 计 数的方 法检 出限 与观 察 的视野 数、 显微 镜视 野面 积有关 ，按 附 录 A 计算 。 2 规 范性 引用 文件 本标准 引用了 下列 文件或 其中的 条款。 凡是 注明日 期的引 用文件 ，仅 注日期 的版本 适用于

6、本标 准 。 凡是未 注日 期的 引用 文件 ，其最 新版 本（ 包括 所有 的修改 单） 适用 于本 标准 。 GB/T 14581 水质 湖泊 和水 库 采 样技 术指导 HJ/T 91 地表水 和污 水监 测技 术规 范 HJ 494 水质 采样 技术 指导 3 术 语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 标准。 3.1 浮游植 物 phytoplankton 在水中 营浮 游生 活的 微小 藻类植 物， 通常 浮游 植物 就是浮 游藻 类， 包括 原核 的蓝藻 和其 它各 类真 核 藻类。 3.2 显微镜 计数 视野 microscope counting field 显微镜 视野

7、 中限 定一 定面 积的区 域， 用 于 定量 计数 浮游植 物。 3.3 检出限 detection limit 单次计 数过 程中 ，发 现的 概率不 低 于 99% 时最 低的 浮游植 物密 度。 4 方 法原 理 在显微 镜下 ，利 用 0.1 ml 计数框 对样 品中 的浮 游植 物进行 人工 分类 和计 数， 计算单 位体 积样 品 中 各种类 浮游 植物 的细 胞数 量。 HJ 1216 2021 2 5 试 剂和 材料 除非另 有说 明， 分析 时均 使 用符合 国家 标准 的分 析纯 试剂， 实验 用水 为新 制备 的 去离子 水或 蒸馏 水。 5.1 碘（I 2）。 5.2

8、 碘 化 钾（KI）。 5.3 甲醛 溶液 ：w(HCHO) 37% 40% 。 5.4 丙三 醇（HOCH 2CHOHCH 2OH）。 5.5 鲁哥 氏碘 液： 称取 60 g 碘化 钾（5.2 ） ， 溶于 100 ml 水中， 再加 入 40 g 碘（5.1 ） ， 充分 搅拌 使其完 全溶 解， 加水 定容 至 1000 ml ，转移至 棕 色磨口 玻璃 瓶， 室温 避光 保存。 6 仪 器和 设备 6.1 25 号 浮游 生物 网： 网孔直 径 为 0.064 mm ， 网呈圆锥 形 ， 网 口套 在铜 环 上， 网底 端有 出水 开关 活 塞。 6.2 定性 采样 瓶：30 ml

9、100 ml 广口 聚乙 烯瓶 。 6.3 采水 器： 不锈 钢或 有 机玻璃 材质 ，圆 柱形 。容 量和深 度规 格要 满足 采样 要求。 6.4 定量 采样 瓶：1 L 2 L 广口聚乙烯 瓶。 6.5 正置 或倒 置生 物显 微 镜：物 镜 4 、10 、20 、40 ，目镜 10 或 15 。 6.6 浓缩 装置 ：1 L 2 L 筒形分 液漏 斗或 量筒 。 6.7 样品 瓶：50 ml 具塞 棕色玻 璃广 口瓶 。 6.8 超声 波发 生装 置： 工 作频 率 40 kHz ，水 浴方 式 。 6.9 微量 移液 器 ：100 l 。 6.10 0.1 ml 浮游植 物计 数框：

10、 面 积 20 mm 20 mm ，框内划分 横 竖 各 10 行 格， 共 100 个小 方格 。 6.11 盖玻 片： 面 积 22 mm 22 mm ，厚度小 于 0.2 mm 。 6.12 载物 台测 微计 ：又 称镜台 测微 计，1 mm/100 DIV ，分 划值 为 0.01 mm 。 注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。 6.13 目镜 分划 板： 又称 目镜测 微尺 ，5 mm/50 DIV ，分划 值 为 0.1 mm 。 6.14 计数 器。 6.15 一般 实验 室常 用仪 器和设 备。 7 样品 7.1 样品 的采集 7.

