1、ICS 67.050 B 47 中华人民共和国国家标准G/T 23412-2009 蜂蜜中19种睡诺自同类药物残留量的测定方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of residues of 19 quinolones in honey一LC-MS/MS method 2009-03-28发布2009-07-01实施革黠峰、咽，中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会发布剧吕本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。GB/T 23412-2
2、009 本标准主要起草人:沈崇缸、陈惠兰、丁涛、张晓燕、刘艳、张娟、黄娟、蒋原、陶宏锦、沈东旭。I 1 范围蜂蜜中19种睡诺酣类药物残留量的测定方法液相色谱-质谱/质谱法G/T 23412-2009 本标准规定了蜂蜜中恩诺沙星(简称ENR，下同)，环丙沙星(简称C1P，下同)，诺氟沙星(简称NOR，下同)，氧氟沙星(简称OFL，下同)，双氟沙星(简称D1F，下同)，曙喳酸(简称OXO，下同)、氟甲喳(简称FLU，下同)，沙拉沙星(简称SAR，下同)，司帕沙星(简称SPA，下同)，丹氟沙星(简称DAN，下同)，氟罗沙星(简称FLE，下同)，马波沙星(简称MAR，下同)，伊诺沙星(简称ENO，下同
3、)，奥比沙星(简称ORB，下同)，毗暖酸简称P1P，下同)，培氟沙星(简称PEF，下同)，洛美沙星(简称LOM，下同)，西诺沙星(简称C1N，下同)和秦晓酸(简称NAL，下同)19种喳诺酣残留量的液相色谱-质谱/质谱的测定方法。上述19种唾诺酣类药物中英文名称、结构式、CAS号和相对分子质量参见附录A。本标准适用于蜂蜜中喳诺酣类残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版
4、本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-2008 ,1SO 3696 :1 987 , MOD) 3 方法提要试样加入内标后，氢氧化锅溶液溶解蜂蜜样品，离子化的喳诺酣类残留物经过阴离子交换固相萃取柱富集净化，用液相色谱-质谱/质谱法测定，梯度洗脱，内标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4. 1 甲醇:HPLC级。4.2 氢氧化锅。4.3 甲酸(85%)。4.4 阴离子交换柱(PAX):60 mg , 3 mL，或相当者。4.5 同位素内标:NOR-Ds :纯度98%。4.6 ENR、C1P、NO
5、R、OFL、D1F HCl.SAR HCl、SPA、DAN、OXO、FLU、FLE、MAR、ENO、ORB、P1P、PEF、LOM、C1N和NAL标准品:纯度99%。4. 7 喳诺酣类标准储备溶液:1 mg/mL。准确称取适量的唾诺酣类标准品(4.6) ，用甲醇(4.1)配成1. 0 mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4oc冰箱中，可保存6个月。4.8 筑代诺氟沙星(NOR-Ds)内标储备溶液:100g/mL。称取适量的NOR-Ds内标物(4.5)，用甲醇(4.1)配成100g/mL储备液，储备液贮存在4oc冰箱中。4.9 筑代诺氟沙星(NOR-Ds)内标工作溶液:1g/mL。取适量内标储备
6、液(4.8)用甲醇(4.1)稀释成1g/mL工作溶液，内标工作溶液在4oc保存。4.10 唾诺翻类标准工作溶液:用甲醇-水(2+8，体积比)分别配成浓度范围为1ng/mL-60 ng/mL标GB/T 23412-2009 准工作溶液，其中内标溶液浓度为50ng/mL，现配。4. 11 氢氧化锅溶液(0.1 mol/L) :取4g氢氧化锅，溶解于1L水中。4. 12 甲酸-甲醇溶液(5+95，体积比):取5mL甲酸(4.3)，溶解于95mL甲醇(4.1)中。4. 13 甲醇-水(2+8，体积比):量取20mL甲醇(4.1)于80mL水中，混合均匀。5 仪器和设备5. 1 液相色谱-串联质谱仪:配
7、有电喷雾离子源。5.2 分析天平:感量0.01g和0.1mg各一台。5.3 旋转蒸发仪。5.4 固相萃取装置。5.5 涡旋混匀器。5.6 真空泵:真空度不低于80kPa。5. 7 滤膜:有机系，0.45m。5.8 离心管:50mL，具塞。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备将实验室样品搅拌均匀，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品袋中，密封，并做上标记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化。6.2 试样的保存将试样于冷藏状态下保存(40C)。7 测定步骤7. 1 提取准确称取5g(精确到0.01g)试样，置于50mL具塞离心管中，准确加入1g/mL内标溶液(4.9)
8、50L，加入5mL氢氧化铀溶液(4.11)，于涡旋混匀器上快速混合至蜂蜜完全溶解。依次用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取小柱(4.4) ，将样品溶液转移到小柱上，依次用水、甲醇淋洗，弃去上述滤液。用甲酸-甲醇溶液(4.12) 3 mL洗脱。40oC水浴旋转蒸发至干，用甲醇-水(4.13)定容1.0 mL，过0.45m的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。7.2 测定7.2.1 参考液相色谱条件a) 色谱柱:C18，3m，150mmX2. 0 mm(内径)或相当者;b) 流动相z甲醇+0.1%甲酸水溶液;c) 流速:0.20mL/min; d) 梯度洗脱程序:参见附录B;e) 柱温:室温;f
