1、ICS 65.020.30 B43 备案号:12264-2002 北+口小市地方标准DB lllT 150.2一-2002奶牛饲养管理技术规范第2部分:繁殖Specification of DaICattle Feeding Management Technology P征t2: Reproduction 2002-02-27发布2002-04-01实施北京市质量技术监督局发布DBll厅150.2-2002目欠前言. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . II I 范围. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 规范性引用文件. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3、 . . . . . . 1 3 术语和定义. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 人工授精.3 4. 1 种公牛.3 4. 1. 1 对种公牛的基本要求.3 4. 1. 2 种公牛的营养.3 4. 1. 3 种公牛生殖器官的检查.3 4. 1. 4 种公牛的保健.4 4. 1. 5 采精.4 4. 1. 6 精液冷冻. 4 4. 1. 7 精液质量标准.4 4.2 母牛.4 4.2.
4、1 繁殖指标.4 4.2.2 发情和发情鉴定.5 4.2.3 配种.5 4.2.4 娃振和娃振诊断.6 4.2.5 繁殖障碍牛的管理.6 4.2.6 产科管理.6 4.2.7 记录.7 5 胚胎移植.7 5. 1 供体牛的选择标准.7 5.2 超数排卵.8 5.3 胚胎的冷冻保存与解冻.8 5.4 受体牛的选择与准备. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 5. 5 移植. . . . . . . . . . . . . . . .
5、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 5.6 胚胎移植记录. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 附录A(规范性附录)繁殖指标计算方法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6、 . . . . . . ., 12 附录B(规范性附录)人工授精记录表格. . . . . . . . . . . . . . . . . . ., . . . . . 16 附录c(规范性附录)胚胎移植记录表格.四DBllrr 150.2-2002 目IJ吕DB11!T 150 10000 3.8 5.1.2 营养状况良好，不过肥。5.1.3 生殖机能正常a)具有正常发情周期:乳蛋白率% 3.2 b)卵巢丰满，具有定的弹性和体积:PTAM kg 500 c)超排开始时，卵巢土应有发育良好的黄体。无繁殖疾病。5.2 超数排卵5.2.1 超排制度5.2. 1. 1 两次超排的间隔天数为70天9
7、0天:5.2.1.2 连续超排4次5次后，应自身娃振一次:PTAF % 0.05 5.2.1.3 对第次超排无反应的牛进行第二次超排，再无反应时，不再用作供体。5. 2. 2 超排程序采用FSH和氯前列烯醇(以下简称PG)注射程序。PTAP % 0.05 5.2.2.1 FSH的总剂量为9.0 mg9. 8mg，于供体牛发情周期的9天13天开始剂量递减注射，注射期为4.5天，每日上、下午各一次，共9次。5.2.2.2 PG的总剂量为1.Omg，于注射FSH的第三天分二次注射，上午0.6吨，下午0.4mgo5. 2. 3 输精5.2.3.1 供体牛发情后需进行两次输精。在最后注射FSH当天下午发
