1、ICS 11.220 B 41 DB37 山东省 地方标准 DB37/T 4039 2020 鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of fipronil and its metabolite residues in chicken by liquid chromatography tandem mass spectrometry 2020 - 07 - 09 发布 2020 - 08 - 09 实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 4039 2020 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 试验原理
2、 . 1 4 试剂或材料 . 1 5 仪器设备 . 2 6 试样的制备 . 2 7 试验步骤 . 2 7.1 提取 . 2 7.2 净化 . 2 7.3 标准曲线的制备 . 2 7.4 测定 . 2 8 数据处理 . 4 9 检测方法的准确度和精密度 . 4 9.1 准确度 . 4 9.2 精密度 . 4 附录 A（资料性附录） 氟虫腈及其代谢物参考质量色谱图 . 5 DB37/T 4039 2020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：山东省兽 药质量检
3、验所、威海市畜牧业发展中心。 本标准主要起草人：尹伶灵、陈玲、李有志、杨修镇、刘少宁、魏秀丽、牛华星、张呈军、陈志强、 赵国清。 DB37/T 4039 2020 1 鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了鸡肉中氟虫腈及其代谢物（氟甲腈、氟虫腈硫醚和氟虫腈砜）残留量检测的液相色谱 串联质谱测定方法。 本标准适用于鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的检测。 本方法检出限为 0.5 g/kg，定量限为 2.0 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的 版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新
4、版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 试验原理 鸡肉中的氟虫腈及其代谢物经乙腈提取后，加入氯化钠进行分层，经 PRiME HLB固相萃取柱净化后， 液相色谱 -串联质谱负离子模式测定，基质匹配外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。 4.1 水：符合国标 GB/T 6682 一级水的规定。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 氯化钠。 4.4 20 %乙腈水溶液：准确量取乙腈（ 4.2） 20 mL，加水稀释至 100 mL。 4.5 氟虫腈对照 品、氟虫腈砜对照品、氟虫腈硫醚对照品和氟甲腈对照品，含量 95 %。
5、4.6 氟虫腈及其代谢物标准储备液：分别准确称取氟虫腈对照品、氟虫腈砜对照品、氟虫腈硫醚对照 品和氟甲腈对照品（ 4.5）各 10 mg，分别置于 100 mL 容量瓶中，用乙腈（ 4.2）配制成标准储备液 (100 g/mL)，转移至棕色试剂瓶中后，避光储存于冰箱中 (-20 )备用，有效期一年。 4.7 氟虫腈及其代谢物混合标准工作液：分别精密吸取氟虫腈和 3 种代谢物标准储备液（ 4.6）各 100 L，置于同一 10 mL 容量瓶中，用 20 %乙腈水溶液（ 4.4）稀释 至刻度摇匀，配制成浓度均为 1 g/mL 的混合标准工作液，避光 0 4 保存，有效期 2 周。 4.8 PRiM
6、E HLB 固相萃取柱 1)或性能相当。 4.9 有机滤膜： 0.22 m。 1) 非商业性声明：本试验是利用此固相萃取柱做的净化处理，此处列出的固相萃取柱仅是为了提供参考，并不涉 及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同型号的固相萃取柱。 DB37/T 4039 2020 2 5 仪器设备 5.1 液相色谱 -串联质谱仪：配电喷雾离子源（ ESI）。 5.2 分析天平：感量 0.000 01 g、 0.01 g。 5.3 均质机。 5.4 涡旋混合器。 5.5 离心机：转速不低于 4 000 r/min。 6 试样的制备 取适量新鲜或冷藏的鸡肉，均质机搅碎， -20 以下保存。 7 试验步骤 7.
