1、lCS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20751-2006 鲤鱼及制品中十五种睡诺酬类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法Method for the determination of 15 quinolone residues in eels and eel products一LC-MS-MS method 2006斗2-31发布中华人民共和国国家质量监督检验检费总局中国国家标准化管理委员会2007-03-01实施发布目U本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。G/T
2、20751-2006 本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、食品安全分析与检测技术教育部重点实验室(福州大学)。本标准主要起草人:庞国芳、杨方、刘正才、余孔捷、卢声宇、李耀平、陈国南。本标准系首次发布的国家标准。I GBjT 20751-2006 1 范围鲤鱼及制品中十五种唾诺酬类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法本标准规定了鲤鱼及制品中十五种嗤诺酣类药物残留量的被相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于鲤鱼及制品中十五种峰诺酣类药物的测定。本标准的方法检出限:十五种喳诺酣类药物的检出限均为5g/kg，z 规范性引用文件下列文件中的条款通过本
3、标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379. 1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分z总则与定义(GB/T 6379.1一2004，IS05725-1: 1994 , IDT) GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精瘤度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379. 2-2004 ,IS0 5725-2:1994 , IDT) GB/
4、T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-1992 ,neq IS0 3696:1987) 3 原理试样中残留的喳诺酣类药物采用乙腊提取，提取液经正己:皖被液分配脱脂后，以强阳离子固相革取小柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4. 1 乙睛:色谱纯。4.2 甲醇:色谱纯。4.3正己;境。4.4 液氮水。4.5 甲酸。4.6 乙酸镜。4. 7 元水硫酸铀:6500C灼烧4h，冷却后储于密封容器中备用。4.8 氨水十甲醇:25+75，量取25rnL氨水(4.的，以甲醇(4.2)定容100
5、rnL , ti昆匀。4.9 甲酸榕液:0.1%。移取1rnL甲酸(4.日，以7(定容1L。4. 10 乙酸锻缓冲被:10 rnrnol/L。称取O.77 g乙酸镀(4.6)，榕于约700rnL水中，以甲酸调节pH=4. 6，以水定容1L。4. 11 十五种喳诺酣类药物标准物质:氟罗沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺协星、洛美抄星、单诺沙星、奥比抄星、双氟抄星、沙拉沙星、司帕抄星、日恶喳酸、茶院酸、氟甲哇，纯度均二三98%。4. 12 标准储备播液:100 rng/L。准确称取十五种喳诺阴类药物标准物质(4.11)各10.0mg，分别用甲醇榕解并定容至100rnL，该标准储备液
6、置于4C冰箱中可保存一个月。1 G/T 20751-2006 4.13 标准工作陪液:根据需要取适量标准储备破(4.12)，以甲酸薛被(4.9)十乙腊(4.1)(9十1)稀释成适当被腔的海合标准工作搭班。标准工作溶掖要现配现用。4. 14 强阳离子交换柱(SCXSPE柱)或相当者:500mg , 3 mL.用前依次以3mL甲醇、3mL水、3mL 10 mmol/L乙酸镀缓冲破(4.10)话化，保持柱体理润。4. 15 0.22m滤膜。5 仪器5. 1 准相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子掘。部黯部提醒端主组5.2 分析天平t感量0.1mg和0.01g. 5. 3 组织捣碎机。5. 4旋涡
7、振荡器。5. 5 分散器z转速应达到lQd5, 6 超声波发生器。w5. 7 氯气故缩仪。5. 8 固相萃取装置。f5. 9真空泵1真空度盼隅。5. 10 微量注射器: 周鱼将记标快明嫩到如出巳内时酬期比标特别屏川川鲤鱼制品取口制样操作过程如应6. 2 时样保存72 h. 7 测定步骤7. 1 提取称取5g试样(精确乙脯，使用分散器(5.5)，在I50 mL比色管中，另取一50mL 7. 2 净化将7.1所得的溶被以约1r/min的流速全部通过强阳离子交换桂(4.14)，拍子，先后以1.5 mL 甲醇、3mL氨水十甲醇(4.8)洗脱，合并搅脱液，35oc下氮吹至近干，以甲酸榕被(4.9)+乙腊
