1、 ICS 65.100 CCS B 21 34 安徽省地方标准 DB34/T 43142022 植物源性农产品中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法 Determination of fipronil and its metabolite residues in agricultural products of plant origin Liquid chromatography tandem mass spectrometry method 2022-10-26 发布 2022-11-26 实施安徽省市场监督管理局 发 布DB34/T 43142022 I 前言 本文件按照 G
2、B/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（合肥）、安徽省食品药品检验研究院、阜阳市农业综合行政执法监督支队、安庆市农产品质量安全检测中心、宣城市农产品质量安全中心、寿县农业技术推广中心、宿松县植检植保站。本文件主要起草人：褚玥、刘琴芳、黄泾、李军、王伟、李金宝、余兵、王莹、孙明娜、董旭、
3、童舟、孟丹丹、王梅、段劲生、高同春。DB34/T 43142022 1 植物源性农产品中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法 1 范围 本文件规定了植物源性农产品小麦、大米、菠菜、花生、甘蓝、柑橘中氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚残留量的液相色谱质谱联用检测方法。本文件适用于植物源性农产品小麦、大米、菠菜、花生、甘蓝、柑橘中氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚残留量的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）
4、适用于本文件。GB 2763-2021 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理 试样中氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚用乙腈和水混合溶液提取后，经吸附剂分散固相萃取净化，液相色谱-质谱联用法检测，外标法定量。5 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。试剂 5.1.1 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。5.1.2 甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。5.1.3 甲酸（HCOOH，C
5、AS 号：64-18-6）：色谱纯。5.1.4 乙酸铵(CH3COONH4，CAS 号：631-61-8)：色谱纯。5.1.5 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）。溶液配制 5.2.1 甲酸水溶液（0.1）：吸取 1 mL 甲酸（5.1.3），加水混匀定容至 1 L。DB34/T 43142022 2 5.2.2 乙酸铵-甲酸水溶液（5 mmol/L）：称取 0.388 g 乙酸铵（5.1.4），用 0.1甲酸水溶液（5.2.1）溶解并稀释至 1 L，摇匀。标准品 氟虫腈（C12H4Cl2F6N4OS，CAS 号：120068-37-3）氟甲腈（C12H4Cl2F6N4，
6、CAS 号：205650-65-3）氟虫腈砜（C12H4Cl2F6N4O2S，CAS 号：120068-36-2）氟虫腈硫醚（C12H4Cl2F6N4S，CAS 号：120067-83-6）标准品，纯度均99.0 标准溶液配制 5.4.1 氟虫腈标准储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取氟虫腈标准品 10 mg（精确至 0.1 mg），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，18下避光保存，有效期 6 个月。5.4.2 氟甲腈标准储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取氟甲腈标准品 10 mg（精确至 0.1 mg），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，18下避光保存，有
7、效期 6 个月。5.4.3 氟虫腈砜标准储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取氟虫腈砜标准品 10 mg（精确至 0.1 mg），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，18下避光保存，有效期 6 个月。5.4.4 氟虫腈硫醚标准储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取氟虫腈硫醚标准品 10 mg（精确至 0.1 mg），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，18下避光保存，有效期 6 个月。5.4.5 混合标准储备溶液（10 mg/L）：分别吸取适量的各单标储备液（5.4.1，5.4.2，5.4.3，5.4.4），用甲醇（5.1.2）溶解，配制成浓度为 10 mg/L 的
8、混合标准储备溶液，18下避光保存，有效期 1 个月。材料 5.5.1 十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：粒径 40 m60 m。5.5.2 微孔滤膜（有机相）：13 mm0.22 m，或相当者。6 主要仪器和设备 液相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。分析天平：感量 0.01 g 和 0.1 mg。振荡器。离心机：转速不低于 7000 r/min。涡旋混合仪。7 试样制备与储存 样品测定部位按照 GB 2763-2021 中附录A 的规定执行。取适量样品，依据试样制备规程，四分法取样，制成试样，置于 18条件下保存。8 分析步骤 提取和净化 DB34/T 43142022 3 准确称
9、取待测试样 5 g（精确至 0.01 g），置于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 水，10 mL 乙腈（5.1.1），振荡 1 h，再加入 3 g 氯化钠，涡旋 1 min，以 5 000 r/min 离心 5 min，取上清液 2 mL 置于10 mL 离心管中，加入 150 mg 无水硫酸镁和 50 mg C18 吸附剂（5.5.1）净化，涡旋 1 min，7 000 r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22 m 有机微孔滤膜（5.5.2）过滤，待测。测定 8.2.1 液相色谱参考条件 如下：a)色谱柱：C18柱，50 mm 2.1 mm（内径），粒径 1.7 m，或相当者
10、；b)流动相：A 相为乙酸铵-甲酸水溶液（5.2.2），B 相为甲醇溶液（5.1.2）。流动相梯度条件见表 1；c)流速：0.25 mL/min；d)柱温：40；e)进样体积：5 L。表1 流动相及其梯度条件 梯度时间/min 流动相比例/（）流动相A 流动相B 0.0 95 5 1.0 60 40 3.0 20 80 5.0 95 5 6.0 95 5 8.2.2 质谱参考条件 如下：a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；b)锥孔电压：4 V；c)扫描方式：负离子扫描；d)离子源温度：150；e)脱溶剂管温度：600；f)毛细管电压 0.5 KV，去溶剂气 1000 L/h（高纯氮，纯度99.