11、1.1 定 性样 品 点位布 设及 采样 频次 按 照 GB/T 14581 、HJ/T 91 和 HJ 494 的 相关 规定 执行 。 也可根 据调 查研 究目 的确定 。 使用 25 号 浮 游 生 物 网 （6.1 ） 采 集 定 性 样 品 。 关 闭 浮 游 生 物 网 底 端 出 水 活 塞 开 关 ， 在 水 面 表 层 至 0.5 m 深处 以 20 cm/s 30 cm/s 的速度 做 “ ” 形 往复 ， 缓慢拖 动 约 1 min 3 min ， 待 网中 明显 有浮 游植 物 进 入，将 浮游 生物 网（6.1 ） 提出水 面， 网内 水自 然通 过网孔 滤出 ，待

12、底部 还剩 少许水 样 （5 ml 10 ml ）HJ 12162021 3 时，将 底端 出口 移入 定性 采样瓶 （6.2 ） 中， 打开 底 端活塞 开关 收集 定性 样品 。采集 分层 样品 时， 用 25 号浮游生 物网（6.1 ）过滤特定水层 样品，其他步骤同采集表 层样品。定性样品采集完 成后及时将浮 游 生物网 清洗 干净 。样 品采 集后冷 藏避 光运 输。 如有定 性样 品采 集的 技术 规范， 按技 术规 范有 关要 求执行 。 7.1.2 定 量样 品 按照 GB/T 14581 、HJ/T 91 和 HJ 494 的 相关 规定 进 行定量 样品 的采 集。 用采水

13、器 （6.3） 采集 样品 至定量 采样 瓶 （6.4） 中， 一般采 集不 少 于 500 ml 样 品。 若 水体 透明 度较 高，浮 游植 物数 量较 少时 ，应酌 情增 加采 样体 积。 定量样 品采 集后 ，样 品瓶 不应装 满， 以便 摇匀 。 注 1 ： 有些浮游植物（如蓝藻 ）常浮于水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考。 注 2 ： 定量样品采集应在定性 样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较。 7.2 样品 的保存 7.2.1 定 性样 品 定性样品采集后 立即加入 鲁哥氏碘液（5.5 ） ，用量 为水样体积的 1.0% 1.5% 。镜

14、检活体样品 不加 鲁哥氏 碘液 固定 。 定 性样 品 在室温 避光 条件 下可 保 存 3 周； 1 5 冷 藏避 光 条件下 可保 存 12 个 月。 活体样 品 在 4 10 避光条 件下 可保 存 36 h 。 7.2.2 定 量样 品 定量样 品采 集后 立即 加入 鲁哥氏 碘液 （5.5） 固定 ， 用量为 水样 体积 的 1.0% 1.5% 。 也 可将 鲁哥 氏 碘液 （5.5 ） 提 前加 入定 量采 样瓶 （6.4 ） 中 带至 现场 使用 。 定量 样品 在室温 避光 条件 下可保 存 3 周； 1 5 冷 藏避 光条 件下 可保 存 12 个月 。 样品在 保存过程中，

15、应每周检查 鲁哥氏碘液（5.5 ）的氧化 程度，若样品颜色变浅， 应向样品中 补 加适量 的鲁 哥氏 碘液 （5.5 ） ，直 到样 品的 颜色 恢复 为 黄褐色 。 注： 若样品需长期保存，应加 入甲醛溶液（5.3 ），用量为水 样体积的 4% 。 8 分 析步 骤 8.1 混匀 样品 每次取 样前 ，采 用上 下颠 倒至 少 30 次的 方式 充分 混 匀所采 样品 ，混 匀动 作要 轻。 8.2 定性 样品 的分析 在显微 镜 （6.5 ） 下 观察 定 性样品 （7.1.1 ） ， 鉴 定浮 游 植物的 种类 。 优 势种 类鉴 定到种 ， 其 他种 类至 少鉴定 到属 。部 分物 种

16、鉴 定参考 资料 见参 考文 献。 注： 种类鉴定除用定性样品观 察外，还可吸取已完成计数的定量样品进行观察。 HJ 1216 2021 4 8.3 定量 样品 的分析 8.3.1 试 样制 备 8.3.1.1 预检 将样品 放至 室温 ，用 微量 移液器 （6.9）取 0.1 ml 混匀样品 ，注 入 0.1 ml 浮游 植物计 数框 （6.10 ） 中，用盖 玻片（6.11 ）将 计数框（6.10） 完全盖 住 ，静置片 刻，无 气泡可 观 察样品， 如有气 泡应重 新 取 样。随 机选 取若 干计 数小 格或视 野， 初步 估计 浮游 植物的 数量 。 对于含 有细 胞聚 集成 团的 浮