8、(4.1) (9十1)定容至1mL，过0.22m滤膜(4.15)，供液相色谱-串联质谱分析。7 3 空白基质溶洒的制备你取阴性样品5g(精确至0.01剖，按7.1和7.2操作。2 GB/T 20751-2006 7.4 测定7. 4. 1 j在相色谱条件a) 色谱柱:C1日，5m,150 mmX2.1 mm或相当者;b) 柱瘟:30.C ; c) 流速.200L/min;d) 避样量:20L;的梯度由脱，洗脱程序见表10nE -1同m v-O EHHJ l 时-流速/表1液相色i曾梯度洗脱程序乙精/(%)0.1%甲酸/(%)78 4.00 5 75 8.00 10. 00 15.00 15.5
9、0 10 70 40 22.00 一叩-m7.4.2 a) b) c) d) 调节各气体班量以巳)喷雾f) 定性离药物名称碰撞智能量11|碰撞池出口电压/V-. -1 -电甲70 氟罗沙星370.4/326.4 70 氧氟沙皇r_,. -导. - 60 ofloxacin 40 60 依诺沙星35 70 enoxacm 1232.2 留摇遐边擦翻翻昆宿踵-48 70 320.4/276.6 26 50 诺氟沙星norfloxacin 320.4/276.6 320.4/233.2 30 50 332.4/288.3 25 60 环丙沙皇ciprof1oxacin 332.4/245.3 332
10、.4/288.3 33 60 恩诺沙皇360.6/316.4 30 60 enrofloxacin 360.6/316.4 360.6/245.4 40 60 洛美沙星352.3/308.4 28 60 lomefloxacin 352.3/308.4 352.3/265.4 33 60 3 GjT 20751-2006 药物名称英文名称单诺沙星danofl口xaClll奥比沙星orbifloxacin 双氟沙里difl口xacm沙拉沙星吕arafloxacin司帕沙星sparfloxacin H远喳酸oxolinic acid 荼I定酸nalidixic acid 氟甲I变f1 umequi
11、n 7. 4.3 液中目色i昔串联质谱测定7.4.3.1 定性测定定性离子对(m/z) 358.3/340.3 358.3/283.4 396.3/352.3 396.3/295.4 400.4/356.2 400.4/299.3 386.4/342.3 386.4/299.2 393. .3/349. 4 393. 3/292. 4 262. 3/244. 2 262.3/216.3 233.3/215.2 233.3/187.4 262. 3/244. 3 262. 3/202. 3 表2(续)定量离子对(m/z) 碰撞气能量/V碰撞池出口电压/V40 80 358. 3/340. 3 4
12、0 80 27 60 396.3/352.3 35 60 28 60 400.4/356.2 42 60 28 60 386. 4/342. 3 43 60 30 80 393.3/349.4 38 80 30 70 262.3/244.2 42 70 24 60 233. 3/215. 2 36 60 30 70 262.3/244.3 49 70 每种被视组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与髓合基质标准校准榕被中对应放度标准校准洛液的保留时间偏差在士2.5%之内;且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与地度接近的混合基质标准校准溶被谱图中对应的定性
13、离子的相对丰度进行比较，若偏差不屈过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差% 相对离子丰度50 2050 1020 :;10 允许的最大偏差| 土20I 土25I 土30I 土507.4.3.2 定量测定外标法定量:在仪器最佳工作条件下，对混合基质标准校准梅液进样，以峰面积为纵坐标，混合基质校准悔腋放度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品梅液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，十五种唾诺酣类药物的参考保留时间见表4，十五神喳谐酣类药物的多反应监测(MRM)色谱图参见图A.10 十五种喳诺酣类药
14、物的添加放度及其平均回收率的试验数据参见表B.L表4十五种暗语酣类药物的参考保留时间药物名称保留时间/min药物名称保留时间/min药物名称氟罗沙屋5.14 恩诺沙星8.41 沙拉沙星氧氟沙星5.88 洛美沙星8.42 司帕tl、厦依诺沙星6.11 单诺沙星8. 55 H恶喳酸谱叙沙星6.86 奥比沙星9.46 茶咙酸环丙沙里7.67 双氟沙星9.93 氟甲喳L一一一一一一一一4 保留时间/min10. 83 13.07 16.26 17.78 18.25 GB/T 20751-2006 7.5 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6 回收率试验在阴性样品中添加适量标准溶破，按
