1、ICS 67.040 X 04 中华人民圭t/、和国国家标准粮油检验GB/T 5522-2008 代替GB/T5522-1985 粮食、油料的过氧化氢酶活动度的测定Inspection of grains and oils- Determination of hydrogen peroxidase activity of grain and oilseeds 2008-11-04发布中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会2009-01-20实施发布GB/T 5522-2008 目。昌本标准代替GB/T5522-1985(粮食、油料检验过氧化氢酶活动度测定法。本标准与GB
2、/T55221985相比主要变化如下z一一增加了术语和定义;一一修改了高锺酸饵标准溶液的浓度和过氧化氢溶液的浓度;一一统一了反应温度和时间;二一增加了检测结果的重复性要求。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位:安徽省粮油产品质量监督检测站、河南工业大学、国家粮食局成都粮食储藏科学研究所、天津市粮油检测站。本标准主要起草人z季一顺、周红梅、张浩、李雪琴、程建华、赵淑援、汪桃花、吴云、王静。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一-GB/T5522-1985 0 I GB/T 5522-2008 粮油检验粮食、油料的过氧化氢酶活动度的测定1 范围本标准规定
3、了粮食、油料中过氧化氢酶活动度测定的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器与用具、试样制备、操作步骤、结果计算及重复性。本标准适用于粮食、油料中过氧化氢酶活动度的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 601 化学试剂标准滴定溶液的制备GB 5491粮食、泊料检验抨样、分样法GB/T 5497粮食、油料检验水分测定法GB/T 6682 分析实验室用水规格
4、和试验方法(GB/T6682-2008 , IS0 3696 :1 987 : MOD) 3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 过氧化氢酶活动度hydrogen peroxidase activity; HP A 规定条件下，一定量试样中的过氧化氢酶与过氧化氢作用所消耗的过氧化氢量，用每克试样(干基)所消耗的过氧化氢毫克数表示。4 原理在pH7.7条件下，从样品中提取过氧化氢酶，在提取液中加入一定量的过氧化氢，使过氧化氢在过氧化氢酶作用下分解，再用高健酸饵溶液滴定过量的过氧化氢。根据高锺酸饵溶液的消耗量计算出试样中过氧化氢酶活动度。5 试剂和材料以下试剂均为分析纯试剂。5. 1
5、水z符合GB/T6682实验室用水三级要求。5.2 2%过氧化氢溶液:取30%过氧化氢溶液2mL，加水稀释至30mL。5.3 10%硫酸溶液:10mL浓硫酸加入90mL水中。5.4 高锺酸饵标准溶液:c(1/5KMn04)=0.2mol/L，按GB/T601配制和标定。5.5 pH7.7索伦逊磷酸盐缓冲液:A液z称取磷酸氢二锅11.876g，溶于1L水中。B液z称取磷酸二氢饵9.078g，溶于1L水中。临用时，A液、B液按9: 1混合。1 GB/T 5522-2008 5.6 石英砂。6 仪器与用具6. 1 恒温水浴锅(或恒温培养箱)。6.2 电炉。6.3 具塞锥形瓶:250mL。6.4 量筒
6、:10mL, 25 mL, 100 mL。6.5 移液管:5mL, 20 mLo 6.6 研钵。6. 7 酸式滴定管:25mLo 6.8 电热恒温干燥箱。6.9 天平:分度值0.001g。6. 10 锥形瓶:150mL。6. 11 漏斗。6. 12 比色管:50mLo 7 试样制备按GB5491进行分样。对大颗粒样品(如大豆、玉米、花生)，要预先破碎;对带壳样品，要预先脱壳。8 操作步骤8. 1 样品水分测定按GB/T5497执行。8.2 过氧化氢酶的提取z称取试样约1g(m)，精确至0.01g，倒入研钵(6.6)中。加少量石英砂(5.6) , 粗磨至无整粒样后，量取缓冲液(5.5)50mL，
7、先加入少量以润湿样品，细磨至糊状后，小心转移至锥形瓶(6.3)中，用剩余的缓冲液分多次洗净研钵，洗液并入锥形瓶中，剧烈振摇5min，静置2h-3h后过滤至比色管(6.12)中。8.3 酶活动度的测定:准确移取20.0mL滤液于锥形瓶(6.10)中，加入20mL水和3mL 2%过氧化氢溶液(5.2) ，摇匀后在300C恒温水浴锅(或恒温培养箱)(6.1)中放置15min，加入5mL 10%硫酸溶液(5.3)，摇匀，用0.2mol/L高锺酸饵标准溶液(5.4)滴定剩余的过氧化氢，滴定至微红色且30s不褪色为止，记录消耗的高锺酸饵标准溶液体积(V1)。8.4 空白试验:吸取20.0mL滤液于锥形瓶(
8、6.10)中，直接煮沸1min。冷却后加入20mL水和3mL 2%过氧化氢溶液(5.2)，摇匀后在300C恒温培养箱或水浴锅中放置15min，加入5mL 10%硫酸溶液(5.3) ，摇匀，用0.2mol/L高锺酸御标准溶液(5.4)滴定剩余的过氧化氢，滴定至微红色且30s不褪色为止，记录消耗的高锺酸饵标准溶液体积(Vo)。9 结果计算2 过氧化氢酶活动度X按式(1)计算:c . . 1 50 X二(Vo-V1 ) X、，.:11 X 17 X一X100 ( 1 ) 唱00- M) . 20 式中:X一一过氧化氢酶活动度(以干基计)，单位为毫克过氧化氢每克(mgH202/g); v。一一空白试验
9、用去高锺酸御体积，单位为毫升(mL); V1 -试样滴定用去高健酸饵体积，单位为毫升(mL); GB/T 5522-2008 c 实际高健酸锦标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L); m一-试样质量，单位为克(g); M一一试样水分含量，%;17一二与1.00 mL高健酸饵标准溶液c(1/5KMn04)=0.2mol/LJ相当的H202的质量。计算结果保留到小数点后一位。10 重复性相同的实验材料，用同样的方法，在同一实验室由同一操作人员使用同一设备在较短的时间间隔内获得两个独立的测定结果，测定结果之间绝对差值大于其算术平均值的10%的情况不得超过5%。OONlNNmH筒。华人民共和国家标准粮油检验粮食、油料的过氧化氢酶活动度的测定GB/T 5522-2008 国中骨中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张0.5字数6千字2009年1月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2009年1月第一版骨书号:155066 1-35546定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 5522-2008
