1、ICS 67060X 04 园中华人民共和国国家标准GBT 7629-2008代替GBT 7629-1987200805-27发布谷物中维生素B2测定Determination of vitamin B2 in cereals200810-01实施宰瞀嬲紫瓣警矬瞥叁发布中国国家标准化管理委员会仪1”刖 昌GBT 7629-2008本标准参考了AACC Method 8670Riboflavin-Fluorometrie Method(2000年英文版)。本标准是对GBT 7629-1987谷物维生素B2测定方法的修订。本标准与GBT 7629-1987在技术上的主要差异如下：规定了扦样、分样法
2、；盐酸提取改为硫酸提取；增加了对高空白试样氧化条件的规定；取消了按干基计算测定结果的要求；增加了谷物中维生素Bz低含量时测定重复性的要求。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家粮食局武汉粮油饲料质量监督检验中心。本标准主要起草人：杨林、屈利文、刘小敏、钱防、何一帆。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 76291987。谷物中维生素Bz测定GBT 7629-20081范围本标准规定了用荧光分光光度法测定谷物中维生素B2的原理、试剂和材料、仪器设备、试样制备、分析步骤、结果计算及重复性。本标准适用于谷物中维生素B2的测定。本标准检出限为006
3、btg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 5491稂食、油料检验扦样、分样法GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-1992，neq ISO 3696：1987)3原理维生素B2(核黄素)在445 nm光激发下产生荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与维生素B2浓度成正比。用硫酸提取试样中的维生素B2，用连二亚硫酸钠还原维生素Bz生成无
4、荧光物质。根据还原前后荧光强度之差与内标维生素B2标准溶液荧光强度的比值，计算样品中维生素B2的含量。4试剂和材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GBT 6682中三级水的规格。41硫酸溶液c(12H2SO,)=01 raolL量取28 mL浓硫酸加入水中，稀释至1 000 mL。42乙酸钠溶液c(CH3COONa)=25 molL称取340 g水合乙酸钠(CH。COONa3HzO)溶解于水中，稀释至1 000 mL。43高锰酸钾溶液c(KMnO。)=004 gmL称取4 g高锰酸钾(KMnO。)溶解于水中，稀释至100mL，使用当日配制，贮存于棕色试剂瓶中。44过氧化氢溶液c
5、(H2 02)=100 nlLL量取10 mL过氧化氢(HzOz，30)用水稀释至100 mL，现用现配。45维生素B。标准溶液451维生素岛储备溶液(I)c=25 pgmL将维生素B2置于装有五氧化二磷干燥剂的干燥器内放置24 h。准确称取50 mg维生素Bz于装有1 500 mL水和24 mL冰乙酸的2 000 mL烧瓶中，加热充分溶解，冷却，转移至容量瓶中，用水定容至2 000 mL，充分混匀后再转入棕色瓶中，滴加甲苯覆盖，贮存于冰箱(4)中。452维生素B2标准储备溶液(II)c=10 j,gmL准确吸取20mL维生素B：储备溶液(1)(451)用水稀释定容至50mL；冷藏于冰箱(4)
6、中。453维生素B2标准工作溶液()c=1 IgmL准确吸取10mL维生素马标准储备溶液()(452)用水稀释定容至100mL，现配现用，避光保存。1GBT 7629-200846连二亚硫酸钠(Na2s20。)47荧光素标准溶液471 荧光素储备溶液c=(c20H，205)50 pgmL准确称取荧光素(C：。H，。O。)50 mg，用水充分溶解，定容至1 000 mL，移入棕色瓶内，冷藏于冰箱(4)中。472荧光素标准工作溶液c=(C20H，205)005 p-gmL准确吸取荧光素储备溶液(471)1 mL，用水定容至1 000 mL，移入棕色瓶内，冷藏于冰箱(4)中。5仪器设备5，1分析天平
7、：感量0。1 mg。52高压灭菌锅或电热恒温水浴：100。53 15 mL具塞玻璃刻度试管。54容量瓶：100 mL，1 000 mL，2 000 mL。65移液管：05 mL，1 mL，5 mL，10 mL。56金属丝编织网试验筛：孔径084 mm(20目)。57干燥器：装有五氧化二磷干燥剂。68实验磨。59荧光分光光度计。6试样制备61按GB 5491进行扦样、分样。62用实验磨粉碎粒状谷物样品(如小麦、大米、玉米渣、玉米片、膨化谷物等)，通过孔径084 mm(20目)筛，混匀，装入磨口瓶中备用。7分析步骤71称样按表1推荐量称取试样m(精确至0000 1 g)，置于100 mL容量瓶中。
8、表1称取试样推荐量维生索岛含量(mgkg) 称样量g0，01，6 51640 44080 272制备样液在装有试样的容量瓶中加入01 molL硫酸(41)75 mL，混匀。置于高压灭菌锅中，在103105 Pa(相当于102 atm)的压力下加热30 min，或浸人沸水浴加热30 min，每5 rain摇动一次，防止结块。冷却至室温，加入25 molL乙酸钠溶液(42)5 mL，混匀，用水定容至100 mL，即为试样初始体积V，此时溶液的pH约为45；用中速干滤纸过滤，弃去最初的10 mL15 mL滤液，收集滤液于100 mL锥形瓶中。73杂质的氧化取15 mL具塞玻璃刻度试管2支，分别标记为
9、A和B，在A和B试管中，按表2排列顺序和剂量，分别依次加入试样溶液(72)、维生素B。标准工作溶液()(453)、水、高锰酸钾溶液(43)。每次加ZGBT 7629-2008入高锰酸钾溶液(43)后，应旋摇混匀，充分氧化，氧化时间参照表2。然后，再分别加入过氧化氢溶液(44)，摇荡试管，至试管中产生的气泡逸尽。以上操作应避免直射光。表2试剂量及氧化时间低空白试样状态时 高空白试样状态时具塞玻璃刻度试管中依次加入的溶液管A 管B 管A 管B试样溶液mL 1000 1000 1000 1000维生素Bz标准工作溶液(453)mL 100 100水mL 100 200 1。00高锰酸钾溶液(43)m
10、L 050 050 100 100氧化时间rain 2 2 4 4过氧化氢(44)mL 050 050 100 10074测定用标准玻璃片或荧光素标准工作溶液(472)调节荧光分光光度计，使其处于正常工作状态。调整激发波长为445 nm，发射波长为530 Dm，分别测定管A、管B的荧光强度A、B。样液在仪器中受激发光照射时间应不超过10 s。向B管内的溶液加人20 mg连二亚硫酸钠(46)，振摇溶解，测定其荧光强度C。若溶液浑浊不能读数，应重新进行操作。8结果计算试样中维生素B。含量按式(1)计算：x一藻等等巍鬻篇式中：x试样中维生素B2含量，单位为毫克每千克(mgkg)；A加维生素B标准工作液的试样溶液荧光强度；B加水的试样溶液荧光强度；C加入连二亚硫酸钠之后试样溶液的荧光强度；mo样品溶液加入的标准维生素Bz的量，单位为微克(pg)；V样品溶液的初始体积，单位为毫升(mL)；y，测定时量取的试样溶液体积(10 mL)，单位为毫升(mL)；m试样质量，单位为克(g)。每个样品进行平行试验，以算术平均值为测定结果。计算结果保留3位有效数字。9重复性同一分析者对同一试样在同样条件下同时进行两次测定：当维生素B。含量Xso0 mgkg时，其获得的两次独立测定结果的相对偏差应5。