15、7.1和7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。8 结果计算试样中十五种喳诸酬类药物残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算:nu-nu nu-nu nu-nu -t4-唱t4 v-m fu = X C 1 ) 式中tX一一试样中被测组分残留量，单位为做克每千克(g/kg); c一一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升Cng/mL); V一一试样溶液定容体积，单位为毫升(mL); m一一试样榕液所代表试样的质量，单位为克(g)。注:计算结果应扣除空白值。9 精密度本部分的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信
16、度来计算。9. 1 重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的含量范围及重复性方程见表5。表5十五种障诺嗣类药物的含量范围及重复性和再现性方程名称含量范围/C阅/kg)样品基体重复性限r再现性限R搜鱼= 0.3161 m R = 0.3605 1月氟罗沙星5. 040. 0 姥鲤r = 0.2849刑十0.0348 R = 0.3615 7月嫂鱼r = 0.302 1 m R = 0.2989 m十O.129 9 氧氟沙星5. 040. 0 烤嫂r = 0.287 6 m R = 0.2769 m十O.324 8 鲤鱼俨=0.188 m十O.968 4
17、 R = 0.1599 m十1.285 1 依诺沙星5. 040. 0 烤鱼曼= 0.309 m R = 0.3126 m 鲤鱼= 0.154 m十1.612 8 R = 0.2026 m十1.226 8 诺氟沙星5. 040. 0 炜鲤r = 0.219 3 m十O.112 7 R = 0.2648 m十O.121 1 鲤鱼r = 0.204 1 m+O. 560 5 R = 0.282 5 m+O. 133 环丙沙星5. 040. 0 烤鱼曼r = 0.1835 m十0.6098 R = 0.2694 m卡O.419 2 接鱼= 0.2218 m十O.971 7 R = 0.2233 7月
18、十1.081 3 恩诺沙星5. 040. 0 烤搜r = 0.315 6 m+O. 386 2 R = 0.3701 m 鲤鱼r = 0.215 1 m十O.651 9 R = 0.2306 m十O.77 洛美沙星5. 040. 0 烤蟆r = 0.196 m+O. 115 7 R = 0.219刑十O.168 1 嫂鱼r = 0.4957 m R = 0.3672 m十O.059 3 单i着沙星5. 040. 0 烤嫂r = 0.252 2 m十O.851 4 R = 0.2765 m十O.491 8 5 GBjT 20751-2006 表5(续)奥比沙星5. 040. 0 样品基体| 重复
19、性限r鲤鱼I r = 0.2325 m 烤嫂I r = 0.211 m 再现性限R名称含量范围/(g/kg)双氛沙星5. 040. 0 鱼一搜鱼鳞一烤一搜r = 0.316 3 m十0.3587 74-3 90币。9口dq白。而FUE。白白4-nuFE AUAU-AU-AU +一+一+一+m-m-mm 44-1i-nt-nL AHV-nhURn叫Um巧，annvhphdmq4mnnv nr明n-n-n-EE nunu-nu-nu z=一一一一=RR-R-R r = 0.2893 m r = 0.291 9 m R = 0.3031 m 沙拉沙庭5.0-40.0 注:ln为两R = 0.25 m
20、 R = O. 258 8 m+O. 287 1 司帕沙星5.0-40.0 日恶睦酸nhu-eh 反】-FHUEnhu!-咱ta-nU盯43-44-L-队队一+一+m-m m一3一4D-nMd卢A性n吕-aununddL-AUI -EE nUMnu-茶咬酸氟印喳nxu-phU A川UW甲向吨00-nt FnvFphU AUAU+一+m-m nnM-nL 如果差值超9.2 再现性在再现性试及再现性方程见11物的含量范围6 G/T 20751 2006 附录A(资料性附录)十五种暗暗嗣类药物标准物质的多反应监测CMRM)色谱圄十五种唾诺酣类药物标准物质的多反应监测(MRM)色谱图，见图A.10 3
21、, 2, 1. 3, 2, 3, 2, 0.4 1. 3, 0.4 2.0.4 1. 0.4 3, 0.4 -1 2, OB4 1, 0.4 -1 6, 1 3, 0.4 氟罗沙星8, 4 洛美沙星16, 2 3.0.4 嘟电量酸2, 0.4 1, 0.4 i 4 6 a 11 min 6, 8 3, 004 10, 6 沙拉沙皇17, 6 黎睫酸2, 0.4 1.口。42 4日8 10 12 14 16 18 20 I/m!n 5, 9 依诺沙皇12, 8 词帕沙县I/m!n 18, 1 氟甲嗤2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 I/m!n 圈A.1 十五种瞌诺酣类药物的多反
22、应监测CMRM)色谱固7 GB/T 20751-2006 8 附录B(资料性附录)回收率十五种喳诺自同类药物的添加法度及其回收率范围的试验数据，见表B.1o表B.1十五种睡诺回类药物的濡加i农度及其回收率范围的试验数据回收率范围/(%)嗤诺酣类药物添加浓度/(g/kg)接鱼烤鲤5 69.6 - 93.6 75.8 - 101. 2 10 68.0 - 105.0 75.5 - 93.1 氟罗沙星20 68.5 - 105.5 75.5 - 98.5 40 65.3 - 104.0 79.8 - 94.5 5 75.8- 98.2 73.8 - 90.4 10 75.3 - 104.0 76.
