1、道国中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品添加剂咖啡因GB 14758-2010 2010-12-21发布2011-02-21实施中华人民共和国卫生部发布目。吕本标准代替GB14758-1993(食品添加剂咖啡因。本标准与GB14758-1993相比，主要变化如下:一一外观描述由白色结晶粉末改为白色或极微黄绿色结晶粉未;一一咖啡因含量的允许差由相对差0.3%改为绝对差0.2%;一一-增加了红外光谱鉴别;一一增加了澄清度项目;一一碑指标由0.0003%修改为2mg/kg; 一一增加了色谱纯度的要求。本标准的附录A和附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为z
2、一一-GB14758-1993 GB 14758-2010 I GB 14758-2010 食品安全国家标准食品添加剂咖啡因1 范围本标准适用于以氯乙酸或氧乙酸为原料化学合成法及以茶叶为原料提取法制得的食品添加剂咖啡因。2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。3 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量3. 1 化学名称1，3，7-三甲基黄瞟岭3.2 分子式CSHION402或CSHION402 H20 3.3 结构式H |C 3.4 相对分子质量元水
3、咖啡因:194.19C按2007年国际相对原子质量)一水咖啡因:212.21(按2007年国际相对原子质量)4 技术要求4. 1 感官要求:应符合表1的规定。1 GB 14758-2010 表1感宫要求项目要求检验方法色泽白色或带极微黄绿色且有丝光取适量样品置于清洁、干燥的烧杯中，在滋味、气味味苦，无臭自然光线下，观察色泽和组织状态，嗅其气组织状态针状结晶或结晶性粉末或颗粒。具有风化性味。用温开水漱口后，品尝滋味4.2 理化指标:应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法咖啡因(CgHlON.O，以干基计),;01% 98. 5101. 0 附录A中A.40.5(元水)干燥减量，/%主三附
4、录A中A.58.5(含水)灼烧残渣，w/%、户0.1 附录A中A.6其他生物碱元沉淀产生附录A中A.7单个杂质、0.1 色谱纯度，w/%附录A中A.8总杂质二、0.1 呻(As)/ (mg/kg) 主二2 附录A中A.9熔点/C235. 0237. 5 附录A中A.10澄清度试验(20g/L溶液)通过试验附录A中A.ll重金属(以Pb计)/(mg/kg)、二、10 附录A中A.12易炭化物通过试验附录A中A.132 A.1 安全提示附录A(规范性附录)检验方法GB 14758-2010 本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，使用时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗
5、，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。A.2 一般规定本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682-2008中规定的三级水。试验方法中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T602、GB/T603的规定制备。A.3 鉴别试验A. 3.1 试剂和材料A. 3. 1. 1 盐酸。A. 3.1.2 氯酸饵。A. 3. 1. 3 氨溶液:10100。A. 3. 1. 4 盐酸溶液:10100。A. 3. 1. 5 氢氧化铀溶液:40g/Lo A. 3. 1. 6 腆溶液:0.1mol/Lo
6、 A.3.2 分析步骤A. 3. 2.1 紫腮酸呈色试验取约10.0mg实验室样品，加1mL盐酸溶液与0.1g氯酸饵，置水浴上蒸干，残渣遇氨气即显紫色，再加氢氧化铀溶液数滴，紫色即消失。A. 3. 2. 2 咖啡因与慎试液及盐酸的沉淀反应取5mL实验室样品的饱和水溶液，加5滴腆溶液，不发生沉淀F再加3滴盐酸溶液，即出现红棕色的沉淀，能在稍过量的氢氧化铀溶液中溶解。A.3.2.3 红外光谱鉴别采用澳化饵压片法，按照GB/T6040进行试验，实验室样品的红外光谱应与对照图谱(见附录B)一致。3 GB 14758-2010 A.4 咖啡因的测定A.4.1 试剂和材料A. 4. 1. 1 乙酸膏。A.