8、情的，在当天晚上进行第一次输精，第二天上午进行第二次输精。输精剂量为通常的2倍3倍。两次输精应使用同一头公牛的精液。5.2.3.2 在注射PG前开始发情的，应立即停止注射FSH，不要配种。5.2.3.3 在注射PG后不到30小时发情的，应在发情后停止注射FSH并配种。5.2.3.4 对迟于PG注射后56小时发情的，应按方案注射完药物，等待发情后输精。5.2.4 采卵5.2.4.1 供体牛超排发情后的第7天用二路或三路式采卵管进行非于术采卵。冲卵液总量为1000ml，每测子宫角各500ml。5.2.4.2 为保证供体牛安静，便于操作，采卵前需注射静松灵1ml 1. 5mlo 5.2.4.3 先冲
9、超排效果较好的一侧子宫角，后冲另一侧子宫角。5.2.4.4 要保证无污染操作。采卵管的前部不要用于触摸或碰触阴门外部。5.2.4.5 采卵管插入深度要符合技术要求，即气囊要在小弯附近，离于宫角底部约10cmo气囊的打气量为18ml20ml。5.2.4.6 冲卵时，进液速度应慢，出液速度应快:先少量进液，再逐渐加大进液量，每次进液量范围在30ml 50ml之间。要防止冲卵液的丢失。8 OBl1厅150.2-20025.2.4.7 采卵后，供体牛应肌注PGO. 4mg 0 . 6吨，子宫灌注抗菌素。5.2.5检卵5.2.5.1 集卵杯的处理把集卵杯内的回收液在室温180C220C下静置20分钟30
10、分钟，然后将上清液通过集卵漏斗慢慢清除，最后集卵杯内剩下30ml50ml回收液，摇动集卵杯将其倒入q;100mm培养皿内。用PBS液冲洗集卵杯壁2次3次，清洗液倒入集卵漏斗。另一侧子宫角回收液做同样处理。集卵漏斗最后保留的20ml左右液体倒入另一q;100mm培养皿中。上述培养皿待镜检。5. 2. 5. 2 检卵步骤把盛有冲卵回收液的培养皿放在立体显微镜下，从左向右、从上到下地检查，不可遗漏，用微量取样器，检出胚胎放入盛有保存液的q;35mm培养皿中。5.2.6 胚胎质量鉴定5.2.6.1 鉴定发育阶段与胚龄是否相符在发情周期第七天采集的胚胎应处于桑植期至扩张囊胚期。若冲出的胚胎不处于该阶段，
11、则该胚胎不可用。各发育期胚胎的详细特征如下:a)桑榷胚CM):卵裂球隐约可见，细胞团体积几乎占满卵周间隙。b)致密桑擅胚(CM):卵裂球进一步分裂，看不清细胞之间的界线，细胞团收缩变紧，占卵周间隙的60%-70%。c)早期囊胚(EB):出现透亮的囊胚腔，此时的滋养层和内细胞团尚难于区分，细胞团占卵周间隙的70%-80%。d)囊胚(BL):囊胚腔扩大，滋养层细胞分离，细胞团充满卵周间隙。e)扩张囊胚(EXB):囊胚腔充分扩张，体积增至1.2倍1.5倍，透明带变薄，相当于原厚度的1/30 5.2.6.2 鉴定胚胎的形态结构观察胚胎的透明带是否破裂:细胞是否紧密完整，有无游离细胞:胚胎的透明度是否正
12、常，如变暗，说明细胞可能变性;细胞大小是否一致。5. 2. 6. 3 胚胎的分级标准将胚胎分成A、B、C、D四个等级，其中A、B、C级胚胎为可用胚胎.0级胚胎为不可用胚胎。各级胚胎的标准见表3。5.2.6.4 对于较难判定的胚胎，可以在体外培养4小时6小时后，观察胚胎的发育能力，以此来判断胚胎是否可用。5.2.6.5 检卵和胚胎质量评定时.头供体的胚胎应在一起检查，不得混入其它供体的胚胎。5.3 胚胎的冷冻保存及解冻5.3.1 胚胎的冷冻保存9 DBll厅150.2-2002表3胚胎等级标准A级胚胎形态完整，处于正常的发育阶段，外形匀称，胚胞呈球形。分裂球大小均匀，结构紧凑，透明度适中，没有或