11、999），碰撞气 0.15 mL/min（氩气）；g)检测方式：多反应监测 MRM，多反应监测条件见表 2.表2 氟虫腈及其代谢物的的保留时间和多反应监测（MRM）质谱参数 化合物 保留时间 min ESI模式 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 碰撞能量 eV 氟虫腈 3.66 负离子 434.9/250.0 434.9/250.0 29 434.9/330.0 15 DB34/T 43142022 4 表2（续）化合物 保留时间 min ESI模式 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 碰撞能量 eV 氟甲腈 3.61 负离子 387.1/351.1 387.1/351.1 14 3
12、87.1/282.0 48 氟虫腈砜 3.79 负离子 451.1/281.9 451.1/281.9 32 451.1/415.1 24 氟虫腈硫醚 3.72 负离子 419.1/262.0 419.1/262.0 34 419.1/383.1 16 8.2.3 标准工作曲线 将氟虫腈及其代谢物的混合标准储备溶液（5.4.5），用空白基质提取溶液（8.1）逐级稀释，配制成质量浓度分别为 0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L 和 0.5 mg/L 的系列基质匹配混合标准溶液，按质量浓度由低至高依次进样测定，以峰面积（扣除空白基质中的本
13、底）为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制线性标准曲线，计算得到标准曲线回归方程和相关系数。基质匹配混合标准溶液需现配现用。定性和定量 8.3.1 保留时间 被测试样中氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜和氟虫腈硫醚色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在 2.5之内。8.3.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一致，且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括 1 个母离子和 2 个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质匹配标准溶液相比
14、，其允许偏差不超过表3 规定的范围，则可判断样品中存在氟虫腈或者氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚。表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 单位为 相对离子丰度 50 2050 1020 10 允许相对偏差 20 25 30 50 8.3.3 定量 采用外标法定量。8.3.4 试样溶液的测定 将基质匹配混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱联用仪中，以保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积。以目标化合物的峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，定量测定待测化合物含量。样品试液中待测物的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释
15、后再进行分析。DB34/T 43142022 5 氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚的特征离子质量色谱图见附录A。空白实验 除不加试样外，均按上述步骤进行测定。9 结果计算 试样中的氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜和氟虫腈硫醚残留量以质量分数计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式（1）或公式（2）计算。(1)(2)式中：1 基质匹配标准工作溶液中氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；2 从基质匹配标准工作曲线中得到的试样溶液中氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；A 试样溶液中氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈
16、硫醚的峰面积；SA 基质匹配标准工作溶液中氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜或氟虫腈硫醚的峰面积；V 提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；m 试样质量的数值，单位为克（g）；计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留 2 位有效数字。当结果超过 1 mg/kg 时，保留 3 位有效数字。10 精密度 在重复性条件下，获得的 2 次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限（r），参见附录 B。在再现性条件下，获得的 2 次独立测试结果的绝对差值不得超过再现性限（R），参见附录 B。11 定量限 本文件方法小麦、大米、菠菜、花生、甘蓝、柑橘基质中氟虫腈、氟甲腈、
17、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚的定量限均为 0.01 mg/kg。DB34/T 43142022 6 附录A （资料性）氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚多反应监测（MRM）质量色谱图 A.1 0.5 mg/L 氟虫腈标准溶液多反映监测（MRM）质量色谱图见图 A.1。图A.1 0.5 mg/L 氟虫腈标准溶液多反映监测（MRM）质量色谱图 A.2 0.5 mg/L 氟甲腈标准溶液多反映监测（MRM）质量色谱图见图 A.2。图A.2 0.5 mg/L 氟甲腈标准溶液多反映监测（MRM）质量色谱图 DB34/T 43142022 7 A.3 0.5 mg/L 氟虫腈砜标准溶液多反映监测（MRM）
18、质量色谱图见图 A.3。图A.3 0.5 mg/L 氟虫腈砜标准溶液多反映监测（MRM）质量色谱图 A.4 0.5 mg/L 氟虫腈硫醚标准溶液多反映监测（MRM）质量色谱图见图 A.4。图A.4 0.5 mg/L 氟虫腈硫醚标准溶液多反映监测（MRM）质量色谱图 DB34/T 43142022 8 附录B （资料性）氟虫腈氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚精密度数据表 表B.1 氟虫腈氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚精密度数据表 中文名称 英文名称 精密度 含量 0.01 mg/kg 0.1 mg/kg 1.0 mg/kg 氟虫腈 Fipronil 重复性限（r）0.0005 0.0050 0.0271 再现性限（R）0.0024 0.0214 0.2392 氟甲腈 Fipronil-Desulfinyl 重复性限（r）0.0005 0.0077 0.0552 再现性限（R）0.0028 0.0199 0.2729 氟虫腈砜 Fipronil-Sulfone 重复性限（r）0.0008 0.0080 0.0391 再现性限（R）0.0025 0.0144 0.0473 氟虫腈硫醚 Fipronil-Sulfide 重复性限（r）0.0006 0.0053 0.0545 再现性限（R）0.0019 0.0194 0.2929
