1、中华人民共和国国家标准化妆品安全性评价程序和方法Procedures and methods of safety evaluation for cosmetics 1 目的UDC 668. 53 . 001. 4 GB 7 9 1 9 8 7 为向r大消费者提供符合卫生要求的化妆品，防止化妆品对人体产生近期和远期危害，特制定本程序和h法。2 适用范围本程序相方法适用于在我国生产和销售的一切化妆品原料和化妆品产品。3 化妆品安全性评价程序3. 1 第4阶段急性毒性和动物皮肤、粘膜试验3, 1. 1 急性毒性试验3.1.1.1 急性皮肤毒性试验。3.1.1.2 急性经口毒性试验。3, 1. 2 动
2、物皮肤、粘膜试验3.1.2.1 皮肤剌激试验。3.1.2.2 眼剌激试验。3.1.2.3 皮肤变态反应试验。3.1.2.4 皮肤光毒和光变态反应试验。3, 2 第二阶段亚慢性毒性和致畸试验3, 2. 1 亚慢性皮肤毒性试验。3, 2. 2 亚慢性经口毒性试验。3, 2. 3 致畸试验。3, 3 第兰阶段致突变、致癌短期生物筛选试验3, 3, 1 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）。3, 3, 2 体外哺乳动物细胞染色体畸变和SCE检测试验。3, 3, 3 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变率检测试验。3. 3. 4 动物骨髓细胞微核试验。3, 3, 5 小鼠精子畸形检测试验。3, 4 第四阶段
3、慢性毒性和致癌试验3, 4, 1 慢性毒性，试验。3. 4, 2 致癌试验。3, 5 第丘阶段人体激发斑贴试验和试用试验。中华人民共和国卫生部198705 28批准1987 10 01实施I I GB 7 91 9 8 7 4 对化妆品原料和化妆品产品安全性评价的规定4. 1 凡属T化妆品新原料，必须进门五个阶段的试验。4. 2 凡属于含药物化妆品必须进行动物急性毒性试验、皮肤与粘膜试验和人体试验，但是根据化妆品所含成分的性质、使用方式和使用部位等因素，可分别选择其中几项甚至全部试验项目。4. 3 凡属于化妆品新产品必须进行动物急性毒性试验、皮肤与粘膜试验和人体试验，但是根据化妆品所含成分的性
4、质、使用方式和使用部仪等因素，可分别选择其中几项甚至全部试验项目。4. 4 1-L进口化妆品主由进口单位提供安全性评价资料。5 化妆品安全性评价试验方法5. 1 怠性皮肤毒性试验人体接触化妆品主要途径是皮肤。当评价化妆品及其成分对人体健康的可能危害时，进行皮肤毒性的研究是必不可少的。5. 1. 1 H的确定受试物能否经皮肤渗透和短期作用所产生的毒性反应，并为确定亚慢性试验提供实验依据。5. 1. 2 定义系指受试物涂敬皮肤一次剂量后所产生的不良反宫。部lid表Jj（占法z以敷用受试物的质量（g、mg）或以实验动物平均单位体重敷用受试物的质量（mg/kg）束表示。次嗽用受试物引起50%受试动物死
5、亡的剂量，称之为半数致死量（LD50）。LD50值的单位为mg或g/kg体髦。5. J. 3 动物的准备z选用两种性别成年大鼠、豚鼠或家兔均可。建议试验起始动物体重范围为大鼠200300g，豚鼠350450g，家兔2.0 3. Okg, 实验动物应在动物笼内观察35天，使其适应环境，并观察其健康状况。正式给药前2.jh，将动物背部脊柱两侧毛发剪掉或剃掉，注意不要擦伤皮肤，因为损伤能改变皮肤的渗透性，受试物涂抹处，不应少于动物体表面积的10%。各类动物体表面积计算方法见附录A。5. 1. 4 受试物的配制若受试物是固体，应磨成细粉状，并用适量水或无毒无刺激性赋形剂棍匀，以保证受试物与皮肤良好的接