7、4. 1. 2苯。A. 4.1.3 高氨酸标准滴定溶液:c(HCI04)=0.1 mol/L。A.4.2 仪器和设备电位滴定仪。A.4.3 分析步骤取约0.4g实验室样品，精确至0.0002g，加40mL乙酸霄，加热溶解，冷却，加80mL苯，用高氯酸标准滴定溶液滴定，用电位法指示终点，并将滴定的结果用空白试验校正。A.4.4 结果计算咖啡因(以CSHION402计)的质量分数叫，数值以%表示，按公式(A.l)计算:(V - Vo) x c X M u 0/ %.( A.1 ) 1 m X (1- W2) X 1 000 VV / U 式中zV一一实验室样品消耗高氨酸标准溶液的体积，单位为毫升(
8、mL); V。一一空白试验捎耗高氯酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL); c 一一高氯酸滴定溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升(mol/L); m一一实验室样品的质量的数值，单位为克(g);W2 干燥减量的数值，%;M一一咖啡因的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔Cg/mol)MCCs HlON4 O 2 ) = 194. 2J。取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行削寇的绝对差值不大于0.2%。A.5 干燥减量的测定A.5.1 分析步骤取1.0g实验室样品，精确至0.0002 g，置于已在80.C干燥至恒重的称量瓶内，精密称量，置于80.C烘箱中干燥至恒重。A.5.2 结果计算样品干燥减量的
9、质量分数以W2计，数值以%表示，按公式(A.2)计算:式中zW2=巴二旦旦X100% 11 -m3 ml一一干燥前实验室样品和称量瓶总质量的数值，单位为克(g); m2一一干燥后实验室样品和称量瓶总质量的数值，单位为克(g); m3一一称量瓶质量的数值，单位为克(g)。.( A.2 ) 取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.05%。4 GB 14758-2010 A.6 灼烧残渣的测定A. 6.1 试剂和材料硫酸。A.6.2 分析步骤取1.0g实验室样品，精确至0.001g，置于已在750.C士50.C烧至恒重的瓷蜻塌中，用小火缓缓加热至完全炭化。冷却至室温
10、后，加硫酸O.5 mLl mL使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，移入高温炉中，在750.C土50.C高温炉中灼烧至恒重。A.6.3 结果计算灼烧残渣的质量分数以叫计，数值以%表示，按公式CA.3)计算:W3二生二旦立x100% m .C A.3 ) 式中:m4一一土甘塌和残渣总质量的数值，单位为克Cg);ms一一带塌质量的数值，单位为克(g);m一一样品质量的数值，单位为克(g)。取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.02%。A.7 其他生物髓的测定A. 7.1 试剂和材料腆化录梆试液t取1.36 g二氯化隶，加60mL水使溶解，另取5g腆化饵，加10mL水
11、使溶解，将两液混合，混合后加水稀释至100mLo A.7.2 分析步骤称取1g实验室样品，加.50mL水，取10mL该溶液加3滴腆化录饵试液，不得产生沉淀。/ / / / A.8 色谱纯度的测定A. 8.1 试剂和材料A. 8. 1. 1 无水乙酸锅。A. 8. 1. 2 乙睛:色谱纯。A. 8. 1. 3 四氢吱喃z色谱纯。A. 8.1.4 冰乙酸。A. 8.1.5 茶碱对照品。A. 8. 1. 6 咖啡因对照品。A.8.2 仪器和设备高效液相色谱仪。5 GB 14758-2010 A. 8. 3 色谱分析条件推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表A.1，咖啡因系统适用性试验高效液相色谱图参见图
