1、ICS 65. 020. 30 B 44 G昌中华人民共和国国家标准GB/ T 14926.50,-.,14926. 55- 2001 实验动物微生物学检测方法(3)Laboratory animal- Microbiological examination methods 2001- 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局GB/T 14926.53- 2001 前本标准修订了GB/T14926.24一1994(实验动物其作为-个独立标准列出。12 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:
2、贺争鸣。小鼠肺炎病毒检测方法中的血凝试验方法，将中华人民共和国国家标准实验动物血凝试验G/ T 14926. 53- 2001 Laboratory animal- Haemoglutination test(HA) 1 范围本标准规定了血凝试验(HA)所用试剂、器材和操作步骤等。本标准适用于实验动物病毒抗原的检测。2 原理某些病毒在一定的条件下，能够选择性地凝集某些动物红细胞，产生可见的凝集反应。3 主要试剂与器材3. 1 试剂3. 1. 1 血凝素血凝素抗原除部分病毒(如症类病毒能与感染性颗粒分开外，大部分是与病毒的感染性颗拉相关联，凡培养于鸡胚或组织培养中的病毒及其抗原物质，经离心除去沉
3、淀，均可用作血凝试验的抗原见表1、表2)。表1血凝素制备方法病毒细胞收毒(d)病变(+)抗原处理滴度640 ICHV MDCK 3-4 3-4 培养物冻融后离心，取上1280 清，经60C水浴作用10-20 min RV BHK21 4-5 2-3 冻融2-3次，2000 r/ min 320 基础液中含0.2%-0.4%离心20min取上清牛血清白蛋白表2血凝素制备方法病毒动物接种途抗原取材时间抗原处理滴度(HA)(日龄径剂量(d ) TMEV 小鼠icO. 02 mL 脑5-7 研磨成10%悬液，冻化2-3次128-512 (14-21) 1 000 r/min离心10min，上清对倍加0
4、.5%膜酶，4C可短期保存Sendai 鸡胚(9)尿囊0.2mL 尿囊液3 2 000 rpm离心10min，取上清液640 RHDV 兔sc 2 mL 肝2-4 研磨成10%悬液3000 r/min离8 190 心10min取上消中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08 -29批准2002 - 05 -01实施13 GB/ T 14926.53- 2001 3.1.2 红细胞悬液根据不同病毒血凝所需敏感红细胞制备悬液，一般将血液保存于阿氏溶液内，使用前用pH7.4PBS洗三次，再悬于pH7.4PBS中。3. 1. 3 PBS(O. 01 mol/ L ,pH7. 4) 氧化铀氯化
5、悍磷酸二氢饵磷酸氢二销(Na2HP04 12H20) 蒸锢水3. 1.4 阿氏溶液葡萄糖拘橡酸铀拘橡酸氯化纳蒸馆水115C灭菌30min，保存于4C。3. 2 器材3.2.1 恒温培养箱。3.2.2 微量震荡器。3.2.3 微量血凝反应板(U型或V型)。8 g 0. 2 g 0.2 g 2.83 g 加至1000 mL 2.05 g 0.8 g 0.055 g 0.42 g 100 mL 3.2.4 微量加样器(容量550L)或微量稀释棒。4 操作步骤4. 1 将血凝素用PBS做连续倍比稀释，每稀释度留25L于微量血凝板孔内。4.2 每孔内再加25LPBS与50L红细胞悬液，摇匀。同时设立红细
6、胞对照。4.3 置所需温度作用3060min。5 结果判定14 将出现血凝十十的最高稀释度定为该血凝素的效价。各孔血凝结果以十+、十十十、+、+、一表示。+:红细胞一片凝集，均匀铺于孔底。十+:红细胞凝集基本同上，孔底有大圈。+:红细胞于孔底形成一个中等大的圈，四周有小凝块。+:红细胞于孔底形成一个小圈，四周有少许凝块。一:红细胞完全不凝集，沉于孔底。CCAVl-川HKu。F飞F、(CMHu。F飞hgu华人民共和国家标准实验动物微生物学检测方法(3)GB/ T 14926. 5014926. 55- 2001 国中9峰中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售* 开本880X12301/16印张1地字数39千字2002年2月第一版2002年2月第一次印刷印数1-2000 7G 定价13.00网址书号:1550 66 1- 18098 9峰595-549 版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533科目GB/ T 14926.50-2001 H