6、触。常用的赋形剂有橄榄油、羊毛脂、凡士林等。若受试物是液体，一般不必稀释。5. . 5 剂量和分组：将两种性别的实验动物分别随机分为56组，若用赋形剂，需设赋形剂对照组。化学物质毒性的半数致死量（LD50）计算方法见附录B,机率单fIi. 对数图解法，每组最好10只动物。各剂量组间要有适当的组距，以使各剂量组产生一系列的毒性反应或死亡率。最高剂量可达2000mg/kg,5. 1. 6 试验方法：将受试物均匀地涂敷于动物背部，并用油纸和两层纱布覆盖，再用无刺激性胶布或绷带加以固定，以防脱落和动物舔食受试物，共敷药24儿试验结束后，可用温水或适当的溶剂清除残留的受试吻。命般观察周，若给药4天后仍有
7、动物死亡时，仍需继续观察一周。给药后注意观察动物的全身中毒表现和死亡情况，包括动物皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、自主和中枢神经系统、四肢活动和行为方式等的变化，特别要注意观察震颤、惊厥、流涎、腹泻、嗜睡、昏述等现象。凡是试验过程中死亡的动物和或有毒性反应的动物，均应进行尸检和肉眼观察。当肉眼可见病变n-t , ；土向进行病理组织学镜检。5. 1. 7 结果评价z急性毒性分级标准详见附录c.5. 2 急性经口毒性试验、可化妆品成分的皮肤毒性低时，很难测得其经皮LD50，为了解该化学物质与已知毒物的相对毒性，1二GB 7 91 9 8 7 以反山t哩幼儿l提服化妆品的！可能进行绕口毒性
8、试验也很必要。5, 2. 1 定义：系指受试物次约口饲予动物所11起的不良反应。剂量表示法lnJ急性皮肤毒性试验。5. 2. 2 B)J物的准备：分别选用两件性别的成年小鼠相或大鼠。小鼠体重1822g，大队180zoo毡，式选择摸它敏感的动物。实验前般禁食16h左右，不限制饮水。5. 2. 3 受试物浴液的配制：常用水或食用情物i由为溶剂。若受试物不溶于水或泊中，11JJij竣Ejl基纤维京、H月胶、淀粉做成混悬液。给药最大体积，小鼠小超过。.4n11/20g体重，大鼠不超过I.Oml/ I OOg体l飞。5, 2. 4 剂怡和分组：般分为56个剂量级。每组动物数5I0只根据所选LD50计51
9、Ji iJ;而定。各州挝fliJ) iH）距大小，随受试物的毒饨作用带宽窄而异。通常以较大组距和较少坠动物进行预i式，找:I:J粗略致死如l坠范用然后再i贵刊1E式试验的剂量分组。受试物最高开1):ltl:呼达5000mg/kg体重。5, 2. 5 试验方法正式试验时将动物称茧，并随机分组，然后用特制的灌胃针头将受试物次给予动物。？；估计受试物毒性很低，4次给药容积太大，可在21h内分成23次给药，但合并作为一日开1)iJ i I罚。给pj后，密切注意观察并记录动物的J般状态、中毒表现和死亡情况，并进行LD凹的it饵，其为法见附录B,5. 2. 6 结果i平价急性态悦分级标准详见附法C。5.
10、3 皮肤剌激试验皮肤刺激是指皮肤接触受试物后产生的可逆性炎性症状。5, 3. 1 试验方法的原则5,3.1.1 受试物应以一次剂量或多次剂量涂（敷）于健康的无破损的皮肤上。5,3.1.2 每种受试物至少要用1只健康成年动物（家兔或豚鼠）。5,3.1.3 试验均采用自身对照c5.3.1.4 受试物使用浓度，一般情况下，液态受试物采用原液或预计人应用的浓度。回态受试物则用水或合适赋形剂如花生泊、凡士林、羊毛脂等），按1 1浓度调制。5.3.1.s 凡具有高度皮肤毒性，或pH11.5的化学物质，均不进行本项试验。5. 3. 2 试验方法5.3.2-1 急性皮肤刺激试验（一次皮肤涂抹实验）5,3.2.