12、C.1，各组分的相对保留时间参见表C.1。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用。表A.1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱十八烧基硅烧键合硅胶色谱柱(填料粒径5m，4.6mmX150 mm不锈钢柱流动相称取约1.64 g无水乙酸销，精密称定，加水溶解并稀释至2000mL，混匀。取1910mL，加乙腊50mL，四氢吠喃40mL，混合后用冰乙酸调pH=4.5，混匀，过滤，脱气流速约1mL/min 检测器检测波长275 nm A.8.4 分析步骤A. 8. 4.1 对照品溶液:称取约2mg茶碱对照品，精确至0.0001g，置100mL容量瓶中，加约50mL 流动相振摇，并用超声波洛解，用流动
13、相稀释到刻度，混匀。A. 8. 4. 2 系统适用性试液的制备z称取约5.0mg咖啡因对照品，精确至0.0001 g，置25mL容量瓶中，加5.0mL对照品溶液和10mL流动相，振摇，超声溶解，再用流动相稀释到刻度，混匀。A.8.4.3 实验室样品液的制备z称取约10mg咖啡因实验室样品，精确至0.0001 g，置50mL容量瓶中，加10mL流动相，振摇，超声溶解，再用流动相稀释到刻度，混匀。A. 8. 4.4 仪器准备:按照高效液相色谱仪操作规程准备仪器，设定流速为1mL/min，检测波长为275 nm，用流动相平衡仪器后，开始进样操作。A.8.4.5 系统适应性试验:取10L系统适用性试液
14、进样，记录色谱图，茶碱和咖啡因的相对保留时间依次约为0.69，1.0;两峰间的分离度不得小于6.0;每个峰的拖尾因子T2.00A.8.4.6 测定z取流动相和样品溶液各10L进样，记录色谱图至咖啡因主峰保留时间的两倍。按面积归一化法计算各杂质含量。A.8.5 结果计算(面积归-化法)杂质含量的质量分数以W4计，数值以%表示，按公式CA.4)计算:ttJ A杂x100% 4=艺互入.LVV/O式中zA杂一一杂质峰的峰面积(除溶剂峰及主峰外); A-一所有峰的面积之和(榕剂峰除外)。A.9 碑的测定C A.4 ) 取1.0g土0.01g实验室样品，加20mL 水，加热溶解，冷却至室温后转移至100
15、mL锥形瓶中，加5 mL盐酸、5mL腆化饵试液，5滴酸性氯化亚锡溶液，按照GB/T5009. 76-2003碑斑法的规定进行。A.10 嬉点的测定按中华人民共和国药典)2005年版二部附录VIC熔点测定法第一法进行。方法如下:6 GB 14758-2010 取实验室样品适量，研成细粉，在80.C烘箱中干燥4h后，分取适量，置熔点测定用毛细管(简称毛细管，由中性硬质玻璃管制成，长9cm以上，内径O.9 mm1.1 mm，壁厚O.10 mmO. 15 mm，一端熔封F当所用温度计浸入传温液在6cm以上时，管长应适当增加，使露出液面3cm以上)中，轻击管壁或借助长短适宜的洁净玻璃管，垂直放在表面皿或
16、其他适宜的硬质物体上，将毛细管自上口放入使自由落下，反复数次，使粉末紧密集结在毛细管的熔封端。装入实验室样品的高度为3mm.另将温度计(分浸型，具有0.5.C刻度，经熔点测定用对照品校正)放人盛装传温液(硅油或液状石蜡)的容器中，使温度计柔球部的底端与容器的底部距离2.5cm以上用内加热的容器，温度计乘球与加热器上表面距离2.5cm以上);加入传温液以便传温液受热后的液面适在温度计的分浸线处。将传温液加热，待温度上升至较规定的熔点低限约低10.C时，将装有实验室样品的毛细管浸人传温液，贴附在温度计上(可用橡皮圈或毛细管固定)，位置须使毛细管的内容物适在温度计隶球中部E继续加热，调节升温速率为每
17、分钟上升1.0.C1.5 .C，加热时须不断搅拌使传温液温度保持均匀，记录实验室样品在初熔至全熔时的温度，重复测定3次，取其平均值。A.11 澄清度的测定A. 11. 1 试剂和材料A. 11. 1. 1 乌洛托品溶液:10 g/L. A. 11. 1.2 浊度标准贮备液的制备:称取于105.C干燥至恒重的1.00 g硫酸脏，置100mL量瓶中，加水适量使溶解，必要时可在40.C的水洛中温热榕解，并用水稀释至刻度，摇匀，放置4h6 h;取此溶液与等容量的乌洛托品溶液(100g/L)混合，摇匀，于25c避光静置24h，即得。本液置冷处避光保存，可在两个月内使用，用前摇匀。A. 11. 1.3 浊
