1、ICS 79080B 69中华人民 共禾口，国林业行业标准LYT 19262010抗茵木(竹)质地板抗菌性能检验方法与抗茵效果Antimicrobial wood(bamboo)一based flooring-Test method for antimicrobial function and antimicrobial effect2010一0209发布 20100601实施国家林业局 发布刖 罱LYT 19262010本标准由全国人造板标准化技术委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中国林业科学研究院木材工业研究所。本标准参加起草单位：四川升达林业产业股份有限公司、天津科技大学、圣象集团有
2、限公司、浙江世友木业有限公司、大亚人造板集团有限公司、中国滁州春洲木业有限公司。本标准要起草人：吕斌、刘秀英、余钢、郭红莲、苗景有、倪方荣、张海燕、朱宝芝、兰拓、刘洋。抗菌木(竹)质地板抗菌性能检验方法与抗菌效果LYT 192620101范围本标准规定了抗菌木(竹)质地板抗细菌性能检验方法及效果分级、抗霉菌性能检验方法及效果分级。本标准适用于抗茵木(竹)质地板的抗细菌性能和抗霉菌性能的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这
3、些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 47892食品卫生微生物学检验菌落总数测定3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。31抑菌bacteriostasisfungistasis抑制微生物生长繁殖的作用。32杀菌bactericidal action杀死微生物营养体和繁殖体的作用。33抗菌antimicrobial action抑菌和杀菌作用的总称。34抗菌木(竹)质地板antimicrobial wood(bamboo)-based flooring表面具有抗菌作用的木(竹)质地板。4抗细菌性能检验方法及效果分级41原理通过接种定量细菌于样品上，用贴膜的方
4、法使细菌均匀接触被检测样品表面，在规定条件下经过一定时问的培养达到一定细菌数后，按平板活菌计数法计算受检样品的抗菌率。42仪器、设备、材料及准备421主要仪器和设备a)恒温培养箱：能保持温度在371。b)冷藏箱：能保持温度在05。c)超净工作台：洁净等级不低于100级。d)生物光学显微镜：200400。1LYT 19262010e)压力蒸汽灭菌器：能保持121的温度和103 kPa的压力。f)电热干燥箱：能保持温度在160180。g)培养平皿：直径90 mm。h)培养试管：16 ram)90条件下培养24 h。每个样品做五个平行。取出培养24 h的样品，每片分别加入20 mL洗液，反复洗样A、
5、样B、样c及覆盖膜(最好用镊子夹起薄膜冲洗)，充分摇匀后，取05 mL该洗液于灭菌平皿内，倾注15 mL20 mL冷至451的营养培养基，摇匀后，在371下培养24 h48 h后活菌计数，按GBT 47892规定的方法操作。以上试验重复一次。47检验结果判断与计算471检验结果要求将以上活菌计数结果各乘以100为样A、样B、样c的培养24 h后实际回收菌数值(CFU片)，数值分别为A、B、c，保证检验结果满足以下要求：a) 同一样品的五个平行数值要符合：(最高值对数值最低值对数值)平均数对数值o2；b)样A的实际回收菌数值A均应不少于10105 CFU片，样B的实际回收菌数值B均应不少于10X