11、1.1 试验前24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、有各约3cmX6cm, 5,3.2.1.2 取受试物O.lml(g）滴在2.5cm 2. 5cm大小的四层纱布上敷贴在一侧皮肤上，或直接将受试物涂在皮肤扛，然后用层油纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧涂赋形剂作为对照。敷fll时间J般为21h，亦可4次敷用仙。试验结束后用温水或无刺激性溶剂除去残留受试物。5.3.2.1.3 于除去受试物后的I、24和48h观察涂抹部位皮肤反应，按表l和表2进行皮肤反应和、分和刺橄强度评价。GB 7 9 1 9 8 7 表I皮肤刺激反应评分生l斑形成平只分Jc!LJ;1 勉
12、强njl 明，；红斑I等严草！rJ蜓紫红色红斑JIf自u：、耐形成。1234在肿形成兀4肿勉强叮见皮肤降起轮廓清楚1）肿隆起约Imm4肿隆起超过Imm，范围扩大。l234也分8 表2皮肤剌激强度评价强j且分值Ji.刺激性轻刺激性中等刺激性强剌激性。0.4 0 5 I 9 2. 0 5 9 6 0 8 0 5.3.2.2 多次皮肤刺激试验5.3.2.2.1 先将实验动物背部脊柱两侧皮肤的毛剪掉或剃掉，去毛范围备为2.Scm X 2. Scm。5.3.2.2.2 取受试物0.1 O. Sm! (g）涂抹在一侧皮肤上，另一侧涂赋形剂作为对照，每天涂抹l2次连续涂抹14天。每次涂药前应剪毛，不得损伤皮
13、肤，保证受试物与皮肤充分接触。5. 3. 2. 2. 3 每天观察皮肤反应，按表1评分。脱屑积分为I。最高刺激指数为14（观察次数）8（总积分数）112.实验结束用角膜环钻取涂抹部位皮肤进行病理组织学检查，按表3评分s. 3. 3 结果评价战t述评定标准和指标的最高分值判断受试物的皮肤刺激作用的有无或刺激的强弱。多次皮肤剌激试验刺激指数超过30、病理组织检查积分超过4，应判断受试物对皮肤有明显刺激性。在许多情况r.家兔和豚鼠对剌激物质较人敏感，从动物试验结果外推到人可提供较重要的依据。5. 4 眼剌激试验tt刺激性是指眼表面接触受试物后产生的可逆性炎性变化s. 4. 1 试验方法的原则s. 4
14、. 1. 1 受试物应以一次剂量或多次剂量滴入（涂入）或喷洒眼内。5.4.1.2 每种受试动物的眼睛应保证无任何炎性反应和眼损伤。5.4.3 每组试验动物数至少4只，采用自身对照，首选动物为家兔。5.4.1.4 受试物使用浓度一般用原液或用适当无剌激性赋形剂配制的50%软膏或其他剂梢。5.4.1.5 己证明有皮肤刺激性的物质，不必进行本项试盼。5. 4.2 试验方法I I GB 7 91 9 - 8 7 1!l I芷Ck皮沟1r:; ）飞在！芷11市jjJ:) B. lfJ化ilI芷( b）颗丰tL：增！宇(c)ffjJ,!Jlilf ! i眼附近乎闭介3 ！）：！iii H进超过中闭合4 C
15、甘地物k 。少世什Ill物廿泌物使眼险和睫毛潮海或粘着2 廿泌物史哲2个眼jj(潮或粘着3 总积分IA+B+C）2最高积分为20角膜、虹膜和结膜反！I.罪力II最高积分J句1l 0 I G GB 7 9 1 9 8 7 表5ii.刺激性评价标准2竹1111刺激积分十Hll:llM利i版的T均指数Ill！例激个体指数刺激ft川( I、A、0、！）立使受试物有足够的时间穿透皮肤，一般大于30min，并确证受试物存留在皮肤内。5.6.1-7 如已证明受试物具有光毒性，可以不做光变态反应试验。5. 6. 2 皮肤泥毒试验方法I !l GB 7 9 l 9 8 7 5.s.2.1 先将实验动物背部脊柱侧
