1、ICS 65.120 B 20 国中华人民共和国国家标准G/T 19423-2003 饲料中尼卡巴曝的测定高效液相色谱法Determination of nicarbazin in feed High performance Iiquid chromatography 2003-12-11发布江旦丘丘l2004-06-01实施命中华人民共和国发布国家质量监督检验检痊总局GB/T 19423-2003 前言本标准检测方法主要以美国食品药物管理局(FDA)编著的动物组织及饲料中兽药分析手册)-书中饲料中尼卡巴嚓的测定方法为基础，经试验确定。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由全国饲料
2、工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位=浙江省饲料监察所.本标准主要起草人2朱聪英、宣士荣、l庆均、施杏芬、沈琴芳、张志健e1 范围饲料中尼卡巴曝的测定高效渡相色谱法本标准规定了用高效液相包谱仪测寇饲料中尼卡巴嚓含量的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中尼卡巴嗦的测定。本方法的最低检测浓度为每千克饲料中尼卡巴嚓含量在1mg以上。2 规范性引用文件GB/T 19423-2003 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
3、凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法3 原理用二甲基甲酷胶WMF)提取试样中的尼卡巴嚷，经碱性氧化铝层析柱过柱纯化，浓缩并用洗脱液溶解、定容，用高效液相色谱仪，C18反相柱，以甲醇溶液为流动相，用紫外检测器在波长365nm条件下进行定量测定。4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器。4.2 色谱柱:C18反相柱(粒度5m.柱长10cm，内径4.6mm)。4.3 旋转蒸发器。4.4 电动振荡器。4.5 层析管:1cmX30 cm。5 试剂和溶液以下所用的试剂和水，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682
4、-1992中规定的三级水。5.1 95%乙醇。5.2 甲醇=色谱纯。5.3 二甲基甲lIIi胶(DMF)。5.4 碱性氧化铝:100日200目.105C条件下烘2h后放干燥器中备用。5.5 洗脱液:95%乙醇(5.1)-甲醇(5.2)为95+5.5.6 尼卡巴嚓贮备液2准确称取100mg尼卡巴嗦标准品，用DMF定容至100mL(浓度为1mg/mL). 5. 7 尼卡巴嚓工作液2移取1mL尼卡巴嗦贮备液(5.6).用DMF定量至100mL(浓度为10g/mL)。5.8 流动相:80十20的甲醇水溶液。6 试祥帘j备选取有代表性的饲料样品，用四分法缩减至500g.粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，
5、混匀，装入密GB/T 19423-2003 闭容器。7 分析步骤7.1 试液的制备7. 1. 1 提取准确称取试佯10g于具塞三角烧瓶中，加三甲基甲酸胶(DMF)50mL，用电动振荡器振摇30min , 用滤纸干过滤，弃取初滤液，收集滤液，备用。7. 1. 2 柱层析纯化7. 1. 2.1 柱的制备在层析管中加入约2/3管高的二甲基甲酥胶(DMF)，缓慢加入碱性氧化铝至高度为6cm(约6g) , 小心排除气泡，静止15mn，打开活塞，放下液体，至液面达氧化铝表面，再加25mL DMF洗柱，注意液面不能低于氧化铝表面。7. 1. 2.2 纯化准确移取25mL滤液于层析柱中，放下液体，至液面达氧化
6、铝表面，用25mLDMF淋洗柱，弃去淋洗液，加20mL洗脱液，立即洗脱尼卡巴嚓，弃去开始的1mL3 mL洗脱液，注意在以上过程中保持柱不干。收集其余洗脱液于旋转蒸发器烧瓶中，周旋转蒸发器在60C70.C下蒸发至干，再用洗脱液定容，使其尼卡巴嗦最后浓度为10g/mL左右，备用。如用其他口径层析管进行层析，贝全部试剂按层析管内径平方比改变。7.2 尼卡巴曝标准溶液的制备按7.1. 2. 1制备柱，准确移取25mL尼卡巴嚓工作液，按7.1.2. 2操作至注意在以上过程中保持柱不干。收集洗脱液于25mL容量瓶中，用洗脱液定容至刻度。7.3 测定7.3.1 高效液相色谱条件7.3. 1. 1 色谱柱:C
7、18反相柱(粒度5m，内径4.6mm，柱*10cm)。7.3.1.2 流动相甲醇十水(80+20)。7.3. 1. 3 流速:1mL/min。7.3. 1. 4 温度z室温。7.3. 1. 5 迸祥体积:20L7.3. 1. 6 检测器紫外检测器，波长365nm. 7.3.2 上机测定尼卡巴嗦标准溶液和试液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。7.4 结果的计算与表述7.4.1 计算公式结果按(1)式计算:。Lx v-m 一-l c-R 一pE C . ( 1 ) 式中=C 试样中尼卡巴嚓含量，单位为毫克每千克(mg/kg); C1 标准溶液中尼卡巴嗦含量，单位为微克每毫升(g/mL); P 试液峰面积响应值，P1 标准洛液峰面积响应值;V一试液定容体积，单位为毫升(mL);m一一试样质量，单位为克(g); GB/T 19423-2003 2一-试液稀释倍数，7.4.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。B 允许羞同分析者对同一试样同时两次测定(或重复测定所得结果2尼卡巴嚓含量在10mg/kg(包括10 mg/kg)以下的相对偏差不大于20%否在10mg/kg以上的相对偏差不大于10%。