6、104 CFU片。3LYT 19262010如果不能满足上述其中任何一条要求应重新进行检验，直至满足为止。472抗菌率计算抗菌率计算见式(1)。B空白对照样平均回收菌数，CFU片；C抗菌木(竹)质地板样平均回收菌数，CFU片。473抗菌效果分级抗菌术(竹)质地板抗细菌性能按抗细菌率分为I级和级，具体指标应符合表2的规定。表2抗菌木(竹)质地板抗细菌性能要求项目名称 抗细菌率抗菌木(竹)质地板抗细菌性能 I级：99(强抗细菌级) 级：90(抗细菌级)5抗霉菌性能检测方法及效果分级51原理用所选的菌种接种于样品，在模拟自然界霉菌生长的条件下经过一定时间的培养、观察，用目测霉菌生长的方法来检测受检样
7、品的抗霉菌性能。52条件521主要仪器和设备a)恒温恒湿培养箱：能保持温度在28土1、相对湿度85。b)冷藏箱：能保持温度在05。c)超净工作台：洁净等级不低于100级。d)离心机：最小转速在5 000 rrain以上。e)生物光学显微镜：200400。f)压力蒸汽灭菌器：能保持121的温度和103 kPa的压力。g) 电热干燥箱：温度保持能力为160180。h)水浴振荡器。i) 血球计数板：医学和微生物学实验用。j)培养平皿：内径90 mm。k)培养试管：250 mm16 mm。1)接种针。m)移液管、锥形瓶、酒精灯等。522主要材料及准备5221无菌滤纸定性试纸，尺寸为(25 mm1 ra
8、m)(25 mm1 mm)，置于121、103 kPa压力蒸汽灭菌器中保持30 rain灭菌后备用。5222干热灭菌处理培养平皿、培养试管和移液管及接种环等需要灭菌的用品，使用前需用普通报纸或牛皮纸袋包装好后，置于160180电热干燥箱中，保持30 min60 min。53试剂和培养基531试剂5311消毒剂：75乙醇溶液。4BCBR率菌抗舯一5312润湿剂：吐温80、N一甲基乙磺酸(Nmethyltaurine)、二辛磺化丁二酸钠(dioctyl sodium sulphosuccinate)中任选一种。5313洗脱液：005润湿剂水溶液，调节pH值65，121、103 kPa压力灭菌30
9、min。532营养盐培养液5321配方成分硝酸钠(NaN03)，z，0 g；磷酸二氢钾(KH：PO；)，07 g；磷酸氢二钾(K：HPO；)，03 g；氯化钾(KCI)，05 g；硫酸镁(MgSOt7Hzo)，05 g；硫酸亚铁(FeS047H20)，001 g；蔗糖，30 g；上述成分均为试剂级。5322制法取上述成分加入l 000 mL 005润湿剂水溶液中，加热溶解后，用01 moll，氢氧化钠溶液调节pH值使其在25土1时pH值为65，分装后置压力蒸汽灭菌器内121、103 kPa压力灭菌30min。53，3营养盐琼脂培养基制备l 000 mL营养盐培养液中加入15 g琼脂，加热熔化，
10、01 molI氢氧化钠溶液调节pH值使其在25土1时pH值为65，分装后置压力蒸汽灭菌器内121、103 kPa压力灭菌30 min。534马铃薯一葡萄糖培养基(PDA)制备马铃薯用水洗净，去皮切成小块。称取200 g，加l 000 mL蒸馏水，加热煮沸1 h。然后用双层纱布过滤挤出并得到滤液，将滤液加蒸馏水1 000 ml，加入葡萄糖20 g琼脂20 g并加热熔化，用01 molL氢氧化钠溶液调节pH值，使其在251时pH值为7o72，121灭菌30 min。54检验菌种抗菌木(竹)质地板的抗霉菌性能检验菌种见表3。表3抗菌木(竹)质地板的抗霉菌性能检验菌种序号 菌种名称 菌种代码1 黑曲霉
11、(Aspergillus Niger) AS 34463等同ATCC 62752 土曲霉(Aspergillus Yerreu$) AS 3 39353 绳状青霉(Penicillium Fgnicolosum) AS 338754 出芽短梗霉(Aureobasium Pullulans) AS 339845 球毛壳(Chaetoomium Globsum) AS 3 4254或ATCC 62056 绿色木霉(Tricho derma virid Persex Fr) AS 32942注：根据用户要求，还可选用其他菌种作为检验菌种，但所用菌种均需由国家级菌种保藏管理中心提供，并注明菌种国际代码