16、的毛剪掉，去毛范罔为3cmX 8cm（见图2）。口口口II! 2 5.s.2.2 月11j1波紫外线叮照射去毛l丘，时间以秒为单位，分几档，测定MED。5.s.2.3 1阻察确定照射后82h引起一度红斑（刚刚可见）的照射时间为1个MED。5.6.2.4 而l试验3夭后，用剪刀再将实验动物背部脊柱两侧去毛共四块，范围每块2cmX2cm（见网:i ）。囚囚囚囚图35.6.2.5 将受试物。，05O.lml(g）均匀涂在l、2脱毛区，并用黑纸覆盖避光。5.s.2.s 涂药30min后，第一脱毛区用亚MED的中波紫外线灯照射g第二脱毛区用黑纸覆盖不于照射；第二Ji(f（用iJY.MED的中波紫外线照射
17、，不涂药；第四民作空白对照，不给予任何处理。5.s.2.1 照射后l、24和48h，观察皮肤反应，按表6进行皮肤反应强度的评价。5.s.2.s 结果评价！、L实验功物第一次与受试物接触，并在光能作用下引起类似晒斑的局部皮肤炎症反应，Rl可认为该受试物具有光毒作111。5. s. 3 皮肤此变态反应试验5.6.3.1 i茸导阶段z实验动物颈部用脱毛剂脱毛2cmX 1cm，于脱毛区四角皮内注射福氏完全佐齐1J(FCA）件。in1 I ( 1r. 钊，j）。 GB 7 9 1 9 8 7 。，Qedrptt巴图4s.s.3.2 于脱毛区涂20%十二烧基硫酸饷（SLS）溶液，再将受试物O.I ml(g
18、）涂在该脱毛部位。s.s.3.3 用波民在280400nm的中长波紫外线灯照射涂药部位，距离和时间以产生明显红斑为准。中波紫外线的照射剂量为6.6J/cm,i;波紫外线为10J/cm 5日.3. 4 隔日重复5.6.3.2及5.6.3.3步骤，共5次。s.s.3.s 激发阶段：子诱导操作后两周，将实验动物背部脊柱两侧脱毛.5cm I. 5cm块，共4块（见罔5）。囚囚囚囚图5s.s.3.s 第1块涂受试物。.I r时后30min用长波紫外线照射；第2块涂受试物后用黑纸遮盖不照射：第3块不涂受试物，仅用长波紫外线照射；第4块用黑纸遮盖，不涂受试物，亦不照射。s.s.3.7 照射后24、48和72
19、h，现察皮肤反应，按表5进行皮肤反应强度评分。5.6.3.8结果评价凡化学物质单独与皮肤接触无作用经过激发接触和特定波长光照射后，局部皮肤出现红斑、水肿、甚而l全身反应，而未照射部位无此反应者，可认为该受试物是光敏感物质。s. 7 人体激发斑贴试验和试用试验SI GB 7 9 1 9 8 7 版发斑贴试验是借用皮肤科临床检测接触性皮炎致敏原的方法，进一步模拟人体致敏的全过程，预测受试物的潜在致敏原件。5. 7. 1 人体激发斑贴试验方法的原则5.1.1.1 实验全过程应包括诱导期、巾间休止期及激发期。5.7.1.2 受试物（可疑致敏原）与皮肤有充分接触时间。5.7.1-3 选Jf合适敏感斑贴部
20、位，如人体上背部或前臂屈侧皮肤。5.7.1.4 受试者所无过敏史样本数不少于25人。5.7.1.5 实验前应JoJ受试者详细介绍实验问的和方法，以取得圆满合作。5. 7. 2 试验方法5.7.2.1 将5i币I烧幕硫酸纳（SLS）液0.I ml滴在2cm2cm大小的四后纱布上，然后敷贴在受试行1背部Ji:rl1J臂屈侧皮肤1.再用破璃纸覆盖，用无剌激胶布固定。24h后将散贴物去掉，皮肤1世出现中）在红斑反应。如1尤反应调节SLS浓度或再重复一次。5.7.2.2 将0.2ml(g）受试物按上述方法敷贴在同部位上，固定48h后，去掉斑贴物，休息一日。5.7.2.3 重复5.7.2.2步骤，共同次。
21、如试验中皮肤出现明显反应，诱导可停止。5.7.2.4 F最后次诱导l叫周选择未做过斑贴的上背部或前臂屈侧皮肤两块，间距3cm,块作对照块敬贴含：述受试物0.2ml(g）的lcn1 l cm纱布，封闭固定48h后，去除斑贴物，立即观察皮肤反应。24、48和72h再观察皮肤反应的发展或消失情况。按表8和表9进行皮肤反应评定。 I 0 1. 61 I IO. 0 I t 0.士l，士2 3 . 前排系列的剂量问距较后排系列为小，结果较为精确，所以一般常选用之。l 606 AV盲E。$11313 预备试验：通常采用10,100和IOOOmg陆的剂量，各剂量使用23只动物。根据24h内动物死亡情况，估计