17、游植 物样 品， 当不 满足 以下两 个条 件中 的任 何一 个时， 应进 行超 声波 分 散处理 ： a ） 群 体中 的浮 游植 物细 胞个体 较易 被辨 识， 能够 对群体 中的 细胞 进行 计数 ； b） 当 群体 中所 含细 胞数 量与群 体体 积或 长度 有固 定比例 时， 如空 星藻 、 盘 星藻、 丝状 藻等 ， 可 以 将群体 作为 计数 对象 ，依 据比例 得到 浮游 植物 细胞 数量。 8.3.1.2 调整 浮游 植物 密 度 适宜测 定的 浮游 植物 密度 为 10 7 cells/L 10 8 cells/L 。 若 定量 样品 （7.1.2 ） 中 的 浮游植 物细

18、 胞密 度低 于 10 7 cells/L ， 应浓缩 样 品 ； 若定 量样 品 （7.1.2 ） 中 的 浮游植 物细 胞密 度高 于 10 8 cells/L ， 应 稀释样 品。 最终使 加入 计数 框中 的 0.1 ml 样品约含有 500 个10000 个 浮游 植物 细胞 。 样品浓 缩： 将全 部定 量样 品摇匀 倒入 浓缩 装置 （6.6 ）中， 避免 阳光 直射 的环 境下， 静 置 48 h。用 细小虹 吸管 吸取 上清 液置 于烧杯 中， 直至 浮游 植物 沉 淀物体 积 约 20 ml 。 旋开浓 缩装置 （6.6 ） 底部 活塞 ， 将浮游 植物 沉淀 物放 入 1

19、00 ml 量筒中。 用 少许 上清 液冲洗 浓缩 装置 （6.6 ）13 次， 将冲 洗水 一并 放入 量筒中， 再用 上清液 定 容至 所需浓 缩倍 数的 体积。 为了 减少浮 游植 物吸 附在 浓缩 装置壁 上， 在 静置 初期 ， 应适时 轻敲 浓缩 装置 器壁 。虹吸 过程 中， 吸液 口与 浮游植 物沉 淀物 间距 离应 大于 3 cm 。如水样 中浮 游 植物密 度极 低， 采样 量 1 L 及以上时， 可多 次浓 缩 ，即每 次浓 缩后 再静 置 24 h 48 h ， 重复 浓缩 操作 ， 调整至 所需 浓缩 倍数 体积 。浓缩 后的 样品 可根 据需 要， 经 超声 处理

20、后计 数。 样品稀 释： 根据 稀释 倍数 ， 选取 相应 体积 的容 量瓶 ， 量取 不少 于 25 ml 混匀 后的定 量样 品或 经超 声 分散处 理后 的样 品， 用水 定容至 刻线 。 如 要保 存稀 释后的 样品 ， 应 注意 补充 鲁哥氏 碘液 （5.5 ） ， 使 稀释 后的样 品中 的鲁 哥氏 碘液 浓度与 稀释 前一 致。 注： 超声波分散处理具体步骤 为取混匀的定量样品于样品瓶 （6.7 ） 中， 用超声波发生装置 （6.8 ） 处理约 10 min 后， 在 显 微 镜（6.5 ） 下观 察 ，如 仍存 在 大 量未 分散 的 细胞 团 ，则 应 延 长 超声 波处 理

21、 时间 ， 直至能 够 准 确计 数。 超 声波分散处理过程中应 注意水温，防止过热造成水分蒸发和浮游植物细胞结构被破坏。 8.3.2 显 微镜 计数 8.3.2.1 装片 同 8.3.1.1 步骤 进行 装片 。 可根据 需要 ，用 滴管 吸取 少许丙 三醇 （5.4 ） 均匀 涂 抹盖玻 片四 周， 以防 止计数 框水 分蒸 发形 成气 泡。涂 抹时 应避 免渗 入计 数框。 8.3.2.2 选取 计数 方式 根据调 整后 样品 （8.3.1.2 ） 中浮游 植物 的密 度， 选 用 一种 适 当的 计数 方式， 使 测定过 程中 浮游 植物 细胞的 总计 数量 为 500 个 1500

22、个 。表 1 为 推荐 选 用的计 数方 式。 HJ 12162021 5 表1 推荐 选用 的计 数方 式 计数框中 0.1 ml 样品含有的浮游植物细胞数（cells ） 推荐的计数方式 5001500 全片计数 1500 5000 行格计数 5000 10000 对角线计数、随机视野 8.3.2.3 计数 8.3.2.3.1 全 片计 数方 式 在 40 物镜 下， 逐一 观察 浮游植 物计 数框 中全 部 100 个小方 格， 分类 计数 每 个小方 格内 所有 浮游 植物细 胞， 并记 录每 行的 分类计 数结 果。 若浮 游植 物细胞 体积 较大 时， 可降 低物镜 倍数 。 8.