12、。55试件制作与处理551阴性对照样试件无菌滤纸。552空白对照样试件采用与受检样品试件相同的材料、相同的加工工艺制成的非抗菌木(竹)质地板，裁制成尺寸为5LYT 19262010(50 mrn1 ram)(50 mlTl士1 mm)的试件，编号为A。553受检样品试件抗菌木(竹)质地板，裁制成尺寸为(50 1T111士1 ram)(50 mml ram)的试件，编号为B。以上各类试件数量均应不少于10个。检验前应进行消毒，用75乙醇溶液擦拭样品表面，1 rain后用无菌水冲洗，自然干燥后备用。56抗霉菌性能检验561菌种保藏菌种分别接种在马铃薯一葡萄糖培养基斜面上，在2830下培养7天l哇天
13、后，在05下保藏(不得超过4个月)，作为保藏菌。562菌种活化将保藏菌种接种在PDA斜面培养基试管中，培养7天14天，使生成大量孢子。未制备孢子悬液时，不得拔去棉塞。每打开一支只供制备一次悬液，每次制备孢子悬液应使用新培养的霉菌孢子。563孢子悬液的制备培养7天14天内的斜面培养基(562)中加入少量无菌蒸馏水，用灭菌接种针轻轻刮取表面的新鲜霉菌孢子，将孢子悬液置于250 mL锥形瓶内，然后注入40 mL洗液。锥形瓶中加入直径5 mm的玻璃珠10粒15粒与孢子混合，密封后置水浴振荡器中不断振荡使成团的孢子散开，然后用单层纱布棉过滤以除去菌丝，装入灭菌离心管中，用离-fl,机分离沉淀孢子，去上清
14、液。再加入40 mL洗液，重复离心操作3次。用营养盐培养液稀释孢子悬液，制成菌悬液浓度为1106个mL土2105个mL的孢子悬液。用血球计数板计数，用式(2)计算菌悬液浓度。菌悬液浓度(个rnI，)一旦生鳖掣王堕塑250l ooo稀释倍数 (2)6种霉菌均用以上方法制成孢子悬液，将6种孢子悬液混合在一起，充分振荡使其均匀分散。混合孢子悬液应在当天使用，若不在当天使用应在37下保存，4天内使用。564平板培养基的制备无菌平皿中注入营养盐培养基，厚度3 mm6 mm，凝固后待用(48 h内使用)。565霉菌活性控制阴性对照样(无菌滤纸)铺在平板培养基上，用装有新制备的混合孢子悬液的喷雾器喷孢子悬液
15、10 mL，使其充分均匀地喷在培养基和滤纸上。在温度2830、相对湿度85以上的条件下培养14天，滤纸条上应明显有菌生长，否则应重新制备孢子悬液。566试件检测同时空白对照样(A)、受检样品试件(B)也分别铺在培养基上，喷孢子悬液10 mL，使其充分均匀地喷在培养基和样品上。每个样品做五个平行。在温度2830 oC、相对湿度85以上的条件下培养28天。若空白对照样和被测样表面显示长霉面积不小于10，可提前结束实验。以上试验重复一次。57检验结果与判断571检验结果要求取出样品需立即在显微镜下进行观察。空白对照样(A)长霉面积应大于等于10，否则不能作为该试验的空白对照样品，整个试验需重做。572样品长霉等级样品长霉等级见表4。6表4抗茵木(竹)质地板样品长霉等级表LYT 19262010长霉等级 描述 霉菌生长情况。级 不长 显微镜(放大50倍)下观察未见生长1级 痕迹生长 肉眼可见生长，覆盖面积小于10z级 轻微生长 覆盖面积大于等于10且小于303级 中度生长 覆盖面积大于等于30且小于604级 严重生长 覆盖面积大于等于60至全面覆盖573抗霉菌效果分级抗菌木(竹)质地板抗霉菌性能按长霉等级分为。级和l级，具体指标应符合表5的规定。表5抗茵木(竹)质地板抗霉菌性能要求项目名称 抗霉菌等级抗霉菌性能 。级(强抗菌霉菌级) 1级(抗霉菌级)