22、LD50的可能范围，以确定正式试验所用的剂量。正式试验按预试所确定大概的致死剂量范围选用一组适宜的剂量系列，根据四个剂量组的动物死亡数从Horn氏法LD50计算用表中，可求出LD50值及其可信限。此法的优点是简单易行，使用动物少，可用来初步了解受试物的毒性强弱。缺点是所得LD50的可信限范围较宽不够精确。B. 2机率单位对数图解法先把剂量的对数值和相应反应的机率单位用点代表画在图上（用机率对数图纸直接把剂量和死亡百分数画在因上人画线时应照顾所有图上各点，使点散布在线的上下，并使线上点的距离和线下点的距离能相互抵消，特别注意在死亡率15%到85%间的点，机率单位4与6之间的点，尽量使线接近这部分
23、的点。当直线划定后，由图直线上50%死亡率（机率单位为日的相应剂量对数值，就是半数致死量(LD50）的对数值，经反对数变换后即得LD50的剂量。半数致死量（LD50）的可信限估计z先求LD50的标准差s, (BI ) x, x，相当于r, 6、1, 1 （概率单位）时相应的x轴上的对数剂量。估计logLD50的标准误：oMJV; ( B2) 式中,y 反应为1684%之间所用试验动物数。半数致死量对数值的95%口I信限为logLD50+I. 96 S logLD50，经反对数变换后，可得到jLD50的95%可信限剂量该法要求：一般每剂量组使用不少于10只动物，但各组动物数不一定均等。此法不要求
24、剂量组呈等比关系，但等比可使各点距离相等，利于作图。本法优点是，不需烦琐的计算。 no GB 7 91 9 - 8 7 B. 3 寇氏法（Karbermettod) 该法是种1l赁简便，易j三理解，而且计算结果比较准确的一种方法。ff本方法设计时，剂量范围可宽些，剂量组必须多，但组间对数剂量差（组距）可以小些。顶备试验般以求得动物全死（或90%以上死亡的剂量）和动物不死亡（或I0%以下死亡的剂Ii) .让别作为正式试珑的最高与最低剂量。配式试验：般设510个剂量组D将上述最高、最低剂量均换算为常用对数，然后将最高、最低剂桔的对数差按所需要的组数，分为几个对数等距（也可以不等距）的剂量组。试验结
25、果的1挠和统tI. 列出试验数据及其计算表包括各组剂量（mg/kg）、对数剂量（川、动物数（川、动物死亡数仆人均物死亡时分比仰，以小数表示）以及统计公式中要求的其他计算数据项目。2. LD50的计算公式：根据试验条件及试验结果，可分别选用下列三个公式中的一个，求出log! 0500 、。按本试验设计得出的任何结果，均可用式（B3),ogl 050 专：，：（x，十X,)(P,+,P,) (B3) 式中：x，与x,t及P，与P，们分别为相邻两组的剂量对数以及动物死亡百分比。必按本试验设计，且各组间剂量为对数等距时，可用式。的：logLD50 X, 1/2L(P, + P） (B4) 式中x. 最
26、高剂量对数；d 相邻两剂量对数值的差数。 若试验条件同，且最高、最低剂量组动物死亡百分比分别为I.0 （全死和0（全不死）时，则11J月1吏f由于计算的式（85)ogLD50 = X, d(LP 0. 5) 式中川各组动物死亡百分比之和。3. 标准误与95%可信限0logLD50的标准误（s) (B5) .(B6) ;l丁95%可信限zlog -(logLD50士！.96SlogLD50）”（日门币级别f监d手时it拉哼品低T茸实际JL;Af附加说明：GB 7 91 9一年87附录E化学物质的急性毒性（LD50）分级（补充件）k鼠经l1 LOSO (mg/kg) I 二主I50注50500?500 5000 二三5000本标准1!1中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。本标准由“化妆品安全性评价程序和方法”起草小组负责起草。本标准主要起草人徐凤丹、贺锡雯、秦程慧、刘景忠。本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释。兔涂庄LDSO(mg/kg) S 35 44 二三443503350 2180 二三2180o7