13、有少量游离细胞(少于10%)。B级发育稍缓慢，胚胎有小的破损，有少量游离细胞(少于20%)，内细胞团完整，胚胞仍呈球形，细胞之间连结紧密。C级发育迟缓12天，卵裂球大小不均匀，透明度变化明显(太明或太暗)，胚胞破损较大(大于30%，小于50%)，细胞连结不够紧密，但胚胞仍呈球形，有明显的细胞团结构。D级发育迟缓(2天以上)，比C级胚胎的缺损更大。未受精卵。5.3. 1. 1 胚胎冷冻保存所需溶液:a)保存液:含有0.4%牛血清蛋白的PBS液。b) 10%甘油冷冻液:用保存液配制。c) 1. 5M乙二醇冷冻液(含o.1M庶糖):用保存液配制。注:洛液在使用时，先用细菌滤器过滤。5.3.1.2 冷
14、冻前将胚胎在保存液中冲洗10次，然后直接放入冷冻液，并采用三段法，将胚胎装入细管。5.3.1.3 将细管放到冷冻仪架上，开始冷冻。5.3.1.4 胚胎冷冻程序a)用10%甘油/保存液做冷冻剂胚胎保存液洗10次10%甘油/保存液装管约15分钟20分钟冷冻仪(-6.0C)-6.0C平衡5分钟植冰(7秒10秒)继续平衡5分种以(0.4C0.6C)/分钟的速率下降-32C平衡5分钟投入液氮。b)用M乙二醇(含O.1M煎糖)/保存液做冷冻剂胚胎保存液洗10次1.5M乙二醇/保存液装管约15分钟20分钟冷冻仪(-7.0C)在-7.0C平衡5分钟植冰(7秒1O秒)继续平衡5分钟以(0.4C0.6C)/分的速
15、率下降-35C平衡5分种投入液氮。5. 3. 2 冷冻胚胎的解冻5.3.2.1 胚胎解冻所需溶液:a)保存液:含0.4%牛血清白蛋白的PBS液:b)解冻液:1M煎糖/保存液。5.3.2.2 胚胎解冻方法a) 10%甘油/保存液冷冻胚胎的解冻:装胚细管空气浴(18C25C)10秒32C水浴10秒揩干细管剪去细管塞推出胚胎解冻液4分钟保存液，冲洗5次6次镜检装管细管装入移植枪移植(胚胎解冻后30分钟45分钟内移入受体)。b) 1. 5M乙二醇/保存液(含0.1庶糖)冷冻胚胎的解冻(直接解冻移植法): 装胚细管32C水浴10秒揩干细管用70%酒精棉球擦拭细管，晾干剪去细管塞把细管装入移植枪移植(胚胎
16、解冻后5分8分钟内移入受体)。10 DBll厅150.2-20025.4 受体牛的选择与准备5.4.1 受体牛的选择要求5.4.1. 1 应尽量选择产奶性能相对较差的奶牛、杂种牛或黄牛。5.4.1.2 身体健康，营养状况正常，没有全身或生殖器官感染，没有寄生虫及传染病。5.4. 1. 3 生殖机能正常，发情周期正常。移植时，卵巢上有良好的功能性黄体存在。5.4.1.4 18月龄21月龄、体重380kg400kg的青年牛或成年母牛。5.4.2 受体牛的准备采用自然发情的受体牛时，受体牛的数量应按供体牛的5倍准备。若没有足够数量的同期受体牛，可用PG或孕激素阴道栓对备用受体牛进行同期发情处理。5.
17、5 移植5.5.1 移植原则胚胎移植时，为了达到最佳的受胎结果，优良胚胎应该移植给具有优良黄体的受体。5.5.2 移植制度5.5.2.1 受体牛自处理的前三周至移植后的-个月内，都不应受到应激作用(如:改变饲料、免疫接种，驱虫等)。5.5.2.2 移植后的一个月内，要与其他牛分栏饲养。5.5.3 移植操作程序清洗消毒外阴，扒开外阴唇插入移植器至子宫颈外口一只手进直肠，采用直肠把握法导入移植器过子宫颈至移植侧子宫角(黄体侧)至移植部位(小弯或稍后)慢慢推出胚胎移植器返回O.5cm，转一下移植器(防止胚胎丢失)退出移植器。注意整个操作，手法要轻缓。5.6 胚胎移植记录供体牛的超排方法与发情配种情况
18、、采卵情况、检卵情况以及受体牛的发情情况、移植情况需用专门的记录表详细记录。记录表见附录C。11 DBllff 150.2-2002 附录A(规范性附录)繁殖指标计算方法A.l 年总受胎率指年内受胎母牛总数与受配母牛总数的百分比。年受胎母牛总数总受胎率=年受配母牛总数A. 2 年情期受胎率指年内受胎母牛总数与受配情期总数的百分比。年受胎母牛总数年情期受胎率=年受配情期总数A. 3 年空怀率指年内平均空怀头数与平均饲养头数的百分比。年平均空怀头数年怀率=-:一年注:年平均空怀头数的计算方法为:年内年满18月龄以上母牛的总空怀天数除以3650年平均饲养头数的计算方法为:年内年满18月龄以上母牛的总