18、度标准原液的制备:取15.0mL浊度标准贮备液，置1000mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取适量，置1cm吸收池中，照紫外可见分光光度法(中华人民共和国药典)2005年版二部附录凹A)，在550nm的波长处测定，其吸光度应在0.120.15范围内。本液应在48h内使用，用前摇匀。A. 11. 1. 4 O. 5号浊度标准液制备:取2.50mL浊度标准原液于100mL容量瓶中，加97.50mL水至刻度，摇匀，即得。本液应临用时制备，使用前充分摇匀。A. 11. 2 分析步骤按中华人民共和国、药典归。05年版二部附录IXB澄清度检查法。称取1.0 g :l: O. 01 g实验室样品，加50mL
19、水，加热煮沸，冷却至室温，与同体积的水或0.5号浊度标准液比较，若显摆浊，不得比0.5号浊度标准液更深。A.12 重金属的测定A. 12. 1 试剂和材料A. 12. 1. 1 硝酸。A. 12. 1. 2 甘油。A.12.1.3 乙酸镜。A. 12. 1.4 硝酸铅。A. 12. 1.5 硫代乙眈股。A. 12. 1.6 盐酸溶液:c(HCD=2 mol/L。A.12. 1. 7 氨水溶液:c(NH3 H20)=5 mol/L. 7 GB 14758-2010 A.12.1.8 氢氧化铀溶液:c(NaOH) = 1 mol/L。A. 12. 1. 9 盐酸溶液:c(HCl)=7 mol/L。
20、A. 12. 1. 10 乙酸盐缓冲液(pH3.5):称取约25g乙酸镜，精确至0.01g，加25mL 71溶解后，加7 mol/L盐酸溶液38mL，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨水溶液准确调节pH至3.5(pH计)，用水稀释至100mL。A. 12. 1. 11 硫代乙酷股试液:称取约4g硫代乙酷肢，精确至0.01g，加水使溶解成100mL，置冰箱中保存。临用前取5.0mL混合液(由1mol/L 15 mL氢氧化铀溶液、5.0mL水及20mL甘油组成)，加上述1.0mL硫代乙酷胶溶液，置水浴上加热205，冷却，立即使用。A. 12. 1. 12 铅标准溶液:称取约O.160 g硝酸铅
21、，精确至0.0002g，置于1000 mL容量瓶中，加5mL 硝酸与50mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，移取10mL:l: O. 02 mL贮备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL相当于10问的Pb)。配制与贮存用的玻璃仪器均不得含铅。A. 12.2 分析步骤按中华人民共和国药典)2005年版二部附录回H重金属检查法第一法进行。方法如下:取25mL纳氏比色管两支，甲管中加入0.5mL土0.005mL(含铅5.0g)铅(Pb)标准溶液与2mL 乙酸盐缓冲液后，加水稀释成25mL，另称取o.5 g实验室样品，精确至0.01g，置于纳氏比色管乙管中
22、，加20mL水，加热溶解后，冷却至室温，加2mL乙酸盐缓冲液(pH3.5)与水适量使成25mL(必要时滤过)，若该溶液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他元干扰的有色溶液，使之与乙管一致;再在甲乙两管中分别加硫代乙酷脑试液各2mL，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。A.13 易炭化物的测定A. 13. 1 试剂和材料A.13.1.1 硫酸溶液:94.5%95. 5%(质量分数)。A.13. 1. 2 氯化钻液:取氯化钻(CoC12 6H2 0)，溶于盐酸溶液(140)中，使成1000 mL，取该液5.00 mL，置250mL腆量瓶中，加