23、3.2.3.2 行 格计 数方 式 在 40 物 镜下， 逐一 观察 浮游植 物计 数框 中 第 2、5 、8 行， 共 30 个小 方格， 分类计 数每 个小 方 格 内所有 浮游 植物 细胞， 并记 录每个 小格 的分 类计 数结 果。 若浮 游植 物细 胞体 积较 大时， 可 降低 物镜 倍数 。 8.3.2.3.3 对 角线 计数 方 式 在 40 物 镜下 ， 逐 一观 察 位于浮 游植 物计 数框 对角 线位置 上 的 10 个小 方格 ， 分类计 数每 个小 方格 内所有 浮游 植物 细胞， 并记 录每个 小格 的分 类计 数结 果。 若 浮 游植 物细 胞体 积较 大时， 可

24、降低 物镜 倍数 。 8.3.2.3.4 随 机视 野方 式 在 40 物镜 下，随 机抽 取 一定数 量的视 野， 分类计 数每个 视野内 所有 浮游植 物细胞 ，并记 录每 个 视野的 分类 计数 结果 。 若 浮游植 物细 胞体 积较 大时 ， 可 降低 物镜 倍数 。 计数 前 应测量 或计 算显 微镜 视野 面积， 测量 和计 算方 法参 见附 录 B 。 8.3.2.3.5 计 数要 求 每一样 品装 片计 数两 次。 两次浮 游植 物细 胞总 计数 量结果 相对 偏差 应在 15% 以内， 否则 应增 加 计 数一次 ， 直 至某 两次 计数 结果符 合这 一要 求为 止。 测定

25、结 果为 相对 偏差 在15% 以内 的两 次计 数结 果的 平均值 。 9 结 果计 算与 表示 9.1 结果 计算 样品中 浮游 植物 的细 胞密 度，按 照公 式（1） 进行 计 算。 N= A A c n V V 1 V 0 1000 （1 ） 式中：N 样品 中浮 游植 物的密 度 ，cells/L ； A 计 数框 面积 ，mm 2 ； HJ 1216 2021 6 A c 计 数面 积 ， 当计 数 方式为 对角 线 、 行格 和全 片时计 数面 积分 别为 A/10 、3A/10 和 A ， 当 计数方 式为 随机 视野 时计 数面积 为总 视野 面积 ，mm 2 ； n 显微

26、 镜观 察计 数的 浮 游植物 细胞 数 ，cells ； V 计 数框 容积 ，ml ； V 1 稀释 或浓 缩后 的试 样体积 ，ml ； V 0 稀释 或浓 缩前 的样 品体积 ，ml ； 1000 体 积换 算系 数 ，ml/L 。 9.2 结果 表示 测定结 果以 科学 计数 法表 示，保 留 2 位有 效数 字。 10 精 密度 6 家 实 验 室 分 别 用 全 片 计 数 、 行 格 计 数 、 对 角 线 计 数 和 随 机 视 野 计 数 对 浮 游 植 物 密 度 水平分别 为 110 7 cells/L 、310 7 cells/L 、510 7 cells/L 、11

27、0 8 cells/L 的湖泊样 品进 行 了 7 次 重复 测定 ，实 验室 内的相对标准偏差分别 为 2.4% 11% ，2.9% 10% ，2.7% 11% ，4.8% 8.2% ；实验室间相对 标准偏 差分别 为 22% 、5.6% 、7.1% 、21% 。计 算测 定结 果对 数值的 95% 置 信区 间， 再 取反对 数得 到的 实验 室 间 95% 置信 区间 见表 2。 表2 实验 室间95% 置 信区 间 计数方式 均值 95% 置信区间 全片方式（cells/L ） 1.1 10 7 8.6 10 6 1.3 10 7 行格方式（cells/L ） 3.3 10 7 3.1

