1、中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法金黄色葡萄球菌Standard methods of microblologlcal examination for c。，metlcsStaphyl。c。e川cusaureus UDC 668. 58 576 . 85. 07 GB 7 9 1 8 . 5 - 8 7 金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化腋性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄球菌有重要意义1 方法提要根据本菌特有的形态及培养特性，应用BairdParker平板进行分离，该平板中的氯化鲤可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙嗣酸铺可剌激金黄色葡萄球菌
2、生长，以提高撞出事，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征以兹鉴别2培弊基和试J2. 1 培养基2. . l SCDLP液体培养基见GB7918. I-87（化妆品徽生物标准检验方法总则儿2.1.2 7.5%的氯化锅肉汤成分s蛋白陈!Og 牛肉膏3g 氯化制75g 蒸偏水!OOOml 制法z将上述成分加热榕解调pH为7.4.分装，121（15lb)15 min高压灭菌2. 1 3 Baird Parker平板成分z膜蛋白腺IOg 牛肉膏5g 酵母漫膏Jg 丙嗣酸纳!Og 甘氨酸!2g 氯化铿（LiCI 6 H, O) 5g 琼脂20g 蒸馆水950ml pH7. 0土0.2增菌剂的配制，30%卵黄
3、盐水50ml与除菌过滤的1%亚葡.饵割液IOml混合，保存于冰箱内。制法z将各成分加到蒸馆水中，加热煮沸完全需解冷至25校正pH，分装每瓶95ml,121高压中华人民共和国卫生部1987-05-28批准1987-10 01实施l 16 GB7918.5 87 灭菌！Smin 0临用时加热溶化琼脂，每95ml加入预热至soc的卵黄亚畸酸例增菌剂Sm！，摇匀后倾注平板培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h02. 1. 4 血琼脂培养基成分营养琼脂!OOml 脱纤维羊血（或兔血）!Om! 制法E将营养琼脂加热溶化，待冷至50左右以无菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。
4、2. 1. 5 甘露醇发酵培养基成分蛋白陈!Og 氯化饷Sg 甘露醇!Og 牛肉膏Sg o. 2%澳麟香草酸蓝溶液12ml 蒸馆水I OOOml 制法：将蛋白陈、氯化锅、牛肉膏加到蒸馆水中，加热溶解，调pH7. 4，加入甘露醇和指示剂，i昆匀后分装试管中，115（10 l的20min灭菌备用。2. 1. 6 兔（人）血浆制备取3.8%拧橡酸饷溶液121（15lb) 30 min灭菌l份加兔（人）全血4份，Ill匀静置，2000 3000 r/min离心3Smin0血球下沉，取上面血浆。3 设备和材料3. 1 显微镜。3. 2 培养箱3. 3 离心机3. 4 灭菌吸管，lml,Sml, !Om!
5、, 3. 5 灭菌试管。3. 6 载玻片。3. 7 酒精灯。4 操作步骤4. 1 增菌s取l 1 0稀释的样品！Om！接种J90ml SCDLP液体培养基中（如无此培养基也可用7. 5%氯化锅肉汤）置37培养箱，培养24h。注2如无此培养基也可用7.5%氯化铺肉汤，检验啻防腐剂的化枚品时，叮在1000ml此培养基中加ls卵确脂、7g吐温80,4. 2 分离2自上述增菌培养液中，取12接种环.:tiJ线接种在BairdParker氏培养基如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置37培养2448h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在BairdParker
6、氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为23mm,颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37培养24h,4. 3 染色镜检z挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5 lm, 4. 4 甘露醇发酵试验z取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，宦37培养24h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。147 GB 7918. 5-87 4. 5 血浆凝固酶试验
7、4, 5. 1 玻片法s取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待栓菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合血浆与菌苔混悬液在Smin内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。4. 5. 2 试管法s吸取I 4新鲜血浆。.5 ml，放入灭菌小试管中，再加入待检菌24h肉汤培养物O. Sm！.混匀，放37C温箱或水浴中，每半小时观察一次，24h之内如呈现凝块即为阳性同时以己知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各o.5时，分别加入灭菌小试管内0.Sm! I 4血浆混匀，做为对照，5 检验结果报告凡在上述选择平板上有可疑菌落生长经染色镜栓，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。附加说明2本标准由中国预防医学科学院环撞卫生监测所归口。本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草本标准主要起草人X1J以贤回本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释 148