23、入5mL过氧化氢试液和15mL氢氧化铀溶液(200g/L)，煮沸10 min冷却，加入2g腆化饵和20mL硫酸溶液(1的，待沉淀溶解，用0.1mol/L硫代硫酸铀标准滴定溶液滴定释出的腆，至近终点时，加3mL淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失。用等量的同一试剂作空白，并作必要的校正，1mL硫代硫酸铀(0.1 mol/L)相当于23.79mg氯化钻(CoClz.6H20)。在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液(110)，使1r溶液中含有59.5mg氯化钻(CoClz 6H2 0)。A.13.1.3 三氧化铁比色液:取约27.5g三氧化铁，加适量的盐酸溶液(140)使溶解成500mL。量取10.0mL，置
24、腆量瓶中，加2g腆化饵与5rnL盐酸，密塞，在暗处静置15min，加100mL水，用硫代硫酸铀标准滴定溶液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加2mL淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失。用等量的同一试剂作空白，并作必要的校正。1mL硫代硫酸铀(0.1 mol/L)相当于27.03mg三氯化铁(FeC13 6 H2 0)。根据上述测定结果，在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液(140)，使1mL溶液中含45.0mg的三氧化铁(FeC13 6H20)。A.13.1.4 硫酸铜比色液z取65g硫酸铜(CUS04 5H20) (GB 665)溶于盐酸榕液(140)中，使成100 mL，取该溶液10.00mL
25、，置250rnL腆量瓶中，加40mL水、4mL乙酸、3g腆化饵和5mL盐酸，用硫代硫酸铀标准滴定榕液(0.1mol/L)滴定释出的腆，至近终点时加3mL淀粉指示剂继续滴定蓝色消失。用等量的相同试剂作空白，并作必要的校正。每1mL o. 1 mol/L硫代硫酸铀相当于24.97mg GB 14758-2010 硫酸铜(CUS04.5H20)。在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液(140)，使每1mL溶液含62.4mg 硫酸铜(CUS04.5H20)。.13. 1. 5 比色液:取0.3mL氧化钻比色液，0.6mL三氧化铁比色液，0.4mL硫酸铜比色液，加水稀释至5mLo . 13.2 分析步骤取0.
26、5g :l: O. 01 g实验室样品，加硫酸溶液至5mL，振摇使溶解，溶液颜色不得较同体积比色液更深。9 。因主吐白|MOZ附录(规范性附录)咖啡因红外光谱B . o 波长/m25 100 40 80 60 18 20 16 14 12 10 9.0 8.0 7.0 6.0 M丰4.0 3.0 2.5 5100 锄司司喇60 40 20 80 ol n-山m阳41C, 数波0 4 000 600 800 1 200 1 400 1 600 1 800 2 000 2 500 3 000 3 500 咖啡因红外光谱图B.l注:引自药品红外光谱集第一卷(1995)。GB 14758-2010 附
27、录(资料性附录)系统适用性试验高效液相色谱图和各组分峰的相对保留时间C 由町Lh.mAU 35 30 25 国HE.由20 15 10 国面向.国5 L / l 。mm 10 8 6 4 2 。系统适用性试验高效液相色谱圄图C.1各组分峰的相对保留时间组分名称峰保留时间相对保留时间口lln未知峰5.185 茶碱5.915 0.68 咖啡因8. 736 1. 00 表C.1。-ON|的h立阁。国华人民共和国家标准食品安全国家标准中咖啡因食品添加剂GB 14758-2010 * 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张1字数22千字2011年2月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2011年2月第一版 书号:155066. 1-41436 18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价GB 14758-2010 打印日期:2011年2月23日F002