19、饲养日数除以3650A.4 年综合受胎指数12 是以总受胎率、情期受胎率、空怀率为基础数据的牛群繁殖力综合指标。Q=乓XP2 X (1- P3) 式中:一综合受胎指数P，一总受胎率Pi一情期受胎率P3一空怀率式中所得Q值越大，表示总体受胎水平越高。(A.l ) . (A.2) . (A.3) (A.4) DB 11ff 150.2一-2002A.5 年漏情率指年内大于正常发情周期天数一倍以上的发情周期期数占总发情周期期数的百分比。年内运42天的发情周期期数年漏情率=.: -. .-: .: .:.: xl00% 年内发情周期总期数A. 6 初配受胎率指青年母牛首次配种的受胎率。首次配种即受胎的
20、青年母牛数初配受胎率=首次配种的青年母牛数A. 7 产后第一次配种受胎率指成年母牛产后第一配种情期的受胎率。产后第一配种情期受胎母牛数产后第一次配种受胎率=: -: :._，: : =-xl00% 产后第一配种情期配种母牛数A.8 胎间距指牛群中全部母牛两次产较之间的平均间隔天数。式中:亨胎间Jl:胎间距=生一一-_n Z胎间距一参加统计母牛两次产较之间间隔天数的总和n一统计头数A. 9 初产月龄指牛群中全部青年母牛首次产棋的平均年龄，即由青年牛转为成母牛的平均年龄。y青年牛首次产棋年龄初产月龄=式中:n Z青年牛首次产按年龄一参加统计青年牛首次产按年龄的总和n一统计头数A.10 产棋后50天
21、内出现第一次发情的母牛比率. CA.5) CA.6) CA.7) . CA.8) CA.9) 13 DB l1lT 150.2一2002指成母牛群中产后50天内出现发情母牛占同期分娩母牛的百分比。产棋后50天内发情母牛头数产棋后50天内出现第一次发情的母牛比率_v-/.:，_: .YxlOO% . (A.I0) 同期分娩母牛头数A. 11 正常发情周期的比率指全群母牛出现的发情周期总数中，属于18天24天正常发情周期所占的百分比。全群母牛出现的正常发情周期数正常发情周期比率=全群母牛出现的发情周期总数A. 12 产后第一次配种的平均天数指分娩日(0天)到产后首次配种日的平均间隔天数。Y分娩日到
22、首次配种日间隔天数产后第吹配种的平均天数=d式中:n Z分娩日到首次配种日间隔天数一参加统计母牛从分娩日到首次配种日间隔天数的总和n 参加统计头数A.13 配种三次以下即孕母牛比率. (A.ll) . (A.12) 指全群母牛在三个受配情期以下(含三个情期)即配孕的母牛占同期所有参加配种母牛的百分比。全群三个受配情期以下配孕母牛头数. (A.13) 配种二次以下即孕母牛比率=-，-， -M PG 其它发情日期与时间:输精日期与时间公牛号剂量活力术者冲卵日期月日时|周期|天|管型| 冲卵液回收进液| | 出液| 直检结果冲卵结果获卵总数| 可用胚胎数I .不可用胚胎数i备18 注批号备注注DB1
23、 1/T 150.2-2002 表C.2 检卵记录表牛号冲卵日期直检左侧黄体数:右侧黄体数:l卵泡数l获卵数可用胚胎数不可用胚胎数总数M CM EB BL EXB 总数未受精返化2-8细胞胚胎质量评定及使用情况胚胎细管号胚胎阶段胚胎质量解冻日期解冻后等级备注鲜胚移植:冷冻胚胎:注:M-桑堪胚:CM-致密桑塔胚:EB-早襄:BL-襄胚:EXB-扩张囊胚贮存罐号|提漏号|细管数和颜色|冷冻方法:膜蛋白酶冲洗:是口否A冷冻仪型号:19 UEEdHU。-MlNOSN o 受体牛胚胎移植记录汇总表H!明发怕处理千辛自枪4主. 得!的i欠，.1:斗主|次发胚胎阶段及IJ 既月台Jf ; 飞出?11期占u-tfHJ处理药物发古发f市状况及II ,tfflJ .tf )J; t系术打11才I叫结果IJ朗编tJ竹别书JI喧II-t扣j剂量时间自枪结果t町$ilIL质垣:主)(X I、I表C，3