7、1 提取 称取试样 2 g（精确至 0.01 g），置于 50 mL离心管内，加水 10 mL，涡旋 1 min。再加乙腈（ 4.2） 10 mL，振荡 10 min。然后加入氯化钠 4 g（ 4.3），剧烈振摇 1 min， 4 000 r/min离心 5 min。 7.2 净化 取上清液 0.5 mL淋洗 HLB固相萃取柱，流出液弃去。再加入上清液 1.5 mL，过 HLB固相萃取柱，收集 流出液备用。精密吸取上述流出液 0.5 mL加水定容至 1.0 mL， 0.22 m滤膜过滤后，供液相色谱 -串联 质谱测定。 7.3 标准曲线的制备 用基质液分别制备成系列浓度为： 0.1 g/L、
8、0.2 g/L、 0.5 g/L、 1.0 g/L、 2.0 g/L、 5.0 g/L、 10.0 g/L的标准工作液，供液相色谱 -串联质谱测定。 7.4 测定 7.4.1 色谱参考条件 色谱柱： C18 50 mm 2.1 mm，粒径 1.7 m，或相当者。 流动相：流动相 A：乙腈；流动相 B：水。 流速： 0.2 mL/min。 进样量： 2 L。 柱温： 35 。 流动相梯度洗脱条件见表 1。 表 1 流动相梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min A 相 % B 相 % 0 0.2 20 80 2.0 0.2 70 30 DB37/T 4039 2020 3 表 1 流动相梯
9、度洗脱条件 （续） 时间 min 流速 mL/min A 相 % B 相 % 3.5 0.2 90 10 4.5 0.2 20 80 6.0 0.2 20 80 7.4.2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描模式：负离子扫描。 检测方式：多反应离子检测（ MRM）。 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮或其他合适气体。 锥孔电压、碰撞能量等应优化至最优灵敏度。 监测离子参数情况见表 2。 表 2 氟虫腈及其代谢物的定性定量离子对以及锥孔电压、碰撞能量 药 物 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 氟虫腈 435.1 329.9 435.1 329.9 8
10、18 435.1 249.9 26 氟虫腈 砜 451 281.7 451 281.7 26 32 451 415 24 氟虫腈 硫醚 419.1 262 419.1 262 8 34 419.1 383.1 16 氟甲腈 387 350.9 387 350.9 20 14 387 281.9 48 7.4.3 定性测定 通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各 色谱峰的特征离子相对照定性。试料与标准品保留时间的相对 偏差不大于 2.5 %；试料特征离子的相对 丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度偏差不超过表 3的规定，则可判断试料中存在氟虫腈及其代谢
11、物残 留。 表 3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 （ %） 50 20 至 50 10 至 20 10 允许的相对偏差 （ %） 20 25 30 50 7.4.4 定量测定 取基质匹配标准对照溶液和试料溶液，按外标法，以峰面积定量，标准对照溶液及试料溶液中的待 测物响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱 -质谱条件下，标准对照溶液中特征离子参考质 量色谱图参见附录 A。 DB37/T 4039 2020 4 8 数据处理 试料中待测物的残留量（ g/kg）按式（ 1）计算： 20 mA VACX S S . (1) 式中： X 供试试料中待测物残留量，单位为微克每
12、千克（ g/kg）； CS 基质标准工作液中待测物的浓度，单位为微克每升（ g/L）； A 供试试料中待测物的色谱峰面积； AS 基质标准工作液中待测物的色谱峰面积； V 试料溶液定容体积，单位为毫升（ mL）； m 供试试料质量，单位为克（ g）； 20样品的稀释倍数。 注： 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 9 检测方法的准确度和精密度 9.1 准确度 本方法在 2.0 g/kg 100 g/kg添加浓度水平上的回收率为 70 % 110 %。 9.2 精密度 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的 15 %。 DB37/T 4039 2020 5 A A 附 录 A （资料性附录） 氟虫腈及其代谢物参考质量色谱图 图 A.1 氟虫腈参考质量色谱图 图 A.2 氟虫腈砜参考质量色谱图 图 A.3 氟虫腈硫醚参考质量色谱图 DB37/T 4039 2020 6 图 A.4 氟甲腈参考质量色谱图 _