9、) 进样量:25L。7.2.2 串联质谱条件参见附录Co7.3 液相色谱-质谱/质谱测定7.3.1 定性测定进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超GB/T 23412-2009 过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差相对离子丰度允许的相对偏差50% 士20%20%50% 土25%10%-20% 士30%运10%士50%7.3.2 定量测定标准工作溶液(4.10)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，
10、以标准与内标物峰面积比值为纵坐标，工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标，绘制标准工作曲线(1ng/mL_60 ng/mL)，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液响应值均在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，其相应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D。7.4 空白试验除不加入试样外，按上述(7.1._, 7. 3)步骤进行。8 结果计算结果按式(1)计算:m-m x一生人一C .( 1 ) 式中:Cx 样品中哇诺酣的浓度，单位为微克每千克(l1g/kg);Ax 样品中哇诺酣的峰面积与相应内标峰面积比值;ms一一-喳诺酣的质量，单位为纳克(ng);A. 标准品中喳诺酣的峰面积与相应内标峰面积
11、比值zm一一样品质量，单位为克(g)。9 检测低限、回收率范围和精密度本标准中19种喳诺酣类检测低限均为1.0g/kg。蜂蜜中喳诺酣添加浓度及回收率范围内标校正)的试验数据(n=10): 添加水平为1.0g/kg，19种哇诺酣回收率范围为71%._，118%; 添加水平为2.0g/kg，19种唾诺酣回收率范围为71%._，117%;添加水平为5.0g/烛，19种噎诺酣回收率范围为70%._，117%。在1.0g/kg、2.0g/kg和5.0g/kg添加水平上，相对标准偏差(RSD)为4.2% ._, 10. 9%。3 GB/T 23412-2009 附录A(资料性附录)睡诺圃类药物及其代谢物中
12、英文名称、化学结构式、CAS号和相对分子质量表A.1睡诺圃类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式、CAS号和相对分子质量相对分子CAS号中文名称/化学结构式质量序号英文名称/简称恩诺沙星J产JN F矿L产OH93106-60-6 359 1 Enrofloxacin (ENR) H3C 环丙沙星2 Ciprofloxacin 331 85721-33-1 (CIP) 诺氟沙星3 Norfloxacin 319 70458-96-7 (NOR) F 。.CH3F| 氧氟沙星361 82419-36-1 Ofloxacin 。、。4 (OFL) HO 、。CH3 。氟甲唾F 1、OH 42835-
13、25-6 261 5 Flumequine (FLU) N CH3 。略喳酸316 50 -1 E 5.72 50I CIP 332231 J寸A马6850才INOR 320276 o r 3!: 100 -, _.-信则I OFL 362261 苦才R 0 7 n 100 -, .-50 -1 A OXO262216 J寸7卢150斗IFLU 262202 o r 100寸_.，.-才IDIF 400299 50才Eo I i i i i i i i i i if o 2 4 6 8 10 t/rnin 附录D(资料性附录)睡诺圈类药物及其内标离子流色谱图100 -, 5俨350I SAR3
14、86299 O.J 二二二n内100-, _.-l I SPA 393292 50寸EJ寸5.，72习IDAN 358340 50寸1斗一一、100 -, 5j 54 刨斗l -H卡50 I FLE 370326 贺才自军O_区En100寸_.-50斗IMAR36372 J寸51350 -1 I -l ENO 321 232 O.J圄工n100寸.，50斗IORB 396352 o I i i i i (, i i i i i o 5 10 t/rnin GB/T 23412-2009 件100寸5、73灰I I 50j I LMO 352308 10汇m50-1 I CIN263217 10
15、汇5俨850斗INOR-D5 325281 o I i i i I i i i i i i叮1111111o 2 4 6 8 10 t/rnin 图D.1睡诺圈类药物及其内标离子流色谱图9 gONlNF寸的NH阁。华人民共和国家标准蜂蜜中19种睡诺固类药物残留量的测定方法液相色谱质谱/质谱法GB/T 23412-2009 国中* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销骨印张1字数18千字2009年6月第一次印刷开本880X12301/16 2009年6月第一版* 定价18.元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-37677 GB/T 23412-2009 打印H期:2009年10月19日