23、1 - 91. 1 氧氟沙星20 82.5- 97.0 75.5 - 98.5 40 65.5- 97.3 73.3 - 104.8 5 67.4 - 98.0 74.0 - 100.4 10 79.0 - 100.0 73.2 - 88.4 依诺沙星20 73.5 - 103.0 73.0 - 92.0 40 64.8 - 10l. 0 75.0 - 96.0 5 68.2 - 97.0 76.2 - 103.8 10 74.7 - 102.0 74.0 - 93.5 诺氟沙皇20 73.0-97.5 75.5 - 118.5 40 68.8 - 97.5 79.5 - 94.8 5 68.
24、2- 91. 0 77. 8 - 94.4 10 78.4 - 10l. 0 72.7 - 98.4 环丙沙屋20 79.0 - 97.5 75.0 - 93.5 40 7l. 5 - 102.8 72.8 - 90.8 5 66.8- 98.2 73.2 - 100.4 10 80.8 - 105.0 70.0 - 86.2 恩诺沙星20 70.5- 98.5 64.0 - 96.5 40 77.5-96.5 61. 3 - 96.8 5 68.8- 98.0 69.4 - 94.4 10 75. 3 - 104. 0 . 73.6 - 96.1 洛美沙皇20 74.0 - 96.0 75.
25、5 - 108.0 40 73.5 - 100.8 75.3 - 91. 8 GB/T 20751-2006 表B.1 (续)回收率-m围/C%) 隆诺嗣类药物添加浓度/(问/kg)馒鱼烤摄5 70. 6 90.8 76.4 - 100. 6 10 70.9- 105.0 68. 9 91. 7 单诺沙星20 74. 5 101.5 69. 0 102. 5 40 65. 0 102.8 75. 8 94.8 5 70. 6 85.4 78.0 - 101. 0 10 71. 9 96.9 76. 9 99.0 奥比沙星20 78. 0 92.0 77. 5 99.0 40 68. 8 92.
26、0 76. 3 - 100. 5 5 72. 6 97.0 69. 0 94. 2 10 77. 1 94.9 72. 9 94.8 双氟沙屋20 81. 0 99.5 72.5 - 100.5 40 79. 5 96.3 73. 3 92.0 5 69.2 94.2 73. 2 90.6 10 74. 1 95.0 76. 7 - 102. 0 沙拉沙星20 71. 5 102.0 73. 5 106.5 40 72.097.3 79. 0 95.0 俨u 71. 2 88.6 79. 2 109. 6 10 74. 3 98.1 73. 2 96.4 司帕沙星20 76. 0 100.5
27、78. 5 94.5 40 67.5 99.0 73. 3 99.5 5 69. 8 99.6 67. 8 122.0 10 75.2- 107.0 64. 9 104.0 口恶喳酸20 72.0- 105.0 74. 0 106.0 40 71. 0 - 107.0 70. 3 93.8 5 73.2 - 82.2 71. 2 105. 4 10 78.2- 98.9 76. 3 107. 0 茶咬酸20 76.5 - 96.0 85. 5 100.0 40 68.0 - 97.8 73. 5 96.3 5 66. 2 103.0 75. 2 95. 4 10 79.6 - 99.5 74.
28、2 107.0 氛甲l蜜20 75.5 - 104.0 77. 0 - 99.5 40 73.3 - 90.8 77. 3 - 95.3 9 UDON-F山队DNH阁。华人民共和圈家标准睡鱼及制品中十五种睡诺酬类药物残菌量的测定液中目色i普-串联质谱法GB/T 20751 2006 国中特中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销奇峰印张1字数20千字2007年3月第次印刷开本880X 1230 1/16 2007年3月第一版定价16.00元* 书号:155066 1与28967如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533G8/T 20751-2006