28、 10 7 3.5 10 7 对角线方式（cells/L ） 5.6 10 7 5.2 10 7 6.0 10 7 随机视野（cells/L ） 1.2 10 8 9.6 10 7 1.4 10 8 11 质 量保 证和 质量 控制 11.1 浮游 植物 均匀 性 在开始 显微 镜计 数前 ， 应 确认浮 游植 物在 计数 框中 分布的 均匀 性。 使用 低倍 数物镜 观察 浮游 植物 在 整个计 数框 中的 分布 情况 ，若分 布不 均匀 ，应 重新 取样。 11.2 最少 计数 量 在单次 测定 中 ， 浮 游植 物 细胞总 计数 量不 少 于 500 个。 如果 测定 精度 难以 达 到

29、要求 ， 可适 当增 加每 次测定 中浮 游植 物细 胞的 计数总 量。 12 注 意事 项 12.1 如 果 一个 浮游 植物 细胞的 一部 分在 行格 或视 野内， 而另 一部 分在 行格 或视野 外， 则按 照在 行 格 上HJ 12162021 7 边界及 左边 界 或 视野 上半 圈的细 胞不 计数 ， 在 行格 下 边界 及右 边界 或视 野下 半圈的 细胞 计数 。 破 损 细 胞 或细胞 残体 不计 数。 12.2 计数 过程 中， 如果 发生样 品水 分蒸 发， 在计 数框中 形成 气泡 ，则 弃去 本片重 新取 样计 数。 13 废 物处 置 实验中 产生 的废 液应 分类

30、 收集， 集中 保管 ，依 法委 托有资 质的 单位 进行 处理 。 HJ 1216 2021 8 附 录 A （规范 性附 录） 随机视 野方 式检 出限 的计 算 附录 A 给 出了 随机 视野 方 式检出 限的 计算 公式 。随 机视野 方式 的检 出限 与观 察的视 野数 、视 野 面 积和计 数框 面积 有关 。当 浓缩 f 倍 时， 按 照 公式 （A.1 ）计 算方 法检 出限 。 MDL= A e V s f ln 0.01 10 8 （ A.1 ） 式中：MDL 方法检 出 限 ，cells/L ； A 计 数框 面积 ，cm 2 ； n e 观察 的随 机视 野数 ，个；

31、V 计 数框 容积 ，L ； s显微镜 1 个 视野 的面 积 ，m 2 / 个； f 浓 缩倍 数 ； 0.01 显 著性 水平 ； 10 8 面积 换算 系数 ，m 2 / cm 2 。 HJ 12162021 9 附 录 B （资料 性附 录） 显微镜 视野 面积 的测 量和 计算 B.1 显微 镜视 野面 积的 测 量 B.1.1 原理 用载物 台测 微计 标定 目镜 分划板 ，再 用目 镜分 划板 测量视 野直 径， 计算 视野 的面积 。 B.1.2 测 量工 具 B.1.2.1 载物 台测 微计 载物台 测微 计 （6.12 ） 是 一块特 制的 载玻 片 ，其 中 央有一 小圆

32、 圈 。圆 圈内 刻 有分度 ， 将长 1 mm 的 直线等 分 为 100 个小 格， 每个小 格长 度等 于 10 m 。 图B.1 载 物台 测微 计示 意图 B.1.2.2 目镜 分划 板 目镜分 划板 （6.13 ） 是一 块有刻 度的 圆形 玻 璃 片， 通常刻 度是 将 5 mm 分划为 50 格。 使 用前 应 用 载物台 测微 计进行 标 定。 图B.2 目 镜分 划板 示意 图 HJ 1216 2021 10 B.1.3 显 微镜 视野 面积 测 量步骤 B.1.3.1 装入 目镜分划板（6.13 ）。旋 下目镜上的目透镜 ，将目镜分划板 放入接目 镜的中隔板上， 使 有刻

33、度 的一 面朝 下， 再旋 上目透 镜， 并装 入镜 筒内 。 B.1.3.2 装入 载物台测微计（6.12 ）。 将载物台测微计置 于显微镜的载物 台上，有 刻度的一面朝上 ， 并调整 具有 刻度 的小 圆圈 至视野 中央 。 B.1.3.3 载 物台 测微计 标 定目镜 分划板 。先 用低倍 镜观察 ，对准 焦距 ，待看 清载物 台测微 计标尺 的刻 度后 ， 转 动目 镜 ， 使 目镜 分 划板的 标尺 与载 物台 测微 计的标尺 相 平行 ， 并使 它 们的左 边第 一条 刻度 线相 重合， 再向 右寻 找两 尺的 另一条 重合 刻度 线。 载物 台测微 计标 定目 镜分 划板 见图

34、B.3 。 图B.3 载 物台 测微 计标 定目镜 分划 板示 意图 B.1.3.4 记录 两条 重合 刻度 线间 的目 镜分 划板 标尺 的格数 N w 和载 物台 测微 计 标尺 的格 数 N s 。 按照 公 式 B.1 计 算目 镜分 划板 标尺 1 格 所代 表的 实际 长 度 L 。 e = s w 10 （B.1 ） 式中：L e 目 镜分 划板 标尺 1 格所 代表 的实 际长 度 ，m ； N s 两 条重 合刻 度线 之 间 载物 台测 微计 标尺 的格 数 ，个 ； N w 两条 重合 刻度 线之 间 目镜 分划 板标尺 的 格数 ，个； 10 载物 台测 微计 标尺 上

35、 单格 的长度 ，m 。 B.1.3.5 测 量显 微镜视 野 面积。 用标定 后的 目镜分 划板， 测量视 野的 直径 d ，再用 圆面积 公式 计算 视 野面 积 s 。 s= d 2 4 （B.2 ） 式中：s 显微 镜 1 个视 野的面 积 ，m 2 ； 圆周 率 ； d 显微 镜视 野直 径 ，m ； 4 直径 和半 径换 算系 数 2 的 平方 。 载物台 测微计标尺 目镜分划板标尺 右边重合线 左边重合线 =100 m =10 m HJ 12162021 11 B.2 显微 镜视 野面 积的 计 算 B.2.1 原理 通过显微镜的 目镜所观察 到的圆形区域 称为视野。 按照公式（

36、B.3 ）计 算视野 直径，再利用 圆面 积 公式计 算视 野面 积， 单位 为 mm 2 。 d= FN M 0 （B.3 ） 式中：d 显 微镜 视野 直 径 ，mm ； FN 目镜 视场 数 ，mm ； 0 标 准物 镜放 大率 。 B.2.2 目 镜视 场数 目镜视 场数 等于 目镜 的直 径， 单 位为 mm 。 标准化设 计和生 产的 显微 镜， 在其 目镜上 通常 会有 视 场 数的标 识。 常见 的显 微镜 目镜视 场数 有：18、20、22 、25 、26.5 等。 B.2.3 物 镜的 放大 率 指物镜 的放 大倍 数。 生物 显微镜 常用 的物 镜放 大率 有 4、10

37、、20、40 和 100 。浮 游生 物 计数常 用的 物镜 放大 率 为 20和 40 。 HJ 1216 2021 12 附 录 C （资料 性附 录） 浮游植 物计 数原 始记 录表 浮游植 物的 原始 记录 表参 见表 C.1 。 表C.1 浮 游植 物计 数原 始 记录表 采样日期： 样品编号： 方法依据： 设备名称及编号： 浓缩倍数： 稀释倍数： 取样量（ml）： 计数方式： 全片计 行格 对角线 随机视野 浮游植物 名称 第一片计数量（cells ） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 合计 总计 浮游植物 名称 第二片计数量（cells ） 1 2 3 4 5 6 7 8

38、 9 10 合计 总计 两片计数相对偏差（%）： 计数总数平均值 （cells ） ： 样品浓度（cells/L ） ： 注 1 ：本表格为计数中使用的 原始记录表格 ； 注 2 ：计数量序号 “1 10” ， 可根据计数方式按小格、行和视野填入计数结果。 分析日 期： 分 析人 ： 校 核人 ： HJ 12162021 13 参考文 献 1 胡鸿 钧, 魏印 心. 中 国 淡水藻 类 系 统、 分类 及生态M. 北京: 科 学出 版社, 2006. 2 中国 孢子 植物 志编 辑委 员会. 中国 淡水 藻志, 1-22 卷M. 北京: 科 学出 版社, 1998-2016. 3 胡鸿 钧, 李尧 英, 魏 印 心等. 中国 淡水 藻类 M. 北京: 科 学技 术出 版社, 1980. 4 胡鸿 钧. 水华 蓝藻 生物 学M. 北京: 科 学出 版社, 2011. 5 刘 威, 朱远 生， 黄迎 艳译. 欧洲 硅藻 鉴定 系统M. 广州: 中山 大学 出版 社, 2012. 6 章宗 涉, 黄祥 飞. 淡 水 浮游生 物研 究方 法M. 北京: 科学 出版 社, 1991.